Replicacin Viral

Los virus son parsitos intracelulares obligados por cuanto carecen de organelos que les pemitan una vida auttrofa. La cintica de replicacin viral vara dependiendo del tipo de genoma que posea el virin, esto permite inferir los mecanismos de interaccin virusclula de un virus desconocido a partir de hallazgos presentes en virus con caractersticas genticas similares. La replicacin viral requiere de una interaccin entre los distintos compartimentos celulares y las macromolculas virales. Las proteinas virales son sintetizadas en los ribosomas libres en el citosol o asociados al retculo endopleasmico rugoso (RER) y son transportadas por sistemas de vesculas hacia los distintos componentes del aparato de Golgi (cis, medium y trans Golgi) como se observa en la siguiente esquema. La localizacin celular de las proteinas virales est sujeta a informacin presente en las protenas en el denominado pptido seal, que es el conjunto de los primeros aminocidos sintetizados en el ribosoma, esta secuencia constituye el cdigo postal para el direccionamiento de la proteina en un determinado espacio celular. Unos agentes virales tienen una replicacin estrictamente citoplsmica, mientras que otros alcanzan el ncleo celular, todo dependiendo de la adaptacin realizada en tre los virus y las clulas que las hospedan.

Citosol CGN: cis Golgi network TGN: trans Golgi trans network

RER

cis

medium

Ncleo

Lisosoma

Endosoma tardo

Endosoma temprano

Figura 2.1. Transporte de proteinas entre los distintos compartimentos celulares y en el citosol. Las proteinas que se dirigen al aparto de Golgi son modificadas mediante procesos de maduracin postranslacional que requieren del sistema enzimtico presente en los diferentes componentes del aparto de Golgi (cis, medium y trans Golgi) que garantizar el adecuado plegamiento molecular, los clivajes proteolticos y da lugar en la fase final a la proteina madura funcional que poseer las funciones de proteina estructural o no estructural. Las glicoprotenas virales requieren de este sistema de transporte para garantizar su localizacin en la membrana celular, mientras que otras proteinas que constituyen las

cpsides virales pueden realizar su proceso de sntesis y transporte en el sitema de citosol y dirigidos slo por el citoesqueleto celular.
S S S S

trans

Clivajes proteolticos Amidacin Piroglutaminacin

medium

Sialilacin Sulfatacin Clivajes proteolticos

cis

N glicosilacin O glicosilacin Glicosilacin de lpidos N glicosilacin Plegamiento Control de calidad

RER

Ncleo

Figura 2.2: Sistema de maduracin y transporte de proteinas virales. La produccin de partculas virales requiere que la clula sintetize ARN mensajero, el ARN de tipo mensajero utiliza la maquinaria biosinttica celular para la sntesis de proteinas virales. La clula eucariota slo posee a nivel nuclear las enzimas necesarias para la produccin de ARN mensajero a partir de ADN de doble cadena, por esta razn en caso que el virus posea un genoma diferente al ADN de doble cadena debe aportar a la clula las enzimas necesarias para la sntesis de ARNm. Por convencin se denominan cadenas genmicas (+) aquellas que se escriben en direccin 5!-3! o en el caso de los ARN aquellos que se reconocen como mensajeros. Las familias virales se organizan de acuerdo a la composicin genmica en 7 grupos arbitrarios que se reconoce como la clasificacin de Baltimore: Grupo I: virus con genoma de tipo ADN de doble cadena (Adenoviridae, Herpesviridae, Papovaviridae, Poxviridae). De estas la familia Adenoviridae y Herpetoviridae se replican en el ncleo celular. La familia Poxviridae se replica en el citoplasma y posee sus propias enzimas para la replicacin genmica. Grupo II: virus con genoma de tipo ADN de cadena nica (Parvoviridae). La replicacin de esta familia viral se realiza en el ncleo. Se sintetiza la cadena (-) de ADN que a su vez sirve de molde para la sntesis de genomas virales y para la sntesis de cadenas de ARNm. Grupo III: virus con genoma de tipo ARN de doble cadena (Reoviridae). El genoma de los miembros de esta familia viral es segmentado. Cada segmento se transcribe en forma independiente para producir ARNm monocistrnico. Grupo IV: virus con genoma de tipo ARN de cadena sencilla y sentido positivo (+) (Astroviridae, Caliciviridae, Coronaviridae, Flaviviridae, Picornaviridae, Togaviridae). En el caso de los Picornaviridae el ARN es policistrnico, la translacin resulta en la sntesis de

