COLEGIO MAYOR DE NUESTRA SEORA DEL ROSARIO FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMTICAS UNIDAD DE ESTUDIOS UNIVERSITARIOS CON NFASIS

EN MEDICINA PRCTICAS INTEGRADAS Programa Acadmico Ncleo de Formacin Cdigos de las Asignaturas Coordinador Docentes Estudios Universitarios con nfasis en Salud Ciencias Bsicas 18200001, 18200002 y 18200003 Dalila Ma dalena !a"ardo #irat$ !redy %iovanni Mesa &odr' ue( )lvaro &o(o Bautista *scar Eu enio Sierra *s+ina

INTRODUCCIN ,os eventos en la naturale(a ocurren co-o la con"unci.n de una serie de factores /ue +osi0ilitan la interacci.n de co-+onentes -ateriales y la de ellos con las diferentes -anifestaciones ener 1ticas, de tal -anera /ue las consideraciones /ue se $acen desde una -era disci+lina, tienden a desconte2tuali(arlos y dificultan su co-+rensi.n3 Desde la Unidad de Estudios Universitarios, se +lantea la e"ecuci.n de actividades +rcticas de la0oratorio en for-a inte rada, co-o estrate ia +ara a0ordar situaciones +ro0l1-icas desde la 4u'-ica, la !'sica y la Biolo 'a, ro-+iendo la estructura individualista /ue tradicional-ente $a caracteri(ado 1ste ti+o de +rctica +eda . ica y a+ortando al a+rendi(a"e conte2tual /ue conduce a la construcci.n de +ensa-iento inte rador3 Es en 1ste sentido, /ue se funda-enta un ru+o de seis +rcticas de la0oratorio desarrolladas a +artir de diversos ca-+os de las Ciencias 5aturales, las cuales son articuladas en su e"ecuci.n +or la inte raci.n de cada uno de los tres sa0eres 6/u'-ico, f'sico y 0iol. ico7, con el a+oyo de las -ate-ticas y so+ortadas en las $a0ilidades co-unicativas /ue usual-ente se a0ordan co-o +arte del curso3 Con 1ste estilo de +rcticas, se su-er e al estudiante en un a-0iente de 8-icro9 investi aci.n:, en el cual no s.lo reconoce instru-ental, -ateriales, e/ui+os y t1cnicas, sino /ue los utili(a y de -anera vivencial to-a decisiones so0re lo -s a+ro+iado +ara resolver una situaci.n +ro0l1-ica, con el continuo aco-+a;a-iento de los tres

docentes de las reas i-+licadas, /uienes a+ortan sus conoci-ientos y e2+eriencias durante el desarrollo del +roceso y ade-s, contri0uyen a la auto9evaluaci.n de las acciones< +or/ue en =lti-as, es el estudiante -is-o, /uien de0e -onitorear su dese-+e;o y concluir so0re lo acertado de sus decisiones3 JU TIFICACIN El desarrollo estos cursos, antes deno-inados Estudios >rofesionales, +uso en evidencia /ue la funda-entaci.n te.rica de los estudiantes les $a enerado o +otenciali(ado sus co-+etencias co nitivas, co-unicativas y actitudinales< de tal -anera /ue su dese-+e;o en el +re rado, $a sido real-ente relevante dentro del avance en su +rofesionali(aci.n3 >ero as' -is-o, co-o +roducto de las evaluaciones del +ro ra-a, se vio la necesidad de incluir un co-+onente +rctico a estos cursos, de tal -anera /ue se +udiera avan(ar en el desarrollo de $a0ilidades y destre(as +ara el -ane"o de t1cnicas de la0oratorio en Ciencias Bsicas3 ? es as', /ue en una +ers+ectiva inte radora de as+ectos de la fisiolo 'a $u-ana, desde el co-+orta-iento celular $asta el lo0al funciona-iento de los .r anos, se $an estructurado estas seis +rcticas /ue +osi0ilitan la confluencia de los conoci-ientos f'sicos, /u'-icos y 0iol. icos de los diversos siste-as 0iol. icos3 El dise;o -etodol. ico +rocura escenarios de a+rendi(a"e /ue ofrecen al estudiante, la +osi0ilidad de a+licar los conce+tos 0sicos de cada una de estas tres ciencias, /ue con el aco-+a;a-iento y asesor'a de cada uno de los docentes i-+licados, antes, durante y des+u1s de la +rctica, +er-iten la inter+retaci.n inte ral de los as+ectos a0ordados so0re el funciona-iento del or anis-o $u-ano3 O!J"TI#O %E5E&@, %enerar un es+acio de actividad +rctica inte rada +ara desarrollar co-+etencias /ue cualifi/ue el dese-+e;o dentro de las Ciencias Bsicas M1dicas3 ES>ECA!BC*S @+licar t1cnicas de reconoci-iento de 0io-ol1culas3 Caracteri(ar en el conte2to 0io-ecnico y -ecano90iol. ico -odelos de co-+orta-iento3 Caracteri(ar -icroor anis-os y e"ecutar diversas t1cnicas +ara su identificaci.n3

$"TODO%O&'A ,a estructura -etodol. ica est sustentada funda-ental-ente en el a+orte co nitivo, desde las tres reas i-+licadas, +ara el desarrollo de +rcticas de la0oratorio /ue tradicional-ente son a0ordadas de carcter individual en la /u'-ica, en la 0iolo 'a o en la f'sica< +ero /ue en 1ste caso, i-+lican el aco-+a;a-iento 6+revio, durante y +osterior7, de cada uno de tres los docentes, tri0utando desde de su +ro+ia disci+lina a

la inter+retaci.n inte ral de los fen.-enos tratados3 Co-o estrate ia +ara alcan(ar los o0"etivos se tra(a la si uiente secuenciaC Se dis+one de te-ticas desde cada una de las rea /ue intervienen, as'C 4u'-ica3 &econoci-iento de -ateriales, t1cnicas de la0oratorio e identificaci.n de 0io-ol1culas3 !'sica3 Modelos de co-+orta-iento 0io-ecnico y -ecano90iol. ico3 Biolo 'a3 Caracteri(aci.n de -icroor anis-os y e2tracci.n de @D5 Se reali(an seis sesiones +rcticas de la0oratorio, cada una de tres $oras, los d'as s0ado3 Dos sesiones se derivan de cada te-tica +lanteadas desde la /u'-ica, desde la f'sica y desde la 0iolo 'a, siendo diri idas +or el docente corres+ondiente al rea eneradora y a+oyado +or los otros dos docentes3 Cada actividad +rctica res+onde a la necesidad de enfrentar una situaci.n +ro0l1-ica e i-+lica /ue el estudiante inda ue y e-+lee recursos co nitivos de las tres reas en cuesti.n, a+oyado en las -ate-ticas y so+ortado +or el desarrollo en las $a0ilidades co-unicativas3 ,as diferentes e2+eriencias +rcticas en el la0oratorio se constituyen en t.+icos enerativos de actividad +eda . ica en el aula de clase, de tal -anera /ue son un es+acio esencial +ara el desarrollo del conoci-iento te.rico3 ,as +rcticas de la0oratorio son enfocados de -anera cient'fica3 Es decir se for-ula un su+uesto o una ley, y lo /ue se +retende es co-+ro0arla e2+eri-ental-ente3 @s' las cosas, es necesario /ue el estudiante enuncie una $i+.tesis3 El infor-e de0e se ela0orado en el for-ato 6+or e"e-+lo BEEE7 +ara la +u0licaci.n de art'culos cient'ficos3 De tal for-ra /ue a -anera de art'culo de0e tener titulo, resu-en, introducci.n, -ateriales y -1todos, resultados, discusi.n de resultados, conclusiones y referencias3 CRONO&RA$A ,as +rcticas se llevaran a ca0o de acuerdo al si uiente crono ra-aC
!ec$a 3030D311 0E308311 20308311 1030F311 2H30F311 #e-tica Medici.n y Mane"o de datos Caracteri(aci.n de Microor anis-os Deter-inaci.n del Modulo de ?oun de Materiales Biol. icos &econoci-iento de Bio-ol1culas en la Materia Giva E2tracci.n de @D5 ,u ar ,a03 Micro0iolo 'a ,a03 Micro0iolo 'a ,a03 Micro0iolo 'a ,a03 Micro0iolo 'a ,a03 Micro0iolo 'a

