Preparacion cromatografia en papel

Preparacion de reactivos
Buffer fosfato 0,1 M, pH = 7
Potasio fosfato-bibasico 8,7 gramos
Agua destilada 500 ml
Preparacion de resina
10 ml de Sephacryl 300-HR 10-1500 kDa. Sigma
Protocolo
3.2. Se coloca la columna en el soporte de forma que se encuentre en posicin vertical (la
superficie del gel ha de estar completamente horizontal, para asegurar que la muestra entre por
igual). Se quita el tapn inferior de la columna y se deja que caiga el tampn por gravedad hasta
que no quede sobre la superficie del gel.
3.3. Inmediatamente se aplica la muestra sobre la columna y se espera a que penetre en el gel. Se
aade entonces un cierto volumen de tampn y se comienza a recoger fracciones en orden
sucesivo (una fraccin cada tres o cuatro gotas).
La cromatografa en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena con un soporte
slido adsorbente (fase estacionaria: los ms utilizados son gel de slice (SiO2) y almina
La muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de este soporte. El resto de la
columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase mvil) que, por efecto de la
gravedad, hace mover la muestra a travs de la columna. Se establece un equilibrio entre el
soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente eluyente que fluye por la columna.
Debido a que cada uno de los componentes de una mezcla establecer interacciones diferentes
con la fase estacionaria y la mvil, sern transportados a diferentes velocidades y se conseguir
su separacin. As, de manera similar a otros tipos de cromatografa, las diferencias en las
velocidades de desplazamiento a travs del medio slido se corresponden con diferencias en los
tiempos de elucin por la parte inferior de la columna para cada uno de los componentes de la
muestra original, que se recogern en fracciones diferentes.