una poliproteina que luego es clivada en forma autocataltica para formar las proteinas estructurales y no estructurales. La transcripcin de los virus de la familia Togaviridae es mucho mas compleja y requiere dos o mas rondas de translacin. Grupo V: virus con genoma de tipo ARN de cadena sencilla y sentido negativo ()(Arenaviridae, Bunyaviridae, Filoviridae, Paramyxoviridae, Orthomyxoviridae, Rhabdoviridae). Estos virus requieren de una ARN polimerasa ARN dependiente. En caso de la familia Orthomyxoviridae se producen ARNm monocistrnicos que sirven de molde para la sntesis genmica. En los virus de cadena nica se producen tambin ARN monocistrnicos. Grupo VI: virus con genoma de tipo ARN de doble cadena, sentido (+) y ADN intermediario en su ciclo (Retroviridae). Son los nicos virus diploides en los que el ARN no codifica sino que sirve de molde para la transcripcin inversa. Grupo VII: virus con genoma de tipo ADN con ARN intermediario (Hepadnaviridae). Como los retrovirus tambin hacen retrotranscripcin pero a diferencia de ellos se lleva a cabo durante el proceso de maduracin viral. En la sigiente tabla se observan las diferentes familias virales con el tipo de material gentico.
Tipo de genoma ADN de doble cadena i ncom plet a ADN de cadena sencilla ADN de doble cadena Virus Virus tipo B B19 CMV

Hepadnaviridae Parvoviridae Poxviridae Herpesviridae Adenoviridae Papovaviridae

Hepatitis Parvovirus Viruela HSV1y2,

EBV, y

ARN

de

polaridad

positiva

Caliciviridae Picornaviridae Togaviridae Flaviviridae Coronaviridae

Adenovirus respiratorios HPV entricos Polio, HAV

Rubola YFV, Dengue, HCV Coronavirus respiratorios Paraifluenza, y RSV entricos Influenza A, B y C Hantavirus Rabia Ebola Junin, Machupo Rotavirus

ARN

de

polaridad

negativa

Paramyxoviridae Orthomyxoviridae Bunyaviridae Rhabdoviridae Filoviridae Arenaviridae

ARN de doble cadena

Reoviridae

Tabla 2.1: Clasificacin de las partculas virales por tipo de genoma. Como vemos en el siguiente esquema todos los virus cualquiera que sea su genoma confluyen por diferentes mecanismos de transcripcin en la produccin a nivel intracelular con la formacin de ARNm para la translacin final a proteinas virales. El tipo viral segun la clasificacin de Baltimore se asigna en nmeros romanos.

VII ADN de doble cadena incompleta

II ADN de cadena sencilla (+)

ARN polaridad +

VI

ADN de cadena sencilla (-)

ADN de doble cadena

I P R O T E I N A

ARN polaridad + IV

ARN polaridad -

ARN mensajero

ARN polaridad ARN de doble cadena V III Figura 2.1: Vias de sntesis para la replicacin y translacin de la informacin gentica segn la clasificacin viral de Baltimore. Todos los virus sin importar su tipo de genoma (ARN o ADN) deben producir ARNm que pueda ser transladado por los ribosomas celulares.

Para la comprensin de la patogenia de la infeccin viral es importante conocer cual es la secuencia de acontecimientos observados en el interior de la clula husped. Si bien los pasos que se enumeran a continuacin no son un esquema rgido y nico, en el interior de la clula infectada; si sirven como organigrama mental para comprender como funcionan los virus y algunos mecanismos patognicos.El ciclo replicativo en el cual hay produccin de progenie viral y liberacin de partculas usualmente por lisis de la clula hospedera se denomina ciclo ltico. La sola destruccin de tejidopor la replicacin viral es un mecanismo que puede llevar al dao tisular y a la falla orgnica por lesin del tejido noble. En la fase inicial ocurre lo que se conoce como periodo de eclipse, el cual estara dado in vitro como el lapso transcurrido entre la desaparicin de los viriones en el medio circundante, la denudacin, la liberacin del genoma viral a nivel intracelular y la aparicin de nuevos viriones.
1000 Periodo de latencia 100 Virus extracelular