01310311

En +roceso de refina-ientoI

,a03 Micro0iolo 'a

U5BGE&SBD@D C*,E%B* M@?*& DE 5UES#&@ SEJ*&@ DE, &*S@&B* !@CU,#@D DE MEDBCB5@ B5S#B#U#* DE CBE5CB@S B)SBC@S U5BD@D DE ES#UDB*S >&*!ESB*5@,ES C*5 5!@SBS E5 MEDBCB5@ >&)C#BC@ DE ,@B*&@#*&B* 5o3 1 $"DICIN ( $AN"JO D" DATO ) CO$P"T"NCIA @cciones /ue el estudiante reali(a en el conte2to disci+linar y /ue cu-+len con las e2i encias es+ec'ficas del -is-o, los +rocedi-ientos es+ec'ficos de la +resente u'a de la0oratorio conllevan a acciones deC TIPO INTERPRETATIVO* Co-+rende @cciones orientadas a encontrar el sentido de un +ro0le-a, de un es/ue-a, de ar u-entos en +ro o en contra de una teor'a o de una +ro+uesta3 TIPO ARGUMENTATIVO: Involucra acciones en la articulacin de conceptos, en la demostracin, en la organizacin de premisas para sustentar una conclusin. O!J"TI#O 13 Concretar el -ane"o de las cifras +ara la +recisi.n y e2actitud tanto en o+eraciones co-o ta-0i1n +ara dar un resultado -s adecuado3 23 @+licar el si nificado y el alcance de los estndares de las -edidas y +osi0les errores /ue se dan en una deter-inaci.n e2+eri-ental3 33 >recisar la confia0ilidad de un -1todo anal'tico considerando una serie de factores /ue deter-inan su calidad3

INTRODUCCIN $edicin) >ara co-+render ciertos as+ectos de la Bio/u'-ica es necesario for-ular y resolver +ro0le-as, donde se necesita co-+render las o+eraciones -ate-ticas ele-entales con las /ue se -ani+ulan los n=-eros3 ,os valores o datos nu-1ricos se o0tienen con -ediciones /ue se efect=an en un e2+eri-ento3 Con los clculos adecuados se +ueden co-+arar con los resultados de un e2+eri-ento con los de otros e2+eri-entos, +ara resu-irlos en for-as /ue ten an sentido3 ,os n=-eros /ue o0tene-os al -edir nunca son e2actos3 Sie-+re tienen cierto rado de incertidu-0re a causa de las li-itaciones del instru-ento de -edici.n y de la $a0ilidad de /ui1n efect=a el e2+eri-ento3 El valor nu-1rico o0tenido con una -edici.n de0er'a +ro+orcionar cierto indicio de su confia0ilidad, o +recisi.n3 Ci+ras igni+icati,as) >ara e2+resar /ue la +recisi.n es -2i-a, ese n=-ero de0e -ostrar todos los d' itos /ue se cono(can, y ade-s uno /ue se $aya esti-ado3 Este di ito esti-ado, /ue es el ltimo- introduce cierta incertidu-0re3 @ causa de esta incertidu-0re, todo n=-ero /ue e2+resa una -edici.n +uede tener solo una cantidad li-itada de d' itos3 @ estos d' itos, /ue se usan +ara e2+resar una cantidad -edida, se les lla-a cifras si nificativas3 Redondeo De Datos Con frecuencia, en los clculos o0tene-os res+uestas /ue tienen -s d' itos /ue los /ue +ode-os usar con certe(a3 >or consi uiente, es necesario eli-inar las cifras no si nificativas y e2+resar la res+uesta con la cantidad correcta de cifras si nificativas3 Cuando se eli-inan d' itos de un n=-ero, se deter-ina el valor del =lti-o d' ito /ue se conserva -ediante una o+eraci.n lla-ada redondeo de n=-eros3 Notacin Cient.+ica >er-ite e2+resar sin a-0i Kedad las cifras si nificativas de un n=-ero rande con su escritura3 ,a notaci.n cient'fica de un n=-ero es el n=-ero escrito en for-a de factor, cuyo valor oscila entre 1 y 10, -ulti+licado +or 10 elevado a una +otencia3 Orden De $agnitud Es la +otencia de 10 a la cual se acerca -s un n=-ero3 "/actitud Mide la concordancia entre un resultado y su valor verdadero3 Se e2+resa en t1r-inos de la incertidu-0re de la lectura +or e"e-+lo en el -aterial volu-1trico 6,ectura en una Bureta, Matra( aforado o una >i+eta aforada o raduada etc37

Precisin Mide la concordancia de varios resultados /ue se $an -edido de la -is-a -anera3 ,a +recisi.n se deter-ina s.lo re+itiendo una -edici.n3 Fuentes De "rror #odos los tra0a"os de la0oratorio re/uieren al una for-a de -edici.n y dado /ue todas las -edidas son susce+ti0les de error, es conveniente fa-iliari(arse con los /ue -s co-=n-ente se co-eten al $acerlas3 Una fuente co-=n de error es la inadecuada lectura de escalas o -eniscos de0ido a errores de +arala"e3 "rror Relati,o Este Error esta dado +or la e2+resi.nC 0e 1 0 t "r 2 0t 0e 2 #alor e/6erimental $AT"RIA%" ( R"ACTI#O ) Balan(a >ro0eta de 100 -l >i+eta aforada de 2L -l Erler-eyer de 12L -l Bureta de 2L -l >icn.-etro #er-.-etros #a+.n de cauc$o @ ua destilada Soluci.n +ro0le-a3 0e 2 #alor Teorico / 3445

PROC"DI$I"NTO) 13 >ese el erlen-eyer li-+io, seco y con su ta+.n de cauc$o3 #ransfiera un volu-en de a ua indicado +or el +rofesor, e-+leando la +ro0eta de 100 -l y +ese de nuevo el con"unto3 Calcule la densidad del a ua3 ? re istre la te-+eratura del a ua en la +ro0eta3 23 &e+ita el +rocedi-iento anterior utili(ando la res+ectiva +i+eta aforada, +i+eta %raduada, 0ureta y vaso de +reci+itado en lu ar de la +ro0eta3

33 >ara el +rocedi-iento anterior utilice un >icn.-etro y +roceda as'C >eso del +icn.-etro li-+io y secoC MMMMMMMMMMMMM3 >eso del +icn.-etro con a ua destiladaC MMMMMMMMMMM3 >eso del +icn.-etro con la soluci.n +ro0le-aC MMMMMMMMMMMMM3 Calcular la densidad de la soluci.n +ro0le-aC MMMMMMMMMMMMMM3

ESTIMACIN ESTIMACIN DE DE LA LA DENSIDAD DENSIDAD

AGUA Y ALCOHOL

$U" TRA

100 80 MTODO.
D"N IDAD A! O%UTA

60 40 20 0 1er trim.

