Bionanocompsitos de carragenina con nanopartculas metlicas

Jos de Jess Infante Rivera, Victoria Campos Tapia, Carlos Alberto Guerrero Salazar, Selene Seplveda Guzmn
FIME Universidad Autnoma de Nuevo Len CIIDIT Universidad Autnoma de Nuevo Len. selene.sepulvedagz@uanl.edu.mx RESUMEN En este trabajo se reporta la preparacin de nanocompsitos a base de biopolimricos de Carragenina tipo con nanopartculas metlicas de plata y oro. La sntesis de las nanopartculas se llev a cabo in situ en presencia de Carragenina , seguida del secado de la dispersin coloidal por liofilizacin para la obtencin de los nanocompsitos. La morfologa de los nanocompsitos y de las nanopartculas fue analizada por microscopa electrnica de barrido (MEB) y microscopa electrnica de transmisin (MET). Las propiedades pticas se evaluaron mediante espectroscopa de UV-vis mientras que la caracterizacin estructural se llev a cabo mediante espectroscopa de infrarrojo. Las propiedades trmicas se estudiaron mediante calorimetra diferencial de barrido (CDB). Los resultados muestran nanocompsitos con propiedades pticas similares a las NP metlicas y con propiedades trmicas mejoradas. Estos nanocompsitos presentan potenciales aplicacin como soporte biodegradable. PALABRAS CLAVE: Nanopartculas metlicas, biopolmero, estabilizacin electrosttica ABSTRACT The preparation of nanocomposites with biopolymer Carrageenan type and metallic nanoparticles of silver and gold is shown in this work. The preparation of nanocomposites was carried out by the in situ synthesis of metal nanoparticles in Carrageenan aqueous solution followed by drying of colloidal solution through freez-drying. The morphology of nanoparticles and nanocomposites was characterized by scanning electron microscopy (SEM) and Transmission electron microscopy (TEM). Optical properties were analyzed by UV-vis spectroscopy, and the structural characterization with infrared spectroscopy. Thermal properties were studied with differential scanning calorimetric (DSC). The results showed nanocomposites with similar optical properties that those observed in metallic nanoparticles, and with improved thermal properties. These nanocomposites have a potencial application as biodegradable substrate. KEY WORDS: Metal nanoparticles, biopolymer, electrostatic stabilization

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INTRODUCCIN En los ltimos aos, la comunidad cientfica e industrial ha mostrado un inters en los materiales biopolimricos y ha habido un incremento en trabajos de investigacin enfocados tanto en mtodos de preparacin, caracterizacin y en las potenciales aplicaciones de biomateriales. Una de las aplicaciones principales de los biopolmeros es en la formacin de hidrogeles los cuales son estructuras tridimensionales formadas de materiales orgnicos que pueden contener gran cantidad de agua. La figura 1 muestra el mecanismo de formacin de un hidrogel a base de un biopolmero. El polvo polimrico al entrar en contacto con el agua se hidrata y se presenta una interaccin de tipo puente de hidrgeno entre las molculas. Estas interacciones pueden ser de corto o largo alcance en funcin de la concentracin, si la concentracin va desde molculas hidratadas individualmente a baja concentracin se presentan los microgeles como en los espesantes. Cuando la concentracin de las molculas que forman interacciones de puente de hidrgeno es alta, forman estructuras tridimensionales de largo alcance conocidas como macrogeles (gelificantes).1 Los hidrogeles tienen propiedades interesantes tales como la hidrofilidad, alta afinidad a materiales biolgicos, transparencia, etc.2 Dada la estructura altamente porosa de los hidrogeles se ha estudiado como soporte en donde se puede atrapar dentro de la estructura tridimensional diversos materiales

orgnicos e inorgnicos. Entre las aplicaciones ms importantes se encuentra la liberacin controlada de medicamentos en el rea mdica la cual se logra aprovechando la respuesta del polmero a cambios externos. 3 La Carragenina es un polisacrido sulfatado, soluble en agua, extrado de las diferentes especies de algas marinas rojas. Existen tres clases de Carragenina, el tipo (Iota) se caracteriza por que puede formar geles elsticos. El tipo (Lambda) tiene una alta solubilidad en agua y no gelifican pero funcionan como agente espesante. El tipo (kappa) es una Carragenina que en presencia de agua forma geles mecnicamente estables.4 La Carragenina tiene una estructura primaria basada en una repeticin de disacridos de (1-3)-D-galactosa y (1-4)-3,6anhidro-D-galactosa y contiene un grupo sulfato por unidad de disacrido en el carbono 2 de la unidad de 1,3 vinculado a la galactosa (figura 2).