10 Periodo de eclipse 0 2 4 6 8 TIEMPO 10 12

mvc

Figura 2.2: Cintica de produccin de partculas virales al interior de una clula infectada. El perodo de latencia est marcado por la aparicin de nuevos viriones en el medio extracelular. Otros definen lo que se conoce como periodo de latencia el cual estara comprendido entre la captacin de viriones infectantes hasta la aparicin del primer nuevo virion en el medio circundante. Los periodos de eclipse y latencia pueden hacerse iguales en el caso de los virus cubiertos que maduran tomando parte de la membrana celular. Los pasos esenciales en la multiplicacin viral son los siguientes: 1. Aproximacin o acercamiento: de la partcula viral infecciosa a la superficie de la clula blanco en el husped. Aqu juegan un papel importante las cargas elctricas presentes en la superficie del virin y la clula y la fluidez de las membranas celular y viral. 2. Adsorcin: es el encuentro o unin entre el virin y la clula blanco, este tiene lugar debido a los elementos complementarios entre las partes. De un lado el virus aporta las protenas de unin (viral atachment units) y por otro lado las clulas aportan los receptores de membrana. Este paso involucra el concepto de afinidad entre virin y clula, lo que nos explica porque los virus pueden ser selectivos de rgano o tejido (tropismo) y el porque hay agentes que causan infecciones localizadas (vgr: virus respiratorios) o generalizadas (vgr. rubola, sarampin). La afinidad puede estar dada por tan solo pequeas secuencias de aminocidos localizadas en un solo pptido que reconocen este sitio especfico en la membrana de la clula permisiva o por zonas antignicas contiguas pertenecientes a varias protenas virales. 3. Penetracin o entrada del virin: en el modelo de infeccieon de los bacterifagos la cpside viral permanece en la superficie bacteriana y solo penetra el cido nucleico, en los virus animales este hecho es excepcional. En los organismos complejos como el cuerpo humano los virus pueden penetrar a su hospedero a traves de las superficies corporales (piel y membranas mucosas). La piel intacta constituye una barrera protectora para el ingreso de viriones por ser una superficie seca, medianamente cida y con presencia de bacterias saprofticas. Las superficies mucosas presentan una serie de barreras para el ingreso de viriones: 1. Las partculas pueden permanecer atrapadas en el contenido de la luz (moco, contenido alimenticio) y no alcanzar la capa epitelial. 2. El virion es sometido a un medio hostil (acidez, alcalinidad, presencia de enzimas). 3. El epitelio intacto puede constituir de hecho una barrera por las uniones intercelulares estrechas entre sus elementos constitutivos. 4. Los viriones pueden verse eliminados por clulas fagocticas y anticuerpos que pueden eliminar la infectividad. Los virus animales una vez superadas las barreras descritas, poseen varios mecanismos para el ingreso al interior de las clulas. Primero por un mecanismo de englobamiento endocitcico que se conoce como viropexis o por un fenmeno de fusin de membranas en el caso de virus cubiertos. Se ha propuesto un mecanismo de penetracin directa o translocacin en caso de virus desnudos. Es importante anotar que el fagosoma resultante puede inhibir la unin de los lisosomas (vgr. Semliki Forest virus) o permanecer indemne sin que se vea alterado el genoma viral por las diferentes enzimas presentes en el contenido lisosomal. 4. Denudamiento: este trmino se asigna al proceso de remocin de la cpside o envolturas virales que permite la liberacin del cido nucleico, este hecho permite que la