PROBETA PIPETA AFORADA PIPETA GRADUADA 2do 3er 4to trim. trim. trim.

E ste Oeste Norte

D"N IDAD R"%ATI#A MTODO. PICNOMETRO

$"DICION" ( UNIDAD"

MAGNITUDES. MASA, VOLUMEN Y TEMPERATURA

&R7FICA

INSTRUMENTOS REPRODUCIBILIDAD

VS

FOR$ATO PARA %A CO%"CCIN D" DATO 3

PA O " TI$ATI#O PARA D"T"R$INAR %A D"N IDAD A! O%UTA D" UNA U TANCIA %I@UIDA

33P"

O "R%"N"$"("R #ACIO ( "CO 8 TAPON

9)TRAN

F"R"NCIA #O%U$"N" $"DIDO CON

IN TRU$"NTO #O%U$"TRICO

:) TO$A D" %A T"$P"RATURA D"% ; O) <<<<<<<)

9

$IDA 9> ml CON CADA IN TRU$"NTO

=)
A) O A) P" P" O O "R%"N"$"("R "R%"N"$"("R #ACIO #ACIO 8 8 9> 9> ml ml ; ;9 O $"DIDO $"DIDO CON CON PRO!"TA* PRO!"TA* 9 <<<<<<<<<<<<) <<<<<<<<<<<<)

!) O !) P" P" O O "R%"N"$"("R "R%"N"$"("R #ACIO #ACIO 8 8 9> 9> ml ml ; ;9 O $"DIDO $"DIDO CON CON PIP"TA PIP"TA AFORADA)<<<<<<<<<<<) AFORADA)<<<<<<<<<<<) 9 C) O C) P" P" O O "R%"N$"("R "R%"N$"("R #ACIO #ACIO 8 8 9> 9> ml ml ; ;9 O $"DIDO $"DIDO CON CON PIP"TA PIP"TA &RADUADA)<<<<<<<<<<) &RADUADA)<<<<<<<<<<) 9 D) O D) P" P" O O "R%"N$"("R "R%"N$"("R #ACIO #ACIO 8 8 9> 9> ml ml ; ;9 O $"DIDO $"DIDO CON CON #A #A O O PR"CIPITADO)<<<<<<<<<<) PR"CIPITADO)<<<<<<<<<<) 9

>) " "

TI$ACIN TI$ACIN D" D" %A %A D"N D"N IDAD* IDAD*

D 2 P? #

>&*BE#@3

PIPETA AFORADA.

PIPETA GRADUADA.

BU&E#@3

VASO

DE

PRECIPITADO.

D = ---------- g/ml

=---------- g/ml

D =---------- g/ml

D = --------- g/ ml

A) CA%CU%O "RROR R"%ATI#O*

")R 2 #alor e/6erimental B #alor terico #alor terico

/ 3445

PROBETA. E.R ) 2 <<<<<<<<

PIPETA AFORADA. E.R ) 2 <<<<<<<<

PIPETA GRADUADA. E.R ) 2 <<<<<<<<

BURETA. E.R ) 2 <<<<<<<<

VASO DE PRECIPITADO. E.R ) 2 <<<<<<<<

ESTIMACIN DE LA DENSIDAD RELATIVA O PESO ESPECIFICO UTI%IC" "% PICNO$"TRO PA O

3) 3) P" P" O O D"% D"% PICN$"TRO PICN$"TRO %I$PIO %I$PIO ( ( "CO) "CO) <<<<<<<<<<<<<<<<<<<) <<<<<<<<<<<<<<<<<<<) 9) 9) P" P" O O D"% D"% PICN$"TRO PICN$"TRO CON CON A&UA A&UA D" D" TI%ADA)) TI%ADA)) <<<<<<<<<<<<) <<<<<<<<<<<<) :) :) P" P" O O D"% D"% PICN$"TRO PICN$"TRO CON CON %A %A $U" $U" TRA TRA PRO!%"$A) PRO!%"$A) <<<<<<<<<<) <<<<<<<<<<) CALCULOS CALCULOS

P. E. =

Peso Peso Picnmetro Picnmetro muestra muestra 6roClema 6roClema B B Peso Peso 6icnmetro 6icnmetro #ac.o #ac.o Peso Peso Picnmetro Picnmetro con con agua agua B B Peso Peso 6icnmetro 6icnmetro #ac.o #ac.o

E.R E.R

= =

R" U%TADO ( CON U%TA) 13 #o-e los datos de los ru+os de la0oratorio +ara co-+arar su re+roduci0ilidad y analicen los diferentes datos de densidad +ara el a ua evaluada con vol=-enes de la +ro0eta, 0ureta, +i+eta aforada, raduada y +icn.-etro 6-uestra +ro0le-a73 23 En t1r-inos de e2actitud y +recisi.n esti-e el +orcenta"e de error relativo +ara el anlisis anterior3 33 @si ne los valores a las coordenadas 2, y3 %rafi/ue -ediante 0arras3 / re+resenta los instru-entos volu-1tricos 6+ro0eta, +i+eta aforada, raduada, 0ureta y +icn.-etro7, D re+resenta la re+roduci0ilidad de los datos de la densidad del a ua a la te-+eratura de la0oratorio3 H3 Cual es el -2i-o error +er-isi0le de los instru-entos volu-1tricos utili(ados +ara esti-ar la densidad del a ua y la -uestra +ro0le-a en el la0oratorio3 INFOR$" D" %A!ORATORIO) El infor-e se de0e +resentar en for-a de art'culo cient'fico incluyendo las si uientes seccionesC #'tulo, &esu-en, Bntroducci.n, Metodolo 'a3 &esultados, Discusi.n de resultados, Conclusiones y Bi0lio raf'a !I!%IO&RAF'A) BroNn #$eodore ,3, ,eMay O3 Eu ene Pr3, Bursten Bruce E and Burda e Pulia &3, 4u'-ica la ciencia central)- >earson Educaci.n, M12ico3, FQ ed3, 200H3 Sc$enR %eor e O3, Oa$n &ic$ard B3, OartRo+f @rlei $ G3 4u'-ica3 >rinci+ios y a+licaciones a las ciencias de la Gida3 Editorial Continental, M12ico3, HQ ed3, 1FF8 C$an &ay-ond3, 4u'-ica, Ed3 Mc%raN9Oill, Bo ot, DQ ed3, 20023 %ar(.n %uiller-o3, !unda-entos de 4u'-ica %eneralC Con Manual de ,a0oratorio3, Ed3 Mc%raN9Oill, Bo ot3, 2Q ed3, 1F8E3 U-land Pean B3 and Bella-a Pon M3, 4u'-ica %eneral, #$o-son ,earnin Editores3, M12ico3, 3Q ed3, 20003