Fig. 2 Estructura de la Carragenina a) tipo , b) tipo , c) tipo .4

Fig. 1 Proceso de formacin de un gel.

El proceso de gelacin del Carragenina es termosensible, consiste en la formacin de dobles conformaciones helicoidales seguida por la agregacin de las hlices. A altas temperaturas en solucin se obtiene una conformacin tipo espiral desordenada con una disminucin en la temperatura, la estructura espiral se convierte en una estructura de doble hlice, que posteriormente se agregan para formar zonas de una unin de gel4 (figura 3).

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Fig. 3 Esquema del mecanismo de formacin de gel del Carragenina en medios acuosos (adaptada de la referencia 4

En este trabajo se propone el uso de la Carragenina para la preparacin de nanocompsitos biopolimricos con nanopartculas metlicas. Los nanocompsitos biopolimricos de Carragenina con nanopartculas metlicas sern caracterizados por tcnicas espectroscpicas y se llevar a cabo la caracterizacin estructural. Estos materiales tienen un alto potencial de aplicacin en reas como la biomedicina y la biotecnologa. MATERIALES Y MTODOS Materiales Los materiales empleados para la preparacin de los nanocompsitos biopolimricos fueron la Carragenina tipo grado comercial, el borohidruro de sodio (NaBH4) con una pureza de 98%, el cido tetracloroaurico (HAuCl4.3H2O), nitrato de plata (AgNO3), ambos con una pureza de 99%. Todos los reactivos fueron provistos por la compaa SigmaAldrich y se utilizaron tal y como se entregaron. Tambin se utiliz agua deionizada (DI) con una resistencia de 18 M y nitrgeno lquido. Nanocompsitos biopolimricos de Carragenina tipo con nanopartculas metlicas. En un experimento tpico 70 mg Carragenina se disolvieron en 6 ml de agua desionizada. Cuando la solucin estuvo completamente transparente se adicionaron 0.5 mL de la solucin precursora de HAuCl4.3H2O o AgNO3 al 8.2 M. La mezcla se agit en un vortex por 5 min y posteriormente se agreg 1 ml de la solucin de NaBH4 de concentracin 51.5M. Siguiendo el mismo procedimiento se prepararon varias dispersiones de Carragenina una con la solucin precursora de AgNO3, otra con la solucin precursora de HAuCl4.3H2O y una solucin de Carragenina sin la precipitacin de nanopartculas. Las soluciones se vaciaron en contenedores y fueron sometidas a enfriamiento en nitrgeno lquido por 15 minutos para inducir el ordenamiento de las molculas del biopolmero y despus fueron liofilizados por 24 horas. Los nanocompsitos fueron desmoldados y se llev a cabo su caracterizacin.

La Carragenina es un importante agente gelificante en la industria de alimentos, as como en aplicaciones en la industria farmacutica y en el sector de biotecnologa.5 Recientemente se ha reportado el uso de la Carragenina en el control de la morfologa de nanopartculas de xidos de hierro magnticos, como magnetita (Fe 3O 4 ) y hematita (-Fe2O3). Esto dio lugar a la obtencin de materiales con potenciales aplicaciones en procesos de bioseparacin, termoterapia de cncer y como agentes de contraste en la resonancia magntica de imagen (MRI).6 Posteriormente se demostr que la Carragenina puede actuar como un eficiente estabilizador para impedir la precipitacin de hierro e hidrxidos hasta valores de pH muy alto. Estos resultados sirvieron para la investigacin de otro trabajo en la aplicacin de la sntesis y estabilizacin de partculas de xido de cobalto y nquel.7 Las nanopartculas (NP) de metales nobles tales como el oro y la plata, exhiben unas excelentes propiedades fsicas, qumicas y biolgicas que son intrnsecas a su tamao nanomtrico. El fenmeno de resonancia de plasmn superficial para las partculas de oro y plata ocurre dentro de la regin visible del espectro electromagntico y ha generado un gran inters para un amplio rango de aplicaciones pticas. Las nanopartculas de oro presentan una baja toxicidad y elevada biocompatibilidad. Destacan especialmente sus propiedades fototrmicas, generan calor al ser estimuladas en presencia de luz lser actuando como nano-calefactores.8 Las nanopartculas de plata por otro lado, presentan propiedades funcionales nicas, las cuales conducen a aplicaciones variadas en las reas de catlisis, sensores pticos y bactericidas. Investigaciones recientes en medicina demuestran que las nanopartculas de plata son altamente efectivas como agentes antimicrobiales, y antivirales.9