informacin gentica viral interacte con la maquinaria biosinttica de la clula husped. Este proceso implica la prdida de la estabilidad estructural de la cpside viral o la fusin de membranas viral y celular. Las seales que permiten este proceso estan causadas por la unin del virin al receptor o la exposicin de la partcula viral a un ambiente de pH bajo como el que se encuentra a nivel de los endosomas. Otras condiciones reductoras son propiciadas por las bajas concentraciones de Ca++ y la unin con molculas receptoras en el citosol. Se ha sido descrito en alfavirus la presencia a nivel de las clulas no infectadas de factores celulares de denudamiento. Otra posibilidad de la prdida de arquitectura viral es que el proceso de ensamblaje y denudamiento se realice en compartimentos celulares diferentes lo cual explica la disociacin de las uniones establecidas entre las protenas. 5. Transcripcin: se define transcripcin como el proceso por el cual se transfiere la informacin gentica de una secuencia de nucletidos de una molcula de cido nucleico a otra. Este paso requiere la formacin de un ARNm a partir de una molcula de ADN o la formacin de una cadena de ARN complementario en caso de virus con genoma en forma de ARN monocatenario de polaridad negativa. En los virus que poseen ARN de polaridad positiva (+) es decir que el genoma se comporta como un ARNm (Togaviridae, Picornaviridae), polr lo tanto puede ser usado directamente para la sntesis de protenas, sin requerir la sntesis de cidos nucleicos complementarios. En los virus con ARN de polaridad negativa (-) como los virus de las familias Rhabdoviridae, Paramyxoviridae y Ortomyxoviridae, el material gentico posee la secuencia de nucletidos necesaria para la sntesis del ARN complementario el cual funciona como mensajero. Este ARN (-) requiere de una ARN polimerasa ARN dependiente (transcriptasa) que es codificada por el virus. Para la produccin de ARN mensajero o para la replicacin genmica los virus poseen unas enzimas que se denominan ARN polimerasas ARN dependientes. Estas enzimas cumplen con funciones de replicacin cuando la funcin es la de copiar el ARN viral para formar nuevos genomas. Cuando las enzimas producen ARNm se designa que tienen una funcin de transcripcin. La mayora de los virus ADN se multiplican en el ncleo y dependen de ARN polimerasas celulares ADN dependientes. En cualquiera de los casos hay genes tempranos o de lectura rpida y genes tardos o de lectura en fase final de ciclo. 6. Translacin: es el proceso por el cual se sintetiza una cadena polipeptidica a partir de la informacin gentica presente en el ARNm. La informacin presente en los cuatro nucletidos es transladada en letras de los 20 diferentes aminocidos. El ARNm es transladado en protenas durante dos periodos de tiempo simultneos y con lmites no muy bien definidos. Una es la translacin de protenas tempranas en las que se sintetizan protenas con funcin enzimtica o reguladora de la funcin celular y otra es la de protenas estructurales que harn parte de la partcula viral misma. En algunos sistemas (Picornaviridae, Togaviridae) el ARN es de tipo monocistrnico y permite la sntesis de un gran pptido que sufrir los clivajes correspondientes por parte de proteasas celulares o de origen viral (proceso autocataltico) para dar lugar a las diferentes protenas. 7. Replicacin del material gentico: durante esta fase tiene lugar la sntesis de ARN o ADN viral que sigue el esquema de Watson y Crick de bases complementarias. En el caso de virus con genoma de tipo ADN estos pueden utilizar durante esta fase las ADN polimerasas de la clula presente en el ncleo celular. Los virus de la familia Poxviridae poseen su propia ADN polimerasa, razn por la cual se replican en el citoplasma de la clula hopedera. En el caso de virus cuyo genoma se encuentra en forma de ARN se

utilizan replicasas que tienen como funcin la formacin de ARN a partir de cadenas complementarias o intermediarios replicativos que sirven de molde o templete. Los virus ARN durante esta fase llevan a cabo la replicacin del ARN viral, generndose ARN a partir de ARN, algo exclusivo de los virus. Los virus ARN (-) llevan a cabo durante esta fase la sntesis de ARN de cadena complementaria ARN (+) que a su vez tambin sirve de molde para la sntesis de ARN genmico (-). En el caso de los virus con genoma de tipo ARNm el ARN (-) producido no es mas que un intermediario replicativo. Para catalisar este proceso se requiere de ARN polimerasas dependientes de ARN o replicasas que son codificadas por el virus. 8. Sntesis proteica tarda: estas protenas son sintetizadas en la clula infectada despus que ha ocurrido la replicacin de los nuevos genomas virales. Durante esta fase del ciclo infeccioso se sintetizan protenas estructurales del virin. 9. Ensamblaje: durante esta fase hay organizacin de las macromolculas virales (protenas y cidos nucleicos) tendientes a la formacin de viriones maduros. En el caso de partculas virales con envoltura, la nucleocpside se organiza y ensambla por debajo de la unidad de membrana celular, donde se han localizado la glicoproteinas virales. En el caso de virus desnudos la cpside se ensambla alrededor del genoma viral. Durante esta fase hay una gran expresin de antgenos virales sobre la superficie de la membrana celular. Estos antgenos pueden ser el blanco de los anticuerpos y complemento. Todas las protenas sintetizadas al interior de la clula hospedera, son procesadas al interior de los proteasomas y presentadas en el contexto de las protenas de tipo HLA I, lo cual permite la identificacin de la clula infectada por parte de los linfocitos T citotxicos.