U5BGE&SBD@D C*,E%B* M@?*& DE 5UES#&@ SEJ*&@ DE, &*S@&B* !@CU,#@D DE MEDBCB5@ B5S#B#U#* DE CBE5CB@S B)SBC@S U5BD@D DE ES#UDB*S >&*!ESB*5@,ES C*5 5!@SBS E5 MEDBCB5@ >&)C#BC@ DE ,@B*&@#*&B* 5o3 2 CARACT"RIEACIN D" $ICROOR&ANI $O O!J"TI#O &econocer -ediante o0servaci.n directa diversos -icroor anis-os con ca+acidad +ato 1nica3 INTRODUCCIN El -undo -icrosc.+ico se nos $i(o evidente cuando al -ani+ular diferentes lentes se lo r. a-+liar la i-a en de los 8ani-culos: /ue lo constituyen, a +artir de la creaci.n del -icrosco+io si-+le, se lo r. crear el co-+uesto, $asta conce0ir el -icrosco+io electr.nico, /ue en lu ar de utili(ar $aces de lu( +ara visuali(ar la i-a en, e-+lea una fuente de di-inutos electrones, lo rando au-entar en -ayor -a nitud la i-a en3 De los unicelulares e2isten dos ru+os de individuos con ca+acidad de enerar enfer-edades, incluido el +ri-ero en reino de los -.neras, corres+onde a las 0acterias +at. enas y el se undo en el reino de los +rotistos, deno-inados +roto(oos +arsitos< dentro de los +luricelulares, en el reino de los $on os, e2isten cerca de un centenar de es+ecies +at. enos $u-anos3 Co-o -1todos -icrosc.+icos de identificaci.n, suelen ser utili(ados el frotis y la coloraci.n, -ientras /ue el cultivo +osi0ilita el aisla-iento, en a-0os casos es necesario e2tre-ar -edidas de 0iose uridad +uesto /ue al entrar en contacto con el -icroor anis-o, se est e2+uesto a la infecci.n3 D" ARRO%%O D" %A PR7CTICA 3) OCser,acin de FiFados D Coloreados

Bacterias3 Caracteri(aci.n de 0acterias se =n su for-a y reconoci-iento de %ra- +ositivas y %ra- ne ativas3 Oon os3 !rotis indirecto 6cultivo7 de @s+er ilos

>roto(oos >arsitos3 Bdentificaci.n de +arsitos intestinales y san u'neos3

9) identi+icacin de $icroorganismos a 6artir de $uestras

Coloraci.n de %ra-

8Differential stainin re/uires t$e use of at least t$ree c$e-ical rea ents 6dyes,alco$ol, etc7 t$at are a++lied se/uentially to a $eat9fi2ed s-ear3 TGe +irst ste6 is to add a rea ent called t$e +ri-ary stain3 Bts function is to i-+art its color to all cells3 Crystal violet co--only serves as t$e +ri-ary stain3 #$is stain dyes all cells +ur+le90lue3 @s Nit$ si-+le stains, t$is dye is left on t$e 0acteria a s+ecific ti-e and t$en rinsed off3 TGe second ste6 is to add a -ordant to t$e +ri-ary stain3 Bts function is to 0ond to t$e +ri-ary stain t$us for-in an insolu0le co-+le23 #$e overall effect is to intensify 6dee+en7 t$e color of t$e +ri-ary stain3 %ra-Ss Bodine is t$e -ost co--on -ordant used in %ra- stainin 3 @ll t$e 0acteria Nill a++ear +ur+le90lacR at t$is +oint3 @s Nit$ si-+le stains, t$is dye is left on t$e 0acteria a s+ecific ti-e and t$en rinsed off3 TGe tGird ste6 of t$e +rocedure is t$e -ost critical +$ase and is called decolori(ation3 Based on t$e c$e-ical co-+osition 6a-ount of li+ids7 in t$e cell Nalls of t$e 0acteria, t$e decolori(in a ent -ay or -ay not re-ove t$e +ri-ary stain fro- t$e entire 0acteria3 #$is ste+ is also t$e -ost sensitiveT overdecolori(ation Nill alNays Nas$ aNay t$e stain resultin in a false %ra-9ne ative readin , N$ile underdecolori(ation Nill never Nas$ aNay t$e stain resultin in a false %ra-9+ositive readin 3 #$e ti-in and +rocedure for t$is ste+ -ust 0e folloNed +recisely3 #$e -ost co--on decolori(in a ent is alco$ol 6FLU et$anol73 Bn 0acteria alco$ol can dissolve t$e li+ids located in t$e cell Nalls3 Since ra-9+ositive cells $ave a loN li+id concentration only a s-all a-ount of t$e li+id and t$e dye coatin it is dissolved 0y t$e alco$ol3 @s a conse/uence, ra-9 +ositive 0acteria do not loose eit$er t$e +ri-ary stain or t$e -ordant and t$erefore re-ain 0lue3 Since ra-9ne ative 0acteria $ave a $i $ li+id concentration a lar e a-ount of t$e li+id and t$e dye coatin it is dissolved 0y t$e alco$ol3 @s a conse/uence, ra-9ne ative 0acteria loose 0ot$ t$e +ri-ary stain and t$e -ordant and t$erefore turn colorless or unstained3 @s Nit$ si-+le stains, t$e alco$ol is alloNed to run over t$e 0acteria for a s+ecific ti-e and t$en is rinsed off3 TGe +ourtG ste6 involves addin a counterstain to t$e 0acteria3 #$is counterstain $as a contrastin color to t$at of t$e +ri-ary stain3 Safranin is -ost co--on counterstain used in %ra- stainin 3 Bn %ra-9 +ositive 0acteria t$e decolori(ation ste+ does not Nas$ off t$e +ri-ary stain, t$erefore t$e safranin cannot 0e a0sor0ed3 #$us %ra-9+ositive 0acteria Nill retain t$e color of t$e +ri-ary stain3 Bn %ra-9ne ative t$e decolori(ation ste+ does Nas$ off t$e +ri-ary stain, t$erefore t$e safranin is a0sor0ed3 #$us %ra-9ne ative 0acteria taRe on t$e color of t$e safranin and turn reddis$9+inR3 %ra- stainin is an e2a-+le of a differential stain3 Suc$ stain can distin uis$ed s+ecific traits 0etNeen 0acteria3 %ra- stains for e2a-+le can indicate t$e cell Nall structure of 0acteria, and t$us can 0e used to +redict certain 0e$aviors of t$ese 0acteria 6ie3 reaction to s+ecific anti0iotics73#$e %ra- Stainin +rocess is na-ed after Dr3 C$ristian %ra-3 Because it divides 0acterial into tNo -a"or rou+s, ra-9+ositive and ra-9 ne ative, it serves as an essential tool for t$e classification and differentiation of -icroor anis-s3: 617

>re+araciones a +artir de cultivos de $on os3

El fenol destruye la flora y otros or anis-os aco-+a;antes< el cido lctico conserva las estructuras f=n icas y el a(ul al od.n ti;e la /uitina de las +aredes f=n icas3 Se coloca una ota de la -uestra o una +orci.n del $on o en un +ortao0"etos, con dos a u"as se le $ace disecci.n, so0re ella a;ade una ota del colorante y se coloca el cu0reo0"eto y se o0serva al -icrosco+io3