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CARACTERIZACIN La caracterizacin se efectu mediante espectroscopa de UV-vis utilizando un espectrofotmetro UV-vis marca PerkinElmer modelo Lamda 35. Las mediciones fueron hechas en absorcin y el anlisis se llev a cabo utlizando una celda de cuarzo para las dispersiones acuosas, mientras que las muestras secas fueron analizadas mediante reflectancia difusa utilizando una esfera de integracin modelo RSA-PE-20. El anlisis por espectroscopa de infrarojo (FTIR) se realiz con un espectrofotmetro de infrarrojo Nicolet 6700 FT-IR. Las muestras fueron analizadas en modo de transmitancia utilizando pastillas de KBr. Los espectros fueron adquiridos realizando 32 escaneos a una resolucin de 4 cm-1. La caracterizacin morfolgica se llev a cabo mediante microscopa electrnica de barrido (MEB) en un equipo FEI Nova NanoSEM 200 de emisin de campo. Las muestras fueron observadas utilizando un detector de bajo vaco a un voltaje de aceleracin de 5 KV y a una distancia de trabajo de 5 mm. Las muestras fueron analizadas mediante microscopa electrnica de transmisin (MET) con el equipo FEI modelo TITAN G2 80-300. Una gota de las dispersiones se deposit sobre una pelcula de carbn en una rejilla de cobre. Las muestras fueron analizadas en campo claro a un voltaje de aceleracin de 300 KV. Los nanocompsitos biopolimricos fueron analizados mediante calorimetra diferencial de barrido (CDB) en un equipo Diamond DSC Perkin Elmer. Los termogramas se obtuvieron en un intervalo de temperatura de 10 a 300 C a una velocidad de calentamiento de 10C/min, bajo atmosfera de nitrgeno. RESULTADOS Y DISCUSIN Las dispersiones coloidales obtenidas despus de la precipitacin in situ de nanopartculas metlicas de Ag y Au se presentan en la figura 4a recuadro superior. Se observa que presentan un cambio en coloracin debido a la presencia de las nanopartculas. La dispersin del compsito de Carragenina-Ag tom una coloracin amarillo oscuro, mientras que la dispersin de los compsitos de Carragenina-Au la solucin tom una coloracin azul obscuro (ver en versin en Internet de Ingenieras).

Fig. 4. a) Espectro de UV-vis de las soluciones coloidales de Carragenina b) Imgenes de MET de la Carragenina con nanopartculas Ag, inserto: Imagen de alta resolucin de NP Ag y c) imagen de MET de la Carragenina con nanopartculas Au, inserto imagen de alta resolucin de NP Au .

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Estos cambios en la coloracin estn asociados a la presencia de partculas metlicas en la escala nanomtrica.10 Las dispersiones fueron analizadas mediante espectroscopa de UV-vis y la figura 4a muestra los espectros obtenidos. El espectro de la solucin de Carragenina -puro no exhibe absorcin en la regin visible. Mientras que las dispersiones de Carragenina con nanopartculas de plata presenta una banda de absorcin la regin visible en 405 nm, asociada a la resonancia de plasmn de las nanopartculas de Ag. El espectro obtenido de la solucin de Carragenina -Au presenta tambin una absorcin en la regin visible a 520 nm. La relacin entre la longitud de onda de absorcin y el tamao de las partculas metlicas ha sido ampliamente estudiada y estos resultados sugieren la presencia de partculas menores a los 50 nm. Sin embargo la poca intensidad de esta absorcin hace pensar que se encuentran en poca concentracin.11 Las soluciones coloidales de la Carragenina con nanopartculas metlicas fueron analizadas mediante microscopa electrnica de transmisin (MET). En la figura 4b se observa la micrografa obtenida de las nanopartculas de plata que presentan un tamao alrededor de los 10 nm. La morfologa es cuasi esfrica y se encuentran separadas unas de otras, lo cual indica la estabilizacin debido al polmero. Las partculas fueron analizadas a alta resolucin y la imagen adquirida se muestra en el inserto de la Figura 4b. Se pueden observar lneas de los planos cuya distancia interplanar es de 0.232 nm y corresponden al plano (1,1,1) en una estructura cristalina FCC. En el caso de las dispersiones de la Carragenina -Au la micrografa muestra que las nanopartculas estn aglomeradas formando una estructura tipo serpiente. A diferencia de las nanopartculas de Ag en donde estn bien dispersas en las nanopartculas de Au, la estabilizacin provista por la Carragenina no es tan eficiente. Sin embargo es posible encontrar nanopartculas aisladas alrededor de los 10 nm (figura 4c). El inserto de la figura 4c muestra una imagen de alta resolucin de las nanopartculas de Au. Se puede observar lneas de los planos cuya distancia interplanar es de 0.245 nm asociada al plano (1,1,1) en una estructura cristalina FCC. Las dispersiones de Carragenina , Carragenina -Ag y Carragenina -Au fueron congeladas en nitrgeno lquido y posteriormente secadas mediante

