I.

ASPECTOS DE INVESTIGACIN

1.0 REALIDAD PROBLEMTICA

1.1. Planteamiento del problema

De la misma forma en que se ha considerado que la computacin ha
impulsado el avance en tecnologa y comunicaciones, la
biotecnologa es la principal responsable del avance cientfico
moderno, pues sta engloba principios de ingeniera e investigacin
cientfica, para el desarrollo de productos mejorados, elaborados con
sistemas que involucran el empleo de organismos vivos o sus
productos (enzimas, metabolitos, etc.), bajo procesos que permiten
su comercializacin, y no sean dainos tanto para el hombre como
su medio ambiente. Es de esta manera que aprovechando los
beneficios que la biotecnologa nos ofrece, y teniendo en cuenta que
estamos en el boom de los productos naturales, se ha optado a la
elaboracin de un bioiensecticida a base del bacillus thuringiensis,
utilizando como sustrato la sangre de los camales, que nos ofrezca
una alternativa econmica ms rentable, que no sea daino para la
salud, y que utilice como materia prima un sustrato que
prcticamente se desecha, como lo es la sangre residual de los
camales, teniendo en cuenta quecada vez ms se cuestiona el uso
de insecticidas qumicos para el control de plagas y enfermedades de
los cultivos debido a su uso indiscriminado y a su efecto negativo
sobre los seres humanos y el medio ambiente, dado queha
ocasionado varios problemas, entre ellos: la contaminacin del suelo
y mantos freticos, efectos txicos en animales y el hombre,
genotipos resistentes y muerte al mismo tiempo de los enemigos
naturales de las mismas plagas y de otros organismos que ante la
ausencia de sus reguladores se convierten en plagas secundarias,
originando plagas que sean cada vez ms difcil combatirlos, y
trayendo como consecuencia que estas muten y se hagan cada vez
ms fuertes e inmunes a los insecticidas qumicos, ocasionando de
esta manera que se creen nuevos insecticidas qumicos, ms
potentes y originando alteraciones y nuevos efectos negativos sobre
los seres humanos y el medio ambiente.
Es por estas razones, que en la actualidad, se est desarrollando en
forma continua y acelerada, el descubrimiento de nuevos productos
bioqumicos por mtodos innovadores, surgiendo la necesidad de
una nueva forma de produccin de bioinsecticidas, debido a que se
emplea en gran cantidad y que se utiliza comnmente como una
alternativa biolgica al pesticida o insecticidas, debido a los grandes
contaminantes que existen en estos.
La produccin de bioinsecticidas por bacillusthuringiensis con
concentraciones de sustrato de sangre de los camales, se utilizar
como una alternativa en el control de plagas principalmente en la
agricultura en el departamento de Lambayeque.

1.2. Formulacin del Problema.

Cmo influye la concentracin del sustrato de sangre en el
rendimiento de la produccin de bioinsecticidas por
bacillusthuringiensis?

1.3. Justificacin e importancia del estudio

Los productos qumicos no siempre dan buenos resultados, por lo
que, se presta hoy en da, mucha importancia a una agricultura ms
biolgica. La incorporacin del control biolgico, es un medio de
lucha integrada respetando el medio ambiente, debido a que no se
emplean insecticidas, lo que da ms seguridad, evitando estos
productos txicos para la salud humana, pues como ya se sabe, el
uso indiscriminado de plaguicidas sintticos ha ocasionado un
impacto desastroso en la salud humana, los ecosistemas agrcolas y
no slo la aparicin de poblaciones de insectos cada vez ms
resistentes a estos productos, sino tambin un impacto ambiental
negativo, cada da ms notorio.
Desde principios del siglo XX, los insecticidas han jugado un papel
importante en el control de insectos vectores de enfermedades y
plagas. Es debido a esto que la Organizacin Mundial de la Salud
(OMS) promueve medidas alternativas como el control biolgico o el
manejo ambiental, en el tiempo y lugar donde ellas sean efectivas y
aplicables; tambin promueve el uso de insecticidas cuando el
control biolgico no es una alternativa. En tal sentido, los insecticidas
continan siendo un elemento vital en programas de control.
Por este motivo, y ante la preocupacin del uso frecuente e
indiscriminado de insecticidas, y las consecuencias que traen, la
finalidad del presente estudio es dar a conocer que por medio del
Bacillus thuringiensis, y con concentraciones de sustrato de sangre
adecuadas, podemos elaborar insecticidas naturales(bioinsecticidas)
para el control de insectos y plagas, mostrando la sustentabilidad que
ofrecen y la minimizacin del impacto haciala salud y al medio
ambiente, utilizando adems sustratos que prcticamente son
desechados y que no vayan contra el consumo de los alimentos de la
poblacin, como por ejemplo la soja; y de esta manera concientizar
a la poblacin para disminuir el uso de insecticidas y optar por
mtodos alternativos, como los bioinsecticidas.

1.4. Objetivos

Objetivo General.

Elaborar un bioinsecticida a partir de diferentes
concentraciones de sustrato de sangre obtenida de los
camales.

