Tesis v2 190507

Universidad de Los Andes
Facultad de Ciencias
Departamento de Qumica
Grupo de Polmeros
Trabajo Especial de Grado
Licenciatura en Qumica
Degradacin enzimtica del quitosano.
Realiado por!
Br. Dimas A. Medina
Tutor!
Dr. Cristbal Lrez Velsquez.
"#rida$ %unio &''(
1
AGAD!C"M"!#$%&
Deseo e)presar mi ma*or a+radecimiento a D"%&$ padre nuestro$ por darme * mantenerme en vida
para poder culminar una de mis mas an,eladas metas-
A mi madre &ocorro Marina Medina C'acn$ por ser la mejor madre del mundo$ por apo*arme en
cada instante de mi vida$ sin ella esto no .uese realidad-
A mis ,ermanos /Gaudiz ( Gonzalo0 por el indispensable apo*o 1ue de ellos siempre ,e recibido-
Al Dr. Cristbal Lrez Velsquez) tutor del presente trabajo$ por su a*uda$ colaboraci2n$ ense3aas
* con.iana brindada durante el desarrollo del trabajo especial de +rado-
Al M. &c. Carlos $orres$ por su amistad$ su a*uda * orientaciones al momento de realiar este
trabajo-
A cada uno de los miembros del Gru*o de +ol,meros /pro.esores * estudiantes0 por su invaluable
a*uda-
Al Dr. !nrique Millan por todas sus observaciones * recomendaciones-
A +edro Villasmil * .amilia ellos .ormar mi se+undo ,o+ar-
A Dublas Vi-as) .arina A-enda/o ( !lda lacruz compa3eros * ami+os-
A 0essica 0urez por encontrar en ti apo*o * estimulo para se+uir adelante-
A todos mis compa3eros * personas conocidas durante este lar+o tramo de mi vida$ de ellos ,e
aprendido cosas nuevas cada da-
Finalmente deseo e)presar mi a+radecimiento a las si+uientes instituciones!
A la 1ni-ersidad de Los Andes
Al CDC2$31LA a trav#s del pro*ecto c2di+o C456'(4'74'849
A todos Gracias * un Dios se los pa+ue
2
!&1M!#
En el presente trabajo se muestran los resultados obtenidos durante los estudios de de+radaci2n
enim:tica de una muestra de 1uitosano comercial /Flu;a49ioC,emi;a$ <"=0$ con +rado de
acetilaci2n '$87 * peso molecular promedio viscoso de 65' ;Da$ por la acci2n de bromelina
comercial- La de+radaci2n se realio en medio acuoso$ usando como solvente una soluci2n
re+uladora de :cido ac#tico /'$6 "0>acetato de sodio /'$& "0- La temperatura de trabajo .ue de &7
?C-
El m#todo utiliado para realiar el estudio cin#tico de la depolimeriaci2n est: basado en
determinar continuamente la variaci2n del +rado de polimeriaci2n viscoso /@
v
0 de la muestra de
polmero /para soluciones de distintas concentraciones del sustrato0 a medida 1ue avana el tiempo
de reacci2n- Los valores de @
v
se determinaron a partir de la ecuaci2n de "ar;4<ouAin;4Ba;urada$
usando valores de viscosidad intrnseca /CDE0 1ue .ueron obtenidos$ de .orma instant:nea$ utiliando
dos procedimientos!
a0 Determinaci2n de la viscosidad intrnseca mediante el procedimiento de un solo punto$ el
cual +eneralmente usa al+una de las diversas ecuaciones propuestas en la literatura para tal
.in- En el presente trabajo se ensa*aron cuatro de las ecuaciones m:s comFnmente utiliadas!
La ecuaci2n de Bano$
La ecuaci2n de Bolomon4Ciuta$
La ecuaci2n de Deb4C,atterjee$
La ecuaci2n de Ram4Gaseen$
basadas todas ellas solo en una sola medici2n de viscosidad /viscosidad relativa /D
rel
0 *>o
viscosidad espec.ica /D
sp
00-
b0 Determinaci2n de la viscosidad intrnseca mediante un procedimiento iterativo$ 1ue usa los
valores de viscosidad relativa e)perimental obtenidos * le asi+na valores a la viscosidad
intrnseca en la ecuaci2n de <u++ins$ ,asta lo+rar un valor de esta Fltima 1ue satis.a+a dic,a
ecuaci2n-
Con los valores de @
v
obtenidos para cada tiempo de reacci2n se obtienen los valores de velocidad
de depolimeriaci2n inicial /v
o
0 para cada una de las soluciones estudiadas- Estos valores de v
o
$ a su
ve$ .ueron analiados para una cin#tica de "ic,aelis4"enten$ usando el +r:.ico de LineAeaver4
9ur; /o representaci2n de los dobles recprocos0$ el cual permiti2 determinar la constante de
"ic,aelis /;
"
0 * la velocidad m:)ima /H
ma)
0 para el sistema estudiado-
El an:lisis de los datos revel2 1ue los mejores resultados .ueron los obtenidos cuando se utili2 la
ecuaci2n de Bano para determinar los valores de la viscosidad intrnseca- Los par:metros cin#ticos
obtenidos de esta manera en la depolimeriaci2n del 1uitosano por la acci2n 1uitosanoltica de la
enima no espec.ica bromelina .ueron ;
"
I 6$J(( )5'
4(
mol>dL * H
ma)
I J$KK )5'
4K
mol>s m+0-
3
4ndice General
5.3 "ntroduccin.
