ESTUDIO CINTICO DE LA

REACCINCATALIZADA POR LA
CELOBIASA (BIOFUEL)

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LACC2

INDICE:
1.
2.
3.
4.
5.

Construccin de la curva de calibrado.

Determinacin de la velocidad de reaccin en presencia y ausencia de enzima.
Determinacin del efecto de la temperatura en la velocidad de reaccin.
Determinacin del efecto del pH en la velocidad de reaccin.
Determinacin del efecto de la concentracin de enzima en la velocidad de
reaccin.
6. Determinacin del efecto de la concentracin de sustrato en la velocidad de
reaccin.

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1. Construccin de la curva de calibrado

Curva de calibrado
PATRON
S1
S2
S3
S4
S5

[p-nitrofenol]
(nmol/ml)
0
12.5
25
50
100

Absorbancia (410 nm)

0.000
0.223
0.474
0.912
2.180

CURVA DE CALIBRADO
2,5
y = 0,0218x - 0,0591
R = 0,9929

ABSORBANCIA

2
1,5
1
0,5
0
0

20

40

60
[P-NITROFENOL] (NM/ML)

80

100

120

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2. Determinacin de la velocidad de reaccin en presencia y

ausencia de enzima
RESULTADOS
CUBETA

TIEMPO (min)
0
1
2
4
6
8
8

INICIO
E1
E2
E3
E4
E5
FIN

ABSORBANCIA
(410nm)
0.000
0.228
0.477
0.993
1.476
1.911
0.030

[P-NITROFENOL] (NM/ML)

[P-NITROFENOL]/TIEMPO
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0

TIEMPO (MIN)

VELOCIDAD/TIEMPO

VELOCIDAD (NM/ML MIN)

13,5
13
12,5
12
11,5
11
0

4
5
TIEMPO
(MIN)

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Concentraciones:
[E1]= (0,228+0,0591)/0,0218=13,17 nm/mL
[E2]= (0,477+0,0591)/0,0218=24,59 nm/mL
[E3]= (0,993+0,0591)/0,0218=48,26 nm/mL
[E4]= (1,476+0,0591)/0,0218=70,42 nm/mL
[E5]= (1,911+0,0591)/0,0218=90,37 nm/mL
Velocidades:
VE1= 13,17/1=13,17nm/mL min
VE2= 24,59/2=12,30nm/mL min
VE3= 48,26/4=12,07nm/mL min
VE4= 70,42/6=11,74nm/mL min
VE5= 90,37/8=11,30nm/mL min

CONCLUSIONES
A la vista de los resultados obtenidos en la experiencia realizada, se aprecia una
relacin clara y significativa del aumento de la velocidad de la reaccin al aadir
un catalizador, en este caso, el enzima celobiasa.
Esto se puede verificar comparando los resultados de las muestras (E1, E2, E3,
E4 y E5), cuyos tiempos de exposicin al enzima fueron diferentes, con los tubos
control (inicio y fin) en los que no se aadi enzima y, por lo tanto, la reaccin
transcurri a su velocidad natural. Si comparamos concretamente los tubos E5
y fin, en los cuales la reaccin se desarroll durante 8 minutos, se observa que
la reaccin catalizada por el enzima produce alrededor de 64 veces ms cantidad
de producto en el mismo tiempo de reaccin, o lo que es lo mismo, se observa un
aumento significativo de la reaccin.
La velocidad de reaccin va disminuyendo a medida que avanza el tiempo debido
a que se va agotando la cantidad de sustrato y va disminuyendo la cantidad de
producto que se genera.

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3. Determinacin del efecto de la temperatura en la velocidad de

reaccin
RESULTADOS
TEMPERATURA (C)
0
22
37

ABSORBANCIA (410nm)
1.141
1.230
2.223

[P-NITROFENOL ]/T
120

[P-NITROFENOL] (NM/ML)

100
80
60
40
20
0
0

10

15

20

25

30

35

40

35

40

TEMPERATURA (C)

VELOCIDAD/TEMPERATURA
VELOCIDAD (NM/ML MIN)

55
50
45
40
35
30
25
20
0

10

15

20

25

TEMPERATURA (C)

30

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Concentraciones:
[0C]= (1,141+0,0591)/0,0218=55,05 nm/mL
[22C]= (1,230+0,0591)/0,0218=59,13 nm/mL
[37C]= (2,223+0,0591)/0,0218=104,68 nm/mL
Velocidades:
V0= 55,05/2=27,53nm/mL min
V22= 59,13/2=29,57nm/mL min
V37= 104,68/2=52,34nm/mL min

CONCLUSIONES
En este caso, se vuelve a apreciar la implicacin directa y significativa de otro de
los factores que afectan a la actividad enzimtica, la temperatura.
Todos los enzimas presentan una temperatura a la que su actividad es mxima o
a la que su rendimiento es el ms ptimo (mayor productividad). En el caso que
nos ocupa, se aprecia claramente este hecho, ya que se aprecia un aumento
considerable del rendimiento de la reaccin a los 37C, mientras que a las otras
temperaturas ensayadas, el nivel de produccin de p-nitrofenol se mantiene
prcticamente constante y sin variaciones demasiado significativas.