liofilizacin. La Carragenina muestra un color blanco opaco. La Carragenina con nanopartculas presentaron cambios en la coloracin, aquel que contena nanopartculas de Ag tomo una coloracin amarrillo oscuro y el que contena nanopartculas de Au adquiri un color gris brillante (figura 5a, 5c y 5e). La morfologa de los nanocompositos fue analizada mediante microscopia electrnica de barrido (MEB).

Fig. 5 Fotografa digitales de: a) Carragenina -puro, c) Carragenina - Ag, e) Carragenina -Au, Micrograas de MEB de: b) Carragenina -puro, d) Carragenina - Ag y f) Carragenina - Au.

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La figura 5 presenta las imgenes correspondientes y se observa que la Carragenina sin nanopartculas tiene una estructura porosa como ensamble de pelculas de Carragenina orientadas en diferentes direcciones (figura 5b). Este comportamiento se observ tambin en la estructura de los nanocompsitos secos de Carragenina -Ag y Carragenina -Au (figura 5d y 5f). Los nanocompsitos obtenidos fueron caracterizados por espectroscopa de infrarrojo y los espectros adquiridos se muestran en la figura 6.

Para estudiar el efecto del congelamiento sobre las propiedades pticas del material se adquirieron espectros de UV-vis de reflectancia difusa de los nanocompsitos. La figura 7a muestra los espectros correspondientes al polmero liofilizado de Carragenina -puro y a los nanocompsitos de Carragenina -Ag y Carragenina -Au. Se puede observar que el espectro de Carragenina -puro no muestra absorcin en la regin visible sin embargo existe una desviacin de la lnea base del espectro asociado con la dispersin de luz. Por otro lado ambos espectros, el de Carragenina -Ag y Carragenina -Au, muestran las bandas de absorcin asociadas a las nanopartculas de Ag y Au a 436nm y 525 nm respectivamente. Sin embargo, una nueva banda a 592 nm se observa en los dos espectros, esta banda corresponde a la resonancia de plasmn de las nanopartculas aglomeradas.12

Fig. 6 Espectroscopa FT-IR de los nanocompsitos obtenidos.

De manera general se observa la presencia de las bandas de absorcin caractersticos del O-H alrededor de los 3000-3500 cm-1, adems de las tpicas bandas de absorcin de la Carragenina para las tres muestras, alrededor de 1040-1070 cm-1 para C-O y C-OH, 1225 cm-1 correspondiente al estiramiento asimtrico del S-O, 920 cm-1 para C-O-C atribuible al estiramiento en 3, 6- anhydrogalactosa, se present una clara banda a 845-850 cm-1 del estiramiento C-O-S de la (1-3)-D-galactosa y por ltimo se present una banda alrededor de los 805 cm-1 de los anhidrogalactosa-2-sulfato atribuible a trazas de Carragenina tipo .6 Adicionalmente para la muestra Carragenina -Ag aparece una banda de 928 cm-1 asociada a la vibracin del ion nitrato debido posiblemente a residuos del precursor metlico. Estos resultados muestran que la Carragenina no sufre cambios en su estructura qumica debido a reacciones de oxidacin.