5-5-4 Quitina * 1uitosano K
5-&-4 C,itoolo+osac:ridos de 1uitina * 1uitosano 8
5-6-4 Aplicaciones de los c,itooli+osac:ridos * derivados 8
5-6-5-4 Aplicaciones en alimentos 8
5-6-&-4 Aplicaciones en la industria .armac#utica J
5-6-6-4 Aplicaciones biom#dicas 5'
5-6-L-4 Aplicaciones en la a+ricultura 5&
5-6-7-4 Aplicaciones en el control ambiental 56
5-6-K-4 Aplicaciones en la industria de cosm#ticos 56
5-6-(-4 Aplicaciones en la industria del papel 56
5-6-J-4 Aplicaciones en .ibras * reactivos para la industria te)til 56
5-L-4 Hiscosidad como m#todo para realiar un estudio de depolimeriaci2n enim:tica 56
6.3 Descri*cin del *ro(ecto
&-5-4 Mbjetivos +enerales * espec.icos 5K
&-&-4 <ip2tesis 5K
7.3 +arte e8*erimental
6-5-4 Reactivos * solvente 5(
6-&-4 Nnstrumentaci2n 5(
6-6-4 Puri.icaci2n * Caracteriaci2n de los reactivos 5(
6-6-5-4 Puri.icaci2n del 1uitosano 5(
6-6-&-4 Caracteriaci2n del 1uitosano 5(
6-6-&-4 Determinaci2n del peso molecular 5(
"#todo +ra.ico 5(
"#todo con un solo punto de medida viscosim#trica 58
6-L-4 "ediciones de cin#tica de despolimeriaci2n 5J
6-L-5-4 Preparaci2n de soluci2n 5J
6-L-&-4 "ediciones viscosim#tricas 5J
9.3 Anlisis de resultados
L-5-4 Caracteriaci2n del 1uitosano &'
L-5-5-4 Determinaci2n del +rado de acetilaci2n por espectroscopia FTNR &'
L-5-&-4 Determinaci2n del peso molecular &5
"#todo +r:.ico usando la ecuaci2n de <u++ins &5
"#todo viscosim#trico de un solo punto &6
L-&-4 Estudio cin#tico &7
L-&-5-4 Determinaci2n instant:nea del +rado de polimeriaci2n durante la
de+radaci2n enim:tica utiliando el m#todo viscosim#trico de un solo
punto &7
L-&-&-4 Determinaci2n de la velocidad inicial de la reacci2n de de+radaci2n
4
enim:tica mediante el m#todo viscosim#trico de un solo punto- 66
L-&-64 Determinaci2n instant:nea del +rado de polimeriaci2n * de la
velocidad inicial de la reacci2n de de+radaci2n enim:tica usando un
m#todo iterativo * la ecuaci2n de <u++ins- L&
L-&-L-4 Determinaci2n de las constantes de "ic,aelis4"enten para la
de+radaci2n de 1uitosano con la enima bromelina LK
L-&-7-4 Depolimeriaci2n de la cadena de 1uitosano con enimas ,idroliticas 77
:.3 Conclusiones 7K
;.3 ecomendaciones 7(
<.3 e=erencias Bibliogr=icas 78
A*>ndice 5? Ensa*os preliminares realiados KK
A*>ndice 6? Resumen de las ecuaciones utiliadas 8L
A*>ndice 7? C:lculos de errores 87
5
5.3 "ntroduccin
5.5.3 "ntroduccin
La industria de los polmeros se desarrolla mu* r:pidamente$ lo 1ue lleva cada da a la bFs1ueda
incansable de nuevos materiales polim#ricos sint#ticos$ aumentando sus aplicaciones en la vida
cotidiana * lo+rando con ello el +ran desarrollo de este campo- La parte ne+ativa de estos avances es
1ue a medida 1ue se desarrollaban m:s polmeros sint#ticos$ se obtienen materiales con una vida
media mu* +rande en las condiciones ambientales actuales$ por ser pr:cticamente desconocidos para
los principales a+entes de de+radaci2n natural- Por esta ra2n$ 1ui:s se ,an convertido en la ma*or
.uente de contaminaci2n 1ue ,a conocido la ,istoria de la ,umanidad- Por ello$ pareciera 1ue el
ma*or reto actual es disminuir el uso * la producci2n de materiales sint#ticos contaminantes para el
medio ambiente- Durante los Fltimos a3os se ,a venido observando una .uerte tendencia en el uso de
materiales cada ve mas OverdesP$ entendi#ndose por #stos los materiales de ori+en natural 1ue ,an