Glicoprotena

Protena M

Nucleoprotena

Genoma Membrana plasmtica

Figura 2.2: Cintica del ensamblaje viral. Acumulacin de proteinas estructurales y genoma viral en los sitios de ensamblaje viral. 10. Liberacin: Durante esta fase ocurre la salida de los viriones infectantes. Hay dos procesos que pueden tener lugar, de un lado la citlisis y de otra parte los virus pueden ser liberados por un proceso de gemacin; este ltimo es un proceso de citosis inversa que si no produce dao a la membrana celular puede conllevar a infecciones latentes. Algunos viriones como el HIV pueden escapar al sistema de vigilancia inmunolgica ya que no se liberan al medio circundante sino que mas bien difunden a las clulas adyacentes no infectadas, donde inician un nuevo ciclo de replicacin. En bacterifagos existe otra forma de ciclo infeccioso viral diferente al ciclo ltico. Esta forma denominada ciclo lisognico est caracterizado por la integracin del genoma del

bacterifago con el genoma de la bacteria. Esta integracin puede hacerse en secuencias preferidas (como es el caso del colifago lambda), en forma indiscrimada al interior del genoma del husped con ayuda de una transposasa (caso del fago Mu-1), como plsmido (en el caso del fago P1) o finalmente mantenerse como profago o como plsmido (caso del fago P4). El genoma viral integrado es denominado un provirus. En caso de la infeccin por virus de la inmunodeficiencia humana el provirus se produce por accin de la transcriptasa inversa que produce una copia de ADN de doble cadena a partir de las dos cadenas de ARNm. Este genoma integrado puede expresar ciertas funciones virales sin lisar la clula, la represin en su expresin puede ser inhibida por factores externos y conllevar a un ciclo ltico o productivo de partculas virales. Algunas de las sustancias represoras que mantienen el provirus y previenen al genoma viral de ser destruidas del interior de la clula husped son sintetizadas por el genoma viral.
Virus ADN Virus ARN
VIRUS

Receptor
Denudamiento ARNm Transcripcin Maquinaria biosinttica nuclear Translacin y glicosilacin de protenas ADN CELULAR Transcripcin Replicacin Replicacin Ensamblaje

Receptor
Denudamiento Transcriptasa inversa

Protnas virales

Ncleo Ncleo

ARNm Ensamblaje

Clula blanco

Liberacin de partculas virales

Clula blanco

Liberacin de partculas virales

Figura 2.3: Ejemplos de ciclo replicativo viral. En la patologa mdica el ejemplo mas claro de enfermedad causada por esta relacin clula husped y virus es la difteria. El Corynebacterium diphtheriae es infectado por un profago que codifica para una exotoxina y que se expresa en el momento en que el bacterifago pasa de su ciclo lisognico a su ciclo ltico. Este fenmeno permite diferenciar a las cepas no portadoras del profago (diphteroides) de aquellas patgenas (productoras de toxina). Las bacterias expresan la toxina en condiciones en las cuales existen bajas concentraciones de hierro en el medio, esta regulacin frrica nos sugiere que el papel de la toxina es el de proveer hierro a la bacteria. AISLAMIENTO Y CULTIVO DE AGENTES VIRALES A diferencia de la mayora de bacterias (con la excepcin de las Chlamydias y Rickettsias) y hongos, los virus son parsitos intracelulares obligados incapaces de crecer en medios de cultivo simples por enriquecidos que ellos sean; esto es debido a que los virus requieren para su multiplicacin de la integridad de la maquinaria biosinttica de la clula. Inicialmente se utiliz como mtodo de aislamiento y replicacin viral los animales de laboratorio (ratn, hamster o conejo) y los embriones de pollo. El aislamiento de los virus requiere del uso de lneas celulares que en trminos generales se conoce como cultivo