E2a-en de -ateria fecal -ediante un co+roanlisis 6 o6cional73

Se coloca una +e/ue;a -uestra en un +ortao0"etos, so0re una ota de soluci.n salina, se disuelve en ella y lue o otra +orci.n de la -uestra so0re una ota de lu ol, disolvi1ndola de -anera si-ilar, +osterior-ente se coloca el cu0reo0"eto y se o0serva al -icrosco+io3 PR"&UNTA D" INT"&RACIN Es necesario /ue adelante la resoluci.n de los si uientes interro antes, co-o actividad +revia a la e"ecuci.n del la0oratorio3 13 Descri0a el funda-ento f'sico de la -icrosco+'a de lu( y electr.nica3 23 Descri0a la co-+osici.n /u'-ica de los colorantes utili(ados3 33 Bdentifi/ue el ti+o de -ol1culas de los -icroor anis-os /ue +osi0ilitan la uni.n con cada uno de los colorantes utili(ados3 !I!%IO&RAF'A G@5DE>B##E, P3 M1todos 0sicos de la0oratorio en 0acteriolo 'a cl'nica3 %ine0ra, 1FF3 $tt+CVVNNN3tel-eds3or V@GBMV $tt+CVVut$s3revealed3netVscienceVsteinV$o-eNorRVla0MidentM0acteriaMintro3$t-

U5BGE&SBD@D C*,E%B* M@?*& DE 5UES#&@ SEJ*&@ DE, &*S@&B* !@CU,#@D DE MEDBCB5@ B5S#B#U#* DE CBE5CB@S B)SBC@S U5BD@D DE ES#UDB*S >&*!ESB*5@,ES C*5 5!@SBS E5 MEDBCB5@ >&)C#BC@ DE ,@B*&@#*&B* 5o3 3 D"T"R$INACION D"% $ODU%O D" (OUN& D" $AT"RIA%" !IO%O&ICO O!J"TI#O 13 Caracteri(aci.n de las +ro+iedades elsticas de -ateriales 0iol. icos -ediante la o0tenci.n de las raficas 6 vs 7 en la -odalidad de tracci.n 23 Deter-inar el -.dulo de ?oun +ara los -ateriales 0iol. icos estudiados 33 Crear ca+acidades de escritura de infor-es en for-ato de revistas cient'ficas $ARCO T"RICO #odo o0"eto -aterial es la co-+osici.n de una diversidad de ele-entos estructurales, li ados entre si +or fuer(as el1ctricas 6enlaces i.nicos, covalentes, de +unte de $idr. eno y de Gan der Waals7 y +or fuer(as -a n1ticas 6+rinci+al-ente, -ateriales ranulares73 ,a -anera co-o un -aterial res+onde a fuer(as e2ternas a+licadas defor-ndose y +resentado una resistencia -ecnica de+ende total-ente de sus co-+onentes estructurales y de las fuer(as -icrosc.+icas entre ellos, +er-itiendo as' una caracteri(aci.n del -aterial -ediante su curva fuer(a9defor-aci.n3 Esta curva de defor-aci.n de+ende de varios factoresC 13 ,a eo-etr'a del o0"eto -aterial a caracteri(ar 6la -uestra o +ro0eta7 23 Co-+onentes estructurales del -aterial 33 El ti+o de defor-aci.n 6tensi.n o co-+resi.n, corte, fle2i.n y torsi.n7 ,a tensi.n 6o tracci.n7 es el -1todo -s co-=n-ente usado +ara caracteri(ar -uestras de si-etr'a a2ial 6de eo-etr'a cil'ndrica73 El cient'fico in l1s #$o-as ?oun de-ostr. +ara un material elHstico lineal isotr.+ico el -.dulo de elasticidad

lon itudinal es una constante 6+ara valores de tensi.n dentro del ran o de reversi0ilidad co-+leta de defor-aciones7 y es i ual a !VS X XEY @ esta ley se le lla-o ,ey de OooRe 6en $onor al f'sico 0ritnico co-te-+orneo de Bsaac 5eNton7 DondeC F* es la fuer(a a+licado al -aterial * es el rea de la secci.n transversal del -aterial "* es el lla-ado coeficiente de elasticidad o -.dulo de ?oun * es la defor-aci.n del -aterial en la for-a ,V,o %C es la lon itud inicial del -aterial %* su defor-aci.n

!i ura 1 Co-o es de es+erar el co-+orta-iento de 6 vs 7 ser una l'nea recta donde E ser la +endiente y +uede ser deter-inada e2+eri-ental-ente u0icando diferentes valores de fuer(as y -idiendo la defor-aci.n 6alar a-iento del -aterial73 Si se reali(a una rafica de 6 vs 7, E se +ude deter-inar +or el -1todo de los -'ni-os cuadrados de la ta0la de valores o0tenidos de y Sin e-0ar o e2isten varias Ze2tensionesZ no9e2cluyentes del conce+to3 >ara -ateriales elsticos no is.tro+os el -.dulo de ?oun -edido se =n el +rocedi-iento anterior no da valores constantes3 Sin e-0ar o, +uede +ro0arse /ue e2isten tres constantes elsticas E2, Ey y E( tales /ue el -.dulo de ?oun en cual/uier direcci.n El +rocedi-iento +ara la deter-inaci.n del -.dulo de ?oun consiste enC 13 Seleccionar una -uestra 23 Calcular el rea de la secci.n transversal de la -uestra 6S7

33 Oa a el -onta"e se =n la ilustraci.n 6!i ura 27 H3 !i"e un valor cero de la re la 6no necesaria-ente tiene /ue alinear el cero con el +unto de -edida, si-+le-ente to-e nota del valor inicial del +unto de -edida y des+u1s reste +ara cada defor-aci.n7 L3 Selecciones varias +esas, +on a una a una so0re el +latillo y -ida la defor-aci.n E3 &e istre +ara cada -edici.n el +eso y la defor-aci.n3 M@#E&B@,ES ,os -ateriales necesarios +ara la +resente +rctica sonC MuestrasC 13 Un resorte 0lando de unos 10 c- de lon itud natural 23 [r ano o te"ido 6+referi0le-ente /ue sea -ayor-ente te"ido conectivo7 de si-etr'a a2ial 6un arteria -ayor y tend.n7 @ccesoriosC 13 Una -orda(a +ara el .r ano o te"ido 23 Una cuerda ine2tensi0le 6+ara el ran o fuer(as a a+licar7 33 Una +olea +e/ue;a H3 Un +latillo +orta9+esas L3 Un con"unto, -'ni-o de L +esas, en intervalo de valores a+ro+iado +ara defor-aci.n de las -uestras a estudiar la +rctica de

un la en

Bnstru-entos de -edici.nC Una re la suficiente-ente lar a +ara -edir la -2i-a e2tensi.n de las -uestras y el recurso +ara el +rocesa-iento de datosC Calculadora y co-+utador AN7%I I D" DATO 13 &eco"a los resultados +ara cada e2+eri-ento en la for-a ta0ular 6si1ntase li0re +ara dise;ar otra for-a de ta0ular los resultados de -anera /ue +ueda inte rar las -ediciones en una sola ta0la7

