Microscopio Electrnico

El microscopio electrnico fue desarrollado en los aos 30 y fue utilizado con especmenes biolgicos por Albert Claude, Keith Porter y George Palade en los aos 40 y 50. El ME puede lograr mucha mayor resolucin que el MO debido a que la longitud de onda de los electrones es mucha ms corta que la luz. Debido a esto puede obtenerse mayor cantidad de informacin, aspecto muy importante en la investigacin y en el diagnstico patolgico.

Prof. Ivn Rebolledo

Diferencias entre MO y ME.

La principal ventaja del ME sobre el MO es la resolucin y no la magnificacin. La resolucin es la capacidad del instrumento de discriminar como independientes dos puntos muy cercanos. En el MO depende de la y de la AN de los objetivos, pudiendo obtenerse una resolucin de 0.2 mm (200 nm) con luz visible y 0.1 mm (100 nm) con luz ultravioleta. El ME utiliza como fuente luminosa un rayo electrnico que posee una igual a 0.05 , que es modificado en su trayecto por los campos electromagnticos y cuya resolucin, para materiales biolgicos, es de 1 a 2 nm.
Convierta todas las cantidades mencionadas en Angstrm.

Tanto el MO como el ME comprenden 3 sistemas relacionados con la imagen : iluminacin de la muestra, formacin de la imagen y traduccin de la imagen. El sistema de iluminacin comprende una fuente de radiacin (luz visible o electrones) y el condensador que enfoca el rayo en el plano de la muestra. Despus de pasar por la muestra, el rayo entra al sistema de formacin de la imagen, conformado por los lentes de vidrio (MO) o los lentes electromagnticos (ME). El sistema de traduccin de la imagen corresponde al sistema de obser-vacin y registro fotogrfico de la imagen.

Sistemas del ME.

El ME consta de 3 secciones : sistema elctrico, sistema de vaco y columna del microscopio. 1. Sistema elctrico : consiste en una unidad de alta tensin, una unidad de suministro de corriente para las lentes electromagnticas y una unidad estabilizadora del voltaje en la unidad de alta tensin y las lentes electromagnticas. La unidad de alta tensin opera entre -20 y -100 KV para generar el alto voltaje necesario para obtener un rayo electrnico de muy corta .

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2. Sistema de vaco : existen 3 razones por las cuales debe haber vaco en la columna de un ME : a) frente al aire, los electrones solo podran viajar unos micrmetros antes de chocar con alguna partcula y la distancia entre el filamento y la pantalla de observacin es casi de un metro. As, el vaco permitira que los electrones puedan desplazarse en toda esta extensin sin chocar con ninguna partcula. b) cualquier molcula gaseosa existente entre el filamento y el nodo pudiera convertirse en iones cargados, originando una descarga elctrica en lugar de un rayo de electrones. c) en vaco, la vida media del filamento es mayor, reducindose la posibilidad de oxidacin cuando se caliente. Para lograr vaco, se dispone de dos tipos de bombas : una de difusin de aceite respaldada por una bomba rotatoria mecnica. Como las vibraciones de estas bombas pueden alterar la imagen en el ME, se las instala alejadas del instrumento. Para evitar tener que ventilar y reevacuar toda la columna cada vez que se desee cambiar la muestra o las placas, existe un sistema de compuertas que aislan estos compartimentos.

3. Columna del microscopio : consiste en un tubo metlico al vaco en el cual estn ubicados, de arriba abajo, el filamento de tungsteno encerrado en el cilindro del ctodo, la placa del nodo, un nmero de lentes electromagnticas, una pantalla fluorescente de observacin y un dispositivo con placas fotogrficas. 3. (a) Produccin de electrones : el rayo de electrones es producido por el llamado can electrnico, conformado por un filamento de tungsteno (wolframio, W) introducido en una cubierta metlica cilndrica denominada cubierta del ctodo, el cual tiene un pequeo orificio en su centro; por debajo de ella, est una pequea placa metlica llamada nodo (polo positivo). Al circular corriente por el filamento se producen electrones debido a una emisin termoinica, cuando el filamento llega a calentarse a 2.200 C. Los electrones son arrastrados hacia el nodo por una gran diferencia de potencial entre el ctodo (-20 a 200 KV) y el nodo (cero). Esta diferencia en el voltaje se conoce como voltaje de aceleracin y la de los electrones es inversamente proporcional a esta diferencia de potencial.

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CATODO
Filamento

El rayo electrnico producido en el can electrnico es enfocado por el lente condensador en el plano del especmen como un punto de luz de un dimetro muy pequeo. Si se aumenta la corriente en el lente condensador, el punto se produce por encima del espcimen (sobre-enfocado) y si se disminuye la corriente, el punto se forma por debajo del espcimen (subenfocado). Normalmente, existen dos lentes condensadores como un sistema que d mejor iluminacin que uno solo. En este caso, el primer lente condensador reduce el dimetro del rayo electrnico de 50 mm a 1 mm. Este rayo reducido es proyectado en el espcimen por el segundo lente condensador. En la prctica, la corriente del primer lente condensador se mantiene constante y se vara la corriente del segundo lente para un enfoque ms preciso sobre el espcimen.