Fig. 7. a) Espectro de UV-vis de reectancia difusa de los nanocompsitos obtenidos; b) Termogramas de calorimetra diferencial de barrido de las muestras obtenidas (CDB).

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La aglomeracin de las partculas ocurre durante el congelamiento de la muestra por la formacin de la doble hlice de la Carragenina que resulta en una disminucin de la distancia entre las nanopartculas, lo que favorece la aglomeracin. Esto es consistente con el cambio en el color de la dispersin del biopolmero con nanopartculas metlicas en dispersin. Para analizar los cambios estructurales en la formacin del hidrogel de Carragenina en presencia de las nanopartculas metlicas se llev a cabo un anlisis por calorimetra diferencial de barrido (CDB). La figura 7b muestra los termogramas obtenidos para el Carragenina en polvo, la Carragenina despus de liofilizacin y de los nanocompsitos de Carragenina -Ag y Carragenina -Au. Para todos los termogramas se observa un pico exotrmico asociado a la degradacin del biopolmero, sin embargo, la temperatura a la que se observa este pico se ve modificado para los distintos materiales. El pico exotrmico en el Carragenina polvo (sin procesar) se observa a 220 C y es muy similar al observado para el de Carragenina liofilizado (221 C).13 En el caso de los termogramas del Carragenina con nanopartculas, los picos exotrmicos presentan desplazamientos a mayor temperatura y un ligero incremento en el rea con respecto a la Carragenina tipo . El pico exotrmico para el nanocompsito de Au se present a 236 C mientras que el que contiene nanoaprtculas de Ag a 257 C. Presumiblemente estos desplazamientos en la temperatura de degradacin sugieren que las nanopartculas metlicas tienen una fuerte influencia en el arreglo de las hlices de la Carragenina que modifica la estructura hacindola trmicamente ms estable. Estos resultados son consistentes con lo observado en las propiedades pticas y la caracterizacin por microscopa electrnica, en donde la Carragenina presenta una mayor interaccin con las nanopartculas de Ag que acta como estabilizador controlando su tamao y las propiedades de absorcin. CONCLUSIONES Se prepararon exitosamente bionanocompsitos de Carragenina con nanopartculas metlicas mediante la sntesis in situ . La presencia de

nanopartculas metlicas de Au y Ag no modific la estructura qumica del polmero, sin embargo las propiedades pticas fueron muy similares a las de las nanopartculas metlicas obtenindose biomateriales que presentan absorcin en la regin visible del espectro. La formacin de estructuras trmicamente ms estables durante la obtencin de los nanocompsitos es atribuida a la presencia de nanopartculas metlicas que muestran interacciones con cadenas del biopolmero. AGRADECIMIENTOS Los autores agradecen el financiamiento otorgado por CONACYT con el proyecto CB 106365 y tambin al CIIDIT de la Universidad Autnoma de Nuevo Len, especialmente a la coordinacin de Materiales Avanzados y al Laboratorio de Microscopa Electrnica. As mismo Jess Infante Rivera agradece la beca Santander de Movilidad Nacional Enero-Junio 2011 y Victoria Campos Tapia la beca CONACYT otorgada. REFERENCIAS 1. Thorne, J.; Vine, G.; Snowden, M., Microgel applications and commercial considerations. Colloid & Polymer Science 2011, 289 (5), 625-646. 2. Pavlyuchenko, V.; Ivanchev, S., Composite polymer hydrogels. Polymer Science Series A 2009, 51 (7), 743-760. 3. Das, M., Stimulus-Responsive Microgels: Design, Properties and Applications. Department of Chemistry University of Toronto 2008, thesis. 4. Dumitriu, S., Polymeric Biomaterials. 2002. 5. MacArtain, P.; Jacquier, J. C.; Dawson, K. A., Physical characteristics of calcium induced carrageenan networks. Carbohydrate Polymers 2003, 53 (4), 395-400. 6. Daniel-da-Silva, A. L.; Trindade, T.; Goodfellow, B. J.; Costa, B. F. O.; Correia, R. N.; Gil, A. M., In Situ Synthesis of Magnetite Nanoparticles in Carrageenan Gels. Biomacromolecules 2007, 8 (8), 2350-2357. 7. Jones, F.; Clfen, H.; Antonietti, M., Interaction of -Carrageenan with Nickel, Cobalt, and Iron Hydroxides. Biomacromolecules 2000, 1 (4), 556-563.
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