#i+o de Muestra ,on itud Bnicial )rea de la secci.n transversal >eso del +latillo Masa Medici.n 1 Medici.n 2 Medici.n 3 Medici.n H Medici.n n 23 &ealice un rafico de vs +ara cada -uestra 33 @"uste la curva se =n los valores o0tenidos en el rafico3 Si es una l'nea recta calcule la +endiente 6E7 a+licando el -1todo de los -'ni-os cuadrados o a+licando al =n +ro ra-a +rofesional +ara el a"uste de curvas3 INFOR$" D" R" U%TADO IART'CU%O CI"NT'FICOJ Uno de los o0"etivos funda-entales de la +resente +rctica es /ue usted a+renda a +resentar infor-es de los resultados o0tenidos3 Esto /uiere decir /ueC 13 Dic$os infor-es de0en ser ela0orados de -anera co$erente 23 De0en ser enfocados de -anera cient'fica3 Es decir usted est for-ulando o de0e for-ular una su+uesta ley y desea co-+ro0arla e2+eri-ental-ente3 @s' las cosas, usted de0e enunciar una $i+.tesis 33 El infor-e de0e tener el for-ato BEEE +ara la +u0licaci.n de art'culos cient'ficos3 @s' su art'culo de0e tener titulo, resu-en, introducci.n, o0"etivos, -ateriales y -1todos, resultados, discusi.n de resultados, conclusiones y referencias3 3) Nota* el +rofesor +roveer un arc$ivo e"e-+lo 6B@BE,7 a los estudiantes +ara /ue +uedan desarrollar su articulo so0re esta +lantilla 9) Nota* ,os -e"ores art'culos sern 0onificados con 031 +untos R"F"R"NCIA 3) NNN3NiRi+edia3or 9) Materiales de consulta en Ba0el3 >eso , inicial , !inal , ,V,i

U5BGE&SBD@D C*,E%B* M@?*& DE 5UES#&@ SEJ*&@ DE, &*S@&B* !@CU,#@D DE MEDBCB5@ B5S#B#U#* DE CBE5CB@S B)SBC@S U5BD@D DE ES#UDB*S >&*!ESB*5@,ES C*5 5!@SBS E5 MEDBCB5@ >&)C#BC@ DE ,@B*&@#*&B* 5o3 H R"CONOCI$I"NTO D" !IO$O%"CU%A "N %A $AT"RIA #I#A

O!J"TI#O * Bdentificar -1todos +ara reconocer 0io-ol1culas 6car0o$idratos, +rote'nas, ,'+idos y cidos nucleicos7 de la -ateria viva utili(ando +rue0as cualitativas en la identificaci.n en diferentes -uestras 0iol. icas3 Gerificar la solu0ilidad de los l'+idos en disolventes or nicos3 Bnter+retar los resultados o0tenidos en cada una de las +rue0as3

INTRODUCCIN3 En los or anis-os se encuentran cuatro ti+os diferentes de -ol1culas or nicas en ran cantidadC car0o$idratos, l'+idos, +rote'nas y nucle.tidos3 ,as Bio-ol1culas or nicas derivan sus confi uraciones tridi-ensionales +ri-ordial-ente de sus es/ueletos de car0ono3 Sin e-0ar o, -uc$as de sus +ro+iedades es+ec'ficas de+enden de ru+os funcionales3 Una caracter'stica eneral de todos los co-+uestos or nicos es /ue li0eran ener 'a cuando se o2idan3 Entre los ti+os +rinci+ales de -ol1culas or nicas i-+ortantes en los seres vivos estn los car0o$idratos, los l'+idos, las +rote'nas y los nucle.tidos3 ,os car0o$idratos son la fuente de ener 'a /u'-ica +ara los siste-as vivos3 ,os -s si-+les son los -onosacridos co-o la lucosa3 ,os -onosacridos +ueden co-0inarse +ara for-ar disacridos co-o el a(=car de ca;a, la sacarosa y +olisacridos co-o el al-id.n< confor-ados +or cadenas de -uc$os -onosacridos3 El reconoci-ientos de a(ucares se +uede reali(ar con la +rue0a de Benedict y los +olisacararidos co-o el al-id.n con la +rue0a de ,u ol3

,os l'+idos son -ol1culas $idrof.0icas /ue, co-o los car0o$idratos, al-acenan ener 'a y son i-+ortantes co-+onentes estructurales3 Bncluyen las rasas y los aceites, los fosfol'+idos, los lucol'+idos, las ceras, y el colesterol y otros esteroides3 ,os l'+idos se +ueden reconocer con la +rue0a de Sudan y se +ueden diferenciar relacionando su solu0ilidad en solventes or nicos3 ,as +rote'nas son -ol1culas -uy randes co-+uestas de cadenas lar as de a-inocidos, conocidas co-o cadenas +oli+e+t'dicas3 @ +artir de s.lo veinte a-inocidos son utili(ados +ara $acer +rote'nas se +uede sinteti(ar una in-ensa variedad de diferentes ti+os de -ol1culas +rote'nicas, cada una de las cuales cu-+le una funci.n alta-ente es+ec'fica en los siste-as vivos3 ,as +rote'nas se +ueden reconocer -ediante el -1todo de Biuret3 ,os nucle.tidos son -ol1culas co-+le"as for-adas +or un ru+o fosfato, un a(=car de cinco car0onos y una 0ase nitro enada3 Son los 0lo/ues estructurales de los cidos deso2irri0onucleico 6D5@7 y ri0onucleico 6@&57- /ue trans-iten y traducen la infor-aci.n en1tica3 ,os nucle.tidos ta-0i1n dese-+e;an +a+eles centrales en los interca-0ios de ener 'a /ue aco-+a;an a las reacciones /u'-icas dentro de los siste-as vivos3 El +rinci+al +ortador de ener 'a en la -ayor'a de las reacciones /u'-icas /ue ocurren dentro de las c1lulas es un nucle.tido /ue lleva tres fosfatos, el @#>3 ,a identificaci.n de los cidos nucleicos +uede reali(arse con el reactivo de la difenila-ina3 El estudiante revisar los conce+tos relacionados conC &eacciones co-o Biuret, Benedict, ,u ol, Sudan, Difenila-ina, sa+onificaci.n, e-ulsi.n, solu0ilidad y solvente3 Sintetice sus ideas y t1n alas +resentes +ara el desarrollo de la +rctica3 $AT"RIA%" ( R"ACTI#O ) %radilla617, tu0os de ensayo6107, +i+etas raduadas L -l y 10 -l 627, Gaso de +reci+itado de L00 -l 617, +i+eteador 6173 Soluci.n de @l-id.n al 1U, Soluci.n de lucosa al 1U, Soluci.n de sacarosa al 1U, Soluci.n de ,u ol, &eactivo de Biuret, &eactivo de Benedict, &eactivo de Difenila-ina, @lco$ol et'lico, ter de +etr.leo, @cetona, Clorofor-o3 Material /ue de0e traer el estudiante3 @ceite de cocina, #rocitos de O' ado licuado fresco 6-antener en Oielo7, o levadura, Se-illas licuadas, dos +a+as ,icuadas -antenidas en $ielo, 100 -l de lec$e, #rocitos de -ante/uilla y un Ouevo3 %uantes de neo+reno y afas de se uridad3

Reconocimiento De CarCoGidratos 3) PrueCa de !enedict3 &otule tres tu0os de ensayo y adicione las soluciones /ue se indican a continuaci.n3 >ara esta +rue0a se +uede utili(ar co-o soluciones >atrones lucosa al 1U y sacarosa al 1U3 TuCos @ ua destilada Soluci.n lucosa al 1U Soluci.n de Sacarosa al 1U &eactivo de Benedict !lanco 2-l Patrn 3 2 -l 2-l 2 -l 2-l 2-l Patrn 9