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4. Determinacin del efecto del pH en la velocidad de reaccin

RESULTADOS
pH

ABSORBANCIA
(410nm)
5
1,142
6,3
0,941
8,6
0,019

[P-NITROFENOL]/PH
[P-NITROFENOL] (NM/MIN)

60
50
40
30
20
10
0
5

5,5

6,5

7,5

8,5

7,5

8,5

PH

VELOCIDAD/PH
VELOCIDAD (NM/ML MIN)

30
25
20
15
10
5
0
5

5,5

6,5

7
PH

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Concentraciones:
pH5= (1,142+0,0591)/0,0218=55,10 nm/mL
pH6,3= (0,941+0,0591)/0,0218=45,88 nm/mL
pH8,6=(0,019+0,0591)/0,0218=3,58 nm/mL

Velocidades:
V5= 55,10/2=27,55nm/mL min
V6,3= 45,88/2=22,94nm/mL min
V8,6= 3,58/2=1,79nm/mL min

CONCLUSIONES
Otro de los factores que afectan a la actividad enzimtica es el pH.
Hay un rango de pH ptimo en la que la actividad enzimtica es mxima, en
nuestro caso hay un mayor rendimiento a pH 5 y a medida que nos alejamos de
este pH la actividad de la enzima decrece.

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5. Determinacin del efecto de la concentracin de enzima en la

velocidad de reaccin
RESULTADOS
TIEMPO (min)

CUBETA

1
2
8
1
2
8

H1
H2
H3
L1
L2
L3

ABSORBANCIA
(410nm)
0.210
0.459
0.916
0.183
0.430
0.911

[P-NITROFENOL]/TIEMPO
50

alta [enzima]

baja [enzima]

[P-NITROFENOL] (NM/ML)

45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
0

4
6
TIEMPO (MIN)

10

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VELOCIDAD/TIEMPO

VELOCIDAD (NM/ML MIN)

alta [enzima]

baja [enzima]

13
12
11
10
9
8
7
6
5
4
0

TIEMPO (MIN)

Concentraciones:
[H1]= (0,210+0,0591)/0,0218=12,34 nm/mL
[H2]= (0,459+0,0591)/0,0218=23,77 nm/mL
[H3]= (0,916+0,0591)/0,0218=44,73 nm/mL
[L1]= (0,183+0,0591)/0,0218=11,11 nm/mL
[L2]= (0,430+0,0591)/0,0218=22,44 nm/mL
[L3]= (0,911+0,0591)/0,0218=44,50 nm/mL

Velocidades:
VH1= 12,34/1=12,34 nm/mL min
VH2= 23,77/2=11,89 nm/mL min
VH3= 44,73/8=5,59 nm/mL min
VL1= 11,11/1=11,11 nm/mL min
VL2= 22,44/2=11,22 nm/mL min
VL3= 44,50/8=5,56 nm/mL min
CONCLUSIONES
En esta experiencia, lo que se pretende es verificar el efecto de la concentracin
del catalizador sobre la velocidad de reaccin.
Un aumento en la concentracin de enzima no interfiere en la velocidad de
reaccin que vemos como esta disminuye con el paso del tiempo al igual que en
el caso 2.

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6. Determinacin del efecto de la concentracin de sustrato en

la velocidad de reaccin
RESULTADOS
TIEMPO (min)
1
2
8
1
2
8

CUBETA
H1
H2
H3
L1
L2
L3

ABSORBANCIA (410nm)
0.205
0.468
1.591
0.054
0.136
0.341

[P-NITROFENOL/TIEMPO

[P-NITROFENOL] (NM/ML)

alta [sustrato]

baja [sustrato]

80
70
60
50
40
30
20
10
0
0

TIEMPO (MIN)

VELOCIDAD/TIEMPO

VELOCIDAD (NM/ML MIN)

alta [sustrato]

baja [sustrato]

14
12
10
8
6
4
2
0
0

TIEMPO (MIN)

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Concentraciones:
[H1]= (0,205+0,0591)/0,0218=12,11 nm/mL
[H2]= (0,468+0,0591)/0,0218=24,18 nm/mL
[H3]= (1,591+0, 0591)/0,0218=75,69 nm/mL
[L1]= (0,054+0, 0591)/0,0218=5,19 nm/mL
[L2]= (0,136+0, 0591)/0,0218=8,95 nm/mL
[L3]= (0,341+0,0591)/0,0218=18,35 nm/mL
Velocidades:
VH1= 12,11/1=12,11 nm/mL min
VH2= 24,18/2=12,09 nm/mL min
VH3= 75,69/8=9,46 nm/mL min
VL1= 5,19/1=5,19 nm/mL min
VL2= 8,95/2=4,48 nm/mL min
VL3= 18,35/8=2,29 nm/mL min

CONCLUSIONES
A mayor concentracin de sustrato, a una concentracin fija de enzima se
obtiene un mayor rendimiento. Al ir aumentando este rendimiento la velocidad
de reaccin va disminuyendo.

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