ANODO

3. (b) Lentes electromagnticos : las lentes en el ME son bobinas electromagnticas cilndricas capaces de crear campos magnticos que puedan modificar la trayectoria de los electrones. Una bobina se encuentra cubierta con una caparazn de hierro dejando en su centro un pequeo orificio. Para enfocar un rayo electrnico en un plano dado puede variarse la corriente que pasa por la bobina. Al aumentar la cantidad de corriente que pasa por una lente el rayo se acerca a la lente y al reducir la corriente, aumenta la longitud focal. As, las lentes electromagnticas tienen una longitud focal variable.
Campo magntico

A
Dibuje en la parte derecha del dibujo, cmo se representara el campo magntico al aumentar la cantidad de corriente que pasa por el lente A.

Al chocar el rayo contra el espcimen, muchos electrones lo atraviesan sin desviarse, pero otros son desviados por la presencia de tomos de metales pesados presentes en ciertas estructuras de la muestra. Esto forma un modelo en el rayo emergente que es transformado en imagen por el lente objetivo.

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El lente objetivo genera un campo magntico muy concentrado Enfoca los electrones que pasaron por l, unos milmetros por debajo del plano del espcimen. All se forma una imagen aumentada (200 x), llamada imagen intermedia y la calidad de esta imagen es la que determina la calidad de la imagen final.

Esta imagen intermedia es aumentada por el lente proyector. Este lente tiene una profundidad de foco de varios metros, as que no es crtica la distancia entre este lente y la pantalla de observacin y las placas fotogrficas. Debido a esta profundidad de foco, los cambios finos en el enfoque no son visibles a simple vista, por lo que debe utilizarse un MO binocular. 4. Formacin de la imagen : La parte final de la columna del ME es una pantalla de observacin, debajo de la cual se aloja un sistema especial para las placas fotogrficas. La pantalla est cubierta con un material fluorescente que al ser bombardeado con los electrones emite luz visible. Entonces, solo los electrones que lograron pasar por la muestra, producirn una imagen luminosa; los rayos desviados no emiten luz y sus zonas se vern negras. Por otra parte, el grano del material fluorescente slo permite una resolucin cercana a 35 mm, por tanto, la placa fotogrfica debe contener una emulsin fotogrfica de grano muy fino, para captar la mayor cantidad de estructuras con muy buena resolucin.

De este modo, es el lente objetivo el que determina el poder de resolucin del ME y es aqu donde las aberraciones toman importancia. Debido a que la profundidad de foco del lente objetivo es cerca de 200 nm, el grosor aconsejable de la muestra debe ser de 60 nm. La nitidez de la imagen se logra variando la corriente que pasa por el lente objetivo.

Por debajo del lente objetivo, en el ME puede haber 3 lentes : difractor, intermedio y proyector. Generalmente el lente difractor se utiliza para estudios mineralogrficos. La imagen producida por el lente objetivo es captada y mantenida constante por el lente intermedio.

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Cable de alto voltaje

Can electrnico Condensador 1

Apertura del condensador

Condensador 2

Intercambiador muestras

Lente objetivo

Apertura del objetivo

Apertura del difractor

Lente difractor

Lente proyector 1 Microscopio Binocular Lente proyector 2

Panel izquierdo de controles

Ventana de observacin

Cmara para placas fotogrficas

Panel derecho de controles

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Componente
Can electrnico Condensador 1 Condensador 2 Apertura del Condensador Lente objetivo Apertura del objetivo

Funcin
Genera los electrones y proporciona el primer grupo coherente de rayo electrnico Determina el punto de iluminacin ms pequeo sobre el espcimen Vara la cantidad de iluminacin sobre el espcimen Reduce las aberraciones esfricas Produce la primera imagen, la enfoca y la aumenta Reduce las aberraciones esfricas y controla el contraste Proporciona el modelo de difraccin y ayuda a magnificar la imagen del objetivo Selecciona el rea que ser difractada Ayuda a magnificar la imagen Ayuda a magnificar la imagen Contiene la pantalla de observacin para la imagen final Aumenta la imagen de la pantalla de observacin para un enfoque ntido Contiene las placas fotogrficas para registrar la imagen final

Lente intermedio o Difractor Apertura del difractor Lente proyector 1 Lente proyector 2 Cmara observacin

Microscopio binocular Cmara de fotografa

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1 milmetro = 1000 micrmetros 1 mm = 1000 m 1 m = 0.001 mm

1 micrmetro = 1000 nanmetros 1 m = 1000 nm 1 nm = 0.001 m

1 nanmetro = 1 nm = 1 =

10 Angstrom 10 0.1 nm

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Problemas.

Resuelve lo siguiente :

1. Cuntos nm son 550 ?

Respuesta

2. Cuntos nm son 0.35 m? Respuesta 3. Cuntos m son 175 nm? Respuesta 4. Una microvellosidad mide 25 m de largo, convierta esta cantidad en nm. Respuesta 5. Una mitocondria mide 350 nm de ancho, cuntos m son? Respuesta 6. Un cuerpo residual mide 350 nm de dimetro, a cuntos m corresponden? Respuesta 7. Una membrana mide 70 de grosor, convierta esta cantidad en nm. Respuesta