Caliente los tres tu0os de ensayo en 0a;o de Mar'a a e0ullici.n durante 3 -inutos3 ,a for-aci.n de un +reci+itado verde, a-arillo o ro"o ladrillo3 Bndica la +resencia de a(ucares reductores3 9) PrueCa de %ugol) &otule tres tu0os de ensayo y adicione las soluciones /ue se indican a continuaci.n3 >ara esta +rue0a se +ude utili(ar co-o soluciones >atrones al-id.n al 1U y el filtrado de +a+a3 TuCos @ ua destilada Soluci.n al-id.n al 1U !iltrado de +a+a &eactivo de ,u ol !lanco 2-l Patrn 3 2 -l 1 a 2 otas 1 a 2 otas 2-l 1 a 2 otas Patrn 9

Me(cle y o0serve3 ,a a+arici.n de una coloraci.n a(ul indica la +resencia de al-id.n3 Reconocimiento De Prote.nas3 3) PrueCa de !iuret) &otule tres tu0os de ensayo y adicione las soluciones /ue se indican a continuaci.n3 >ara esta +rue0a se +ude utili(ar co-o soluciones >atrones al0=-ina de $uevo y lec$e3 TuCos @ ua destilada @l0=-ina de $uevo 6Clara7 ,ec$e &eactivo de Biuret 2 -l 2 -l !lanco L-l L -l L -l 2 -l Patrn 3 Patrn 9

Me(cle y o0serve3 ,a a+arici.n de una coloraci.n +=r+ura indica la +resencia de +rote'nas /ue contienen enlaces +e+t'dicos3 Reconocimiento De %.6idos3 3) PrueCa de udan) &otule tres tu0os de ensayo y adicione las soluciones /ue se indican a continuaci.n3 >ara esta +rue0a se +ude utili(ar co-o soluciones >atrones aceite de cocina y -ar arina3 TuCos @ ua destilada @ceite de cocina @cido -ar arina &eactivo de Sudan BG !lanco 2-l Patrn 3 1 -l 1 -l 1-l 0,L 1 -l Patrn 9

Me(cle y o0serve3 ,a disoluci.n del aceite y la -ar arina en el colorante de sudan cuando se te;irn los l'+idos3 9) PrueCa de soluCilidad de los %.6idos) &otule cuatro tu0os de ensayo y adicione las soluciones /ue se indican a continuaci.n3 >ara esta +rue0a se +ude utili(ar co-o soluciones >atrones aceite de cocina3 TU!O @ceite de cocina @ ua destilada @cetona ter >etr.leo Clorofor-o A 2 otas 1 -l ! 2 otas 1 -l 1 -l 1 -l C 2 otas D 2 otas

Me(cle fuerte-ente y des+u1s de un -inuto de re+oso o0serve si $u0o disoluci.n de las -e(clas y anote los resultados3 Reconocimiento De Acidos Nucleicos Pre6aracin de la muestra3 Colocar el $' ado o la levadura -acerada en de 0uffer fosfato 031 M a > O X D3H, colo/ue en un tu0o de centrifu a +or 10 -inutos, se+are el so0renadante, -arcarlo y -antenerlo en un 0a;o de $ielo3 &otule tres tu0os de ensayo y adicione las soluciones /ue se indican a continuaci.n3 >ara esta +rue0a se +ude utili(ar co-o soluciones >atrones $' ado o levadura -acerados en 0uffer fosfato3 TuCos Patrn 3 Patrn 9

O' ado -acerado en 0uffer ,evadura -acerada en 0uffer &eactivo Difenila-ina 6fresco7

1-l so0renadante 1 -l de so0renadante 3 -l 3 -l

Calentar en 0a;o de Mar'a sin e0ullir +or H0 -inutos y des+u1s +asarlos +or a ua fr'a, y de"e re+osar +or 10 -inutos3 ,a +resencia del @D5 se reconoce +or la for-aci.n de un co-+le"o coloreado a(ul y el @&5 +or un co-+le"o coloreado Gerde3 PR"&UNTA ORI"NTADORA 3 13 4u1 Caracter'sticas estructurales de0e tener un a(=car +ara /ue sea reductor3 23 >or /ue los seres $u-anos +ueden di erir al-id.n, +ero no celulosa si a-0os contienen D9 lucosa3 33 Con res+ecto a la lucosa y la alactosa, Consultar3 B-+ortancia, [r anos /ue la utili(an en los seres y reacciones de Bios'ntesis3 H3 Bnter+rete y discuta los resultados o0tenidos en la +rctica3 L3 Bnter+rete el rado de solu0ilidad de los l'+idos con cada uno de los disolventes3 INFOR$" D" R" U%TADO 3 El infor-e se de0e +resentar en for-a de art'culo cient'fico incluyendo las si uientes seccionesC #'tulo, &esu-en, Bntroducci.n, Metodolo 'a3 &esultados, Discusi.n de resultados, Conclusiones y Bi0lio raf'a !I!%IO&RAFIA3 @le-any, M3!ont,S3 >rcticas de Bio/u'-ica3 Ed @la-0ra3 1F833 Bailey >$ili+ S, Pr3, Bailey C$ristina @3 4u'-ica *r nica, conce+tos y a+licaciones, >earson Educaci.n, M12ico3, LQ ed3, 1FF83 Bo$insRi, &3 C3 Bio/u'-ica3 L Ed3, @ddison Weley B0eroa-ericana3 1FF13 BroNn #$eodore ,3, ,eMay O3 Eu ene Pr3, Bursten Bruce E and Burda e Pulia &3, 4u'-ica la ciencia central3, >earson Educaci.n, M12ico3, FQ ed3, 200H3 Ca-+0ell Mary \3 Bio/u'-ica3 Bnternacional #$o-son Editores3200L3 Oar+er Oarold @nt$ony3, Oar+erC 0io/u'-ica ilustrada3, Ed3 Manual Moderno3, M12ico3, 1DQ ed3, 200D3 Murray, M et al3 Bio/u'-ica de Oar+er3 13 Ed El -anual Moderno3 1FFF3 >lu--er, D, #3 Bio/u'-ica >rctica3 Ed Mc%raN9Oill ,atia-ericana3 1F81 Seese Willia- S3 4u'-ica3 L Ed3 >rentice9Oall Ois+anoa-ericana320003

U5BGE&SBD@D C*,E%B* M@?*& DE 5UES#&@ SEJ*&@ DE, &*S@&B* !@CU,#@D DE MEDBCB5@ B5S#B#U#* DE CBE5CB@S B)SBC@S U5BD@D DE ES#UDB*S >&*!ESB*5@,ES C*5 5!@SBS E5 MEDBCB5@ >&)C#BC@ DE ,@B*&@#*&B* 5o3 L "0TRACCIN D" ADN O!J"TI#O E2traer el @D5 de al unos te"idos ve etales yVo ani-ales -ediante un +rocedi-iento sencillo /ue +er-ita inter+retar el funda-ento de la t1cnica3 INTRODUCCIN 8,a e2tracci.n de @D5 de una -uestra celular se 0asa en el $ec$o de /ue los iones salinos son atra'dos $acia las car as ne ativas del @D5, +er-itiendo su disoluci.n y +osterior e2tracci.n de la c1lula3 Se e-+ie(a +or lisar 6ro-+er7 las c1lulas -ediante un deter ente, vacindose su contenido -olecular en una disoluci.n ta-+.n en la /ue se disuelve el @D53 En ese -o-ento, el ta-+.n contiene @D5 y todo un surtido de restos -olecularesC @&5, car0o$idratos, +rote'nas y otras sustancias en -enor +ro+orci.n3 ,as +rote'nas asociadas al @D5, de ran lon itud, se $a0rn fraccionado en cadenas -s +e/ue;as y se+aradas de 1l +or acci.n del deter ente3 S.lo /ueda, +or tanto, e2traer el @D5 de esa -e(cla de ta-+.n y deter ente, +ara lo cual se utili(a alco$ol isoa-'lico: NNN3"oseacortes3co-V+racticasVe2traccion@D53$t-3 M@#E&B@,ES