Objetivos especficos.
Describir el proceso de produccin del bioinsecticida,
para incentivar a realizar estudios similares, con nuevos
sustratos y nuevas cepas, para cultivos distintos.

Dar a conocer la efectividad y la no contaminacin de
nuestro bioinsecticida en algunos cultivos de la zona.

2.0 MARCO TERICO

2.1 ANTECEDENTES DE ESTUDIO:

Shigetane Ishiwata (1902).Es el primer antecedente que se
tiene del Bt que se remonta al ao de 1902 en Japn, quien lo
llam Bacillus sotto y lo asoci a la muerte de larvas del
gusano de seda. Trece aos ms tarde se volvi a describir,
asignndosele su nombre actual (Bacillus thuringiensis)
nombre dado por Turingia, en Alemania, la ciudad donde fue
aislado.

Cientficos de Francia, en 1930, comenzaron a utilizar un
producto comercial a base de las esporas de Bt para controlar
la plaga llamada gusano barrenador europeo del maz.Y en
1956 se pone de manifiesto que el cristal que se halla en el
interior de la clula es el responsable de la actividad txica en
contra de los insectos, y que la germinacin de la espora en la
linfa del insecto puede producirle septicemia.

Cientficos de Estados Unidos, en 1980,aprovechando las
bondades que ofrece la biotecnologa, introdujeron ciertos
genes del Bt en plantas de tabaco y tomate, logrando con ello
que las plantas produjeran las protenas insecticidas
directamente en sus tejidos; de esta manera, los insectos
plaga que atacaban los vegetales en cuestin ingeran
directamente la toxina.

Willian Blas Cerdn, Juan Rodrguez Soto, Juan Pedro
Huamn, Wilbbert Vigo Alfaro, Walter Moya Fernndez,
Luis Snchez Abanto y Armando Pita Len (2011),
pertenecientes al Departamento de Ciencias Biolgicas de la
Facultad de Ciencias Biolgicas, de la Escuela AP de
Microbiologa y Parasitologa, de la Universidad Nacional de
Trujillo en Trujillo, desarrollaron la siguiente investigacin:
Produccin de biomasa de Bacillus thuringiensis H-14 var.
israelensis mutante en un medio fermentativo a base de
sanguaza; en el cual se evalu el efecto del naranja de
acridina, y un medio fermentativo a base de sanguaza, sobre
la produccin de la biomasa de Bacillus thuringiensis H-14
var. Israelensis, se utiliz un testigo y cuatro concentraciones
del mutgeno al 80 ppm, 120 ppm, 160 ppm y 200 ppm,
despus de haber hallado la dosis letal media (80 ppm) y la
dosis letal mxima (700 ppm) empleando la lnea de
regresin. Las colonias mutantes se obtuvieron a partir de un
medio agar Nysma conteniendo diferentes concentraciones de
naranja de acridina, a 30C por 48 horas, las mismas que
presentaron un fenotipo diferente al grupo testigo. La
produccin de biomasa se realiz en biorreactores tipo
cilndrico aireado y agitado, con un volumen de trabajo de 1.4
L conteniendo los nutrientes y sales minerales adecuados
ms sanguaza (desecho pesquero rico en protenas que
reemplaza a la fuente nitrogenada). Las fermentaciones se
llevaron a cabo por 50 horas a temperatura ambiente (20
1C), pH inicial de 7.0 y un inoculo microbiano de 107 UFC.
Las muestras se tomaron cada 5 horas evalundose la
temperatura, pH y clulas viables, la biomasa se estim
mediante el mtodo de recuento en placa, obtenindose la
mxima concentracin a las 40 horas en cada uno de los
tratamientos con naranja de acridina (15.7 x 109 UFC al 16%),
excepto en el testigo, segn el programa estadstico SPSS.
Se logr determinar que la biomasa se encuentra
incrementada en proporcin directa con respecto a las
concentraciones del mutgeno, ocurriendo la mxima
produccin al 200 ppm (2.78 g/L).



































2.2 BASES TERICAS
2.2.1 BIOINSECTICIDA
Qu es un bioinsecticida?

Un bioinsecticida es un insecticida biolgico, que es producido por
microorganismoso plantas, que sintetizan sustancias en forma
natural para su defensa contra los insectos o plagas,y tiene efectos
nocivos sobre estos, evitando as su destruccin y regulando su
metabolismo.

Los bioinsecticidas junto a los controladores naturales o
controladores biolgicos han sido utilizados empricamente hace
muchsimos aos para el control de plagas.

Un bioinsecticida posee las siguientes caractersticas:

- No presenta ningn riesgo a insectos benficos para la
agricultura.
- Es muy selectivo.
- No posee accin toxica en humanos ni animales de
ningntipo.
- Es biodegradable.
- Es susceptible a la prdida de us propiedades por accin
de los rayos solares. Es recomendable mezclarlos con
protectores solares.