de clulas. Fue hasta el inicio de la dcada de los 50 que J.F. Enders y colaboradores pudieron desarrollar sta tcnica con ell subsecuente desarrollo de la caracterizacin de partculas virales y la produccin de vacunas a partir de la atenuacin o inactivacin de grandes cantidades de virus que gracias a este descubrimiento lograron obtenerse. Si en el campo de la bacteriologa tenemos diferentes medios de cultivo, en el campo de la virologa este hecho es mucho mas determinante, no todos los virus crecen en un mismo tipo de clula, porque como ya habamos sealado previamente es necesario para que el virus entre al interior de la clula que esta sea permisiva y esta posibilidad est marcada por el tipo de protenas que se expresan en la superficie de membrana celular. En otros trminos es necesario que las clulas a ser infectadas posean una unidad receptora celular que reconozca las protenas de unin de la partcula viral. Para que una lnea celular pueda mantenerse viable; es decir viva, sana y permisiva se requieren de medios qumicos que poseen los nutrientes necesarios para la multiplicacin celular (sales, glucosa, vitaminas, coenzimas, vitaminas, factores de crecimiento, aminocidos, etc). Estos medios esenciales tambin requieren que sean isotnicos, con un pH cercano a 7.4. Debido a la produccin de metabolitos txicos fruto del metabolismo celular debe realizarse cambios peridicos del medio de cultivo celular para garantizar de esta manera la presencia de los requerimientos necesarios para el metabolismo de la clula. Por su contenido el medio de cultivo celular es tambin un caldo muy apto para el crecimiento de microorganismos presentes en la muestra clnica o facilmente obtenidos durante la manipulacin de la lnea celular, razn por la cual en muchos laboratorios se le adicionan antibiticos y antimicticos en concentraciones inhibitorias del crecimiento microbiano, pero que carecen de txicidad para las clulas. Los medios de cultivo carecen de algunos factores de crecimiento celular que impiden una rpida proliferacin de las clulas cultivadas, por sta razn se requiere de la adicin de algunos de estos factores presentes en el suero fetal bovino, para la mayora de estos factores su naturaleza no es conocida. Existen distintos tipos de lneas celulares como veremos a continuacin: Cultivo celular primario: en el cual las clulas se obtienen a partir de los tejidos frescos de animales de laboratorio. Las clulas se disgregan en clulas individuales gracias a la accin de varias enzimas hidrolticas como la tripsina o la pronasa. Este tipo de clulas tiene como ventaja ell poder soportar una amplia gama de tipos virales y como desventaja el no soportar mas que un limitado nmero de divisiones celulares. Cultivo de clulas diploides: las clulas diploides poseen un genoma presente en dos juegos homlogos. Estas clulas tienen una mayor capacidad de divisin celular y mantienen el nmero original de cromosomas. Son tiles a nivel de diagnstico y de produccin de vacunas. Cultivo de clulas continuas: estas son clulas que se han inmortalizado o que son inmortales por ser originarias de clulas tumorales o por mutacin realizada sobre clulas diploides. Algunas derivan de tejidos humanos pero la gran mayora son originadas en otras especies de animales o aun de insectos. Las lneas celulares mantienen in vitro una morfologa que les es caracterstica, y bajo la influencia de la infeccin viral adquieren una serie de cambios ( citlisis, redondeamiento, formacin de clulas multinucleadas o de acmulos celulares o sincitios) que conforman lo que se conoce como efecto citoptico y que constituyen un valioso elemento de diagnstico viral. Si bien este efecto es caracterstico del tipo viral puede tambin corresponder a varios agentes virales y no es caracterstico de variantes de estas familias virales. Por otro lado no siempre la partcula viral va a ocasionar efecto citoptico y la presencia del virus se determina en forma indirecta por medio de hemaglutinacin o

hemadsorcin, inmunofluorescencia o mediante el fenmeno de interferencia viral usando partculas virales con efecto citoptico conocido sobre la lnea celular utilizada. Bibliografa: Cann AJ (1997) Principles of Molecular Virology. Second edition. Academic Press. USA. pag 97-127. Dimitrov DS. Virus entry: molecular mechanism and biochemical applications Nature rev Microbiol. 2004;2:109-122. Flint SJ, Enquist LW, Krug RM, Racaniello VR, Skalka AM (2000) Principles of Virology: molecular biology, pathogenesis and control. ASM press. Washington DC Greber UF, Singh I, Helenius A (1994) Mechanisms of virus uncoating. Trends in Microbiol. 2:53-56. Hunter E. (1994) Macromolecular interactions in the assembly of HIV and other retroviruses. Sem. Virol. 5: 71-83. Nathanson N, Tyler KL. Entry, dissemination, shedding and transmition of viruses. First Edition. En Viral Pathogenesis. (1997) Nathanson N Ed. Lippincott-Raven Publishers. USA. pag 13-33 Pearanda J. (1996) Virus: estructura y clasificacin. En Biologa Molecular de virus. Tpicos selectos. Editorial Universidad Nacional. Bogot. pag 203-221. Roizman B, Palese P. (1996) Multiplication of virus: an overview. En Fields BN, Knipe DM, Howley PM. Virology. Lippincott-Raven Publishers. USA. pag 59-99.

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