Muestra ve etal @ ua 6destilada o -ineral7 Cloruro de sodio Bicar0onato s.dico Deter ente l'/uido o c$a-+= @lco$ol isoa-'lico a 0]C @0landa carnes

Batidora 5evera Colador o centr'fu a Gaso de +reci+itados #u0o de ensayo Garilla fina >i+eta 10 -,

D" ARRO%%O D" %A PR7CTICA >re+araci.n del 0uffer con los si uientes in redientes y -antener en la neveraC 120 -l de a ua destilada3 5o usar a ua del rifo3 1,L de sal de -esa3 L de 0icar0onato de sodio3 L -l de c$a-+= o deter ente l'/uido3 Se de0e cortar en cuadraditos la -uestra /ue va a +ro+orcionar el @D53 6ce0olla, a"o, to-ates, $' ado de +ollo73 >ara triturar la -uestra se le a re a un +oco de a ua en una +icadora y se acciona a i-+ulsos de 10 se undos, ro-+iendo al unas de las c1lulas3 En un vaso de +reci+itados, L -l del triturado celular se -e(clan con 10 -l del 0uffer fr'o y se a ita fuerte-ente durante 2 -inutos3 Se de0en e2traer los restos ve etales -s randes $aci1ndolo +asar +or un colador fino3 Co-o alternativa se +uede centrifu ar a 0a"a velocidad L -inutos y des+u1s +i+etear el so0renadante +ara lue o de+ositarlo en tu0os de ensayo3 @ cada tu0o de ensayo se le a;aden un 03L de a0landador de carne 6en(i-a7 y se a ita suave-ente3 Co-o alternativa al a0landador, +uede usar "u o de +i;a3 De la -e(cla -olecular o0tenida se to-an L -l y se de+ositan en otro tu0o de ensayo rande, con el tu0o inclinado y -uy suave-ente se le a;aden 10 -l de alco$ol isoa-'lico enfriado a 0]C3 El alco$ol /uedar flotando so0re el 0uffer3 Con la +unta de una varilla del ada, -ediante un -ovi-iento $acia delante y $acia atrs, "usto de0a"o de la se+araci.n entre el alco$ol y el 0uffer, se irn enrollando los fra -entos de -ayor ta-a;o de @D5, co-o un co+o de al od.n -o"ado3 "n contraste se 6resenta un diagrama general de e/traccin de ADN de manera mHs so+isticada- Kue sir,e de re+erencia 6ero Kue no serH desarrollada en sta 6rHctica 3

,isis

Celular

6#a-+.n

de

,isis7

&5asa y #rata-iento

>roteinasa \ 6*+cional7

Eli-inaci.n de >rote'nas 6#a-+.n de eli-inaci.n de +rote'nas7 >reci+itaci.n del @D5 6Bso+ro+anol7

&e$idrataci.n del @D5 6#a-+.n de &e$idrataci.n del @D57 @+licaciones +osteriores

El +rocedi-iento incluye una lisis celular con un deter ente ani.nico /ue solu0ili(a los co-+onentes celulares3 Si es necesario, el @&5 conta-inante +uede ser eli-inado con un trata-iento con &5asa3 ,as +rote'nas celulares son eli-inadas +or un +aso de +reci+itaci.n, el cual $ace +reci+itar las +rote'nas +ero de"a el @D5 en.-ico en soluci.n3 !inal-ente, el @D5 en.-ico es aislado +or una +reci+itaci.n de iso+ro+anol3 El @D5 +urificado +uede ser utili(ado en una variedad de a+licaciones, incluyendo a-+lificaciones de @D5, di estiones con en(i-as de restricci.n, Sout$ern y dotVslots Blots, clona"e y secuenciaci.n3

13 >esar 100 - de la -uestra3 23 @;adirle H00 ^l del ta-+.n @>1, H ^l de &5asa @ 6100 - V-l7 y 20 ^l de +roteinasa \3 Me(clar vi orosa-ente3 33 Bncu0ar la -e(cla a EL]C durante 2 $oras3 H3 @;adir 130^l del ta-.n @>2, -e(clar 0ien e incu0ar L -inutos en $ielo3 L3 Centrifu ar durante L -inutos a 13000 r+-3 E3 &eco er el so0renadante y +asarlo a un tu0o9colu-na 4B@s$redder y centrifu ar durante 2 -inutos a velocidad -2i-a3 D3 #ransferir el l'/uido /ue se $a filtrado al tu0o de a0a"o a un tu0o e++endorf nuevo, sin arrastrar nin =n resto de +reci+itado 6si lo $ay73 83 @;adir 1,L vol=-enes de ta-+.n @>3VE y -e(clar in-ediata-ente -ediante +i+eteo3 F3 &eco er EL0 ^l de esa -e(cla, incluyendo cual/uier +reci+itado /ue +ueda $a0erse for-ado, a la colu-na D5easy -ini s+in3 Centrifu ar durante 1 -inuto a velocidad -ayor a 8000 r+- 610000 r+-7 y desec$ar el l'/uido filtrado3 103 &e+etir el +aso anterior con la -uestra restante3 Desec$ar el filtrado y el tu0o colector3 113 Colocar la colu-na D5easy en un tu0o nuevo de reco ida, a;adir L00 ^l de ta-+.n @W y centrifu ar durante 1 -inuto a 10000 r+-3 Desec$ar el filtrado y reutili(ar el tu0o +ara el si uiente +aso3 123 @;adir L00 ^l de ta-+.n @W a la colu-na D5easy y centrifu ar durante 2 -inutos a 13000 r+- +ara secar 0ien la -e-0rana3 133 #ransferir la colu-na D5easy a un -icrotu0o de 1,L o de 2 -l y a;adirle 100 ^l de ta-+.n @E +recalentado a EL ]C directa-ente en la -e-0rana D5easy3 Bncu0ar L -inutos a te-+eratura a-0iente y centrifu ar durante 1 -inuto a 10000 r+-3 1H3 &e+etir el +aso anterior3 1L3 %uardar la -uestra o0tenida en con elaci.n3 PR"&UNTA INT"&RADORA Es necesario /ue adelante la resoluci.n de los si uientes interro antes, co-o actividad +revia a la e"ecuci.n del la0oratorio3

13 Descri0a la naturale(a el1ctrica de las -ol1culas y la corres+ondientes ca-+os -a n1ticos 23 En /ue consiste el efecto de #a-+.n de la soluci.n +re+arada3

eneraci.n de los

33 Cual es el efecto del alco$ol isoa-ilico so0re el @D5 y /ue otro alco$ol se +odr'a utili(ar3 H3 Descri0a y +re+are un -1todo si-+le +ara el reconoci-iento del @D5 !I!%IO&RAF'A M1todos en el ,a0oratorio de Bio/u'-ica NNN3u+r-3eduV0iolo yV+rofsVvele(Ve2traccion dna3$tNNN3durvi(3co-VM>rotocolosVBMolecular NNN3"oseacortes3co-V+racticasVe2traccion@D53$t-