2.2.2 SANGRE

La sangre es un tejido conectivo, lquido que circula por capilares,
venas y arterias de todos los vertebrados. Su color rojo caracterstico
es debido a la presencia del pigmento hemoglobnico contenido en
los eritrocitos.
Es un tipo de tejido conjuntivo especializado, con una matriz coloidal
lquida y una constitucin compleja. Tiene una fase slida (elementos
formes), que incluye a los eritrocitos (o glbulos rojos), los leucocitos
(o glbulos blancos) y las plaquetas, y una fase lquida, representada
por el plasma sanguneo.
Su funcin principal es la logstica de distribucin e integracin
sistmica, cuya contencin en los vasos sanguneos (espacio
vascular) admite su distribucin (circulacin sangunea) hacia
prcticamente todo el organismo.
La sangre era denominada humor circulatorio en la antigua teora
grecorromana de los cuatro humores.

a. COMPOSICIN DE LA SANGRE

Si se pudiera ver una gota de sangre al microscopio lo que
podramos ver sera una gran cantidad de partculas redondeadas
envueltas en un lquido transparente. Estas partculas redondeadas
son los glbulos que viajan en un lquido llamado plasma o suero (lo
que da nombre a nuestra materia) el cual en su constitucin es un
80% agua.


La composicin ms elemental de la sangre podra esquematizarse
de la siguiente manera:

Esta proporcin habitualmente debe mantenerse constante y
cualquier desbalance puede propiciar serias enfermedades. Lo nico
que en teora puede variar es el nivel de oxgeno en la sangre que
vara si esta es arterial (rojo u oxigenada) a si esta es venosa (azul
con menos oxigeno). En el primer caso la sangre contiene una
proporcin aproximada de 39% de oxgeno mientras que en el
segundo caso la proporcin disminuye al 20%.
Como puede notarse, los dos mayores elementos de la sangre son el
plasma y los glbulos rojos y, cuando se requiere algn tipo de
anlisis de estos dos elementos se hace uso de mquinas
centrifugadoras que se usan para que con el movimiento circulatorio
intenso manden los elementos ms pesados de la sangre al fondo de
los tubos de ensayo en donde se suele colocar la sangre mientras
que los elementos ms ligeros mueven hacia la parte superior del
tubo de ensayo.



EL PLASMA

El plasma sanguneo es la porcin lquida de la sangre
en la que estn inmersos los elementos formes. Es el
mayor componente de la sangre, representando un 55%
del volumen total de la sangre, con unos 40-50 mL/kg
peso. Es salado y de color amarillento traslcido.
Adems de transportar las clulas de la sangre, lleva los
nutrientes y las sustancias de desecho recogidas de las
clulas.
El plasma sanguneo es esencialmente una solucin
acuosa, ligeramente ms densa que el agua, con un
91% agua, un 8% de protenas y algunas trazas de otros
materiales. El plasma es una mezcla de muchas
protenas vitales, aminocidos, glcidos, lpidos, sales,
hormonas, enzimas, anticuerpos, urea, gases en
disolucin y sustancias inorgnicas como sodio, potasio,
cloruro de calcio, carbonato y bicarbonato.

Cuando se coagula la sangre y se consumen los
factores de la coagulacin, la fraccin fluida que queda
se denomina suero sanguneo.Tambin el plasma
contiene sustancias de degradacin como la urea y la
creatinina.

LOS GLBULOS ROJOS
Estos glbulos tambin son llamados eritrocitos son
discos con un dimetro aproximado de 7.5 micras y en
la mayora de los mamferos carecen de ncleo. Estos
glbulos superan en una proporcin de 700 a 1 a los
glbulos blancos. Les corresponde la tarea de recoger el
oxgeno de los pulmones y llevarlo al resto de cuerpo y
transportar de regreso el anhdrido carbnico. Su vida
dura en promedio tres o cuatro meses despus de lo
cual se desintegran y son sustituidos por los nuevos que
se producen en la mdula sea.
Su eficacia como transportadores de oxgeno se debe a
la presencia de su principal protena que es la
hemoglobina y que da a la sangre su color rojo y que
tiene la propiedad de que se adhiere al oxgeno y no lo
suelta hasta que esta llega a su destino lo que es de
vital importancia ya que el oxgeno no se disuelve
fcilmente en el plasma y de no existir la hemoglobina el
oxgeno en la sangre podra durar apenas de 2 a 3
segundos. Una deficiencia en la cantidad de
hemoglobina produce la enfermedad conocida como
anemia.

LAS PLAQUETAS
Tambin llamados trombocitos. Las plaquetas son los
componentes celulares ms pequeos de la sangre. Hay
alrededor de unas 250,000 plaquetas por cada
centmetro cbico de sangre y circulan estas en la
sangre sin tener actividad alguna hasta que encuentran
un vaso sanguneo momento en el cual entran en
accin.
Ante un vaso daado las plaquetas se acumulan en el
orificio cerrndolo liberando entre otras cosas
serotoninas que es un vasoconstrictor. Luego, activan a
una protena de la sangre llamada fibringeno que es
insoluble para convertirlo en fibrina que es insoluble. La
fibrina fabrica una red tridimensional en donde quedan
atrapados todos los componentes de la sangre
completando as el proceso de coagulacin que a la
inversa puede suceder cuando no es necesario siendo
mortal.