su.rido el menor tratamiento 1umico posible$ preservando por esta ra2n sus caractersticas mas
preciadas! biocompatibilidad$ biode+radabilidad * no to)icidad [5]-
En este sentido$ el uso de polmeros derivados de .uentes naturales$ *a sean de ori+en ve+etal$ animal
o microbiano /biopolmeros0$ ,a venido +anando terreno r:pidamente- En los Fltimos veinte a3os
podemos ver el altsimo nFmero de trabajos de investi+aci2n * patentes 1ue se ,an realiado$ as
como la aparici2n de una importante cantidad de empresas 1ue se ,an dedicado a producir * a aplicar
los biopolmeros en la vida cotidiana [5]- Estas aplicaciones son mu* diversas * van desde la
.abricaci2n de objetos sencillos * Ftiles para los seres ,umanos ,asta lle+ar al punto de desarrollar *
.omentar la biotecnolo+a-
Un ejemplo de estos biopolmeros son la 1uitina * el 1uitosano$ los cuales son polmeros naturales$
biode+radables$ no t2)icos ni aler+#nicos *$ en el caso del 1uitosano$ antimicrobiano- La 1uitina .ue
encontrada * estudiada en 5855 por el pro.esor <enri 9raconnott$ descubri#ndola en las paredes
celulares de al+unos ,on+os- Para el a3o de 586'$ .ue aislada en insectosQ el 1uitosano se encuentra
de .orma natural en las paredes celulares de al+unos ,on+os$ pero su principal .uente lo constitu*e la
1uitina$ es decir$ el 1uitosano es el principal derivado de la 1uitina-
La 1uitina * el 1uitosano son polisac:ridos de +ran importancia$ siendo la 1uitina el se+undo
polisac:rido mas abundante en la naturalea$ despu#s de la celulosa$ teniendo como nombre
sistem:tico R /54L04&4acetamido4&4deso)i4D4+lucosa- Est: se encuentra principalmente en las
conc,as de crust:ceos * .ormando parte estructural de su e)oes1ueleto$ as como tambi#n en las
paredes celulares de muc,os ,on+os$ levaduras * al+as-
Por otro lado$ el 1uitosano est: constituido por cadenas 1ue tienen unidades /54L04&4acetamido4&4
deso)i4D4+lucosa * /54L04&4amino4&4deso)i4D4+lucosa distribuidas al aar- Para poder ser
considerado como un 1uitosano la proporci2n de unidades acetiladas debe ser menor del 7' por
ciento- Cuando el material est: constituido por cadenas .ormadas solo con unidades desacetiladas el
material es llamado 1uitano$ con el nombre sistem:tico poli//54L04&4amino4&4deso)i4D4+lucosa0
/ver .i+ura 5-50-
El 1uitosano .ue producido por primeras ve en 587J por Rou+et * en 58JL .ue estudiada por
<oppe4Betler 1uien lo denomino O1uitosanoP$ El 1uitosano es el Fnico polisac:rido cati2nico
naturalQ lo cual le con.iere caractersticas especiales 1ue lo ,acen Ftil en numerosas aplicaciones- En
su estructura$ posee tres +rupos .uncionales /carbono 5$ carbono 6 * carbono K0 los cuales se pueden
modi.icar 1umicamente para dar varios tipos de derivadosQ la .unci2n mas llamativa es la amina
ali.:tica primaria$ lo 1ue le ori+ina las reacciones tpicas para este tipo de .unciones [6]-
6
@ig. 5.5.3 Estructuras 1umicas del 1uitosano * del 1uitano
Los oli+osac:ridos * ,eterooli+osac:ridos productos de la ,idr2lisis controlada$ tanto de la 1uitina
como del 1uitosano /+rado de polimeriaci2n bien de.inido0$ ,an atrado especial inter#s por su
aplicabilidad en mu* diversos campos [6]) siendo el 1uitosano uno de los materiales 1ue en los
Fltimos a3os m:s ,a llamado la atenci2n debido a todas sus potenciales aplicaciones$ especialmente
debido al .:cil acceso a sus .uentes de partida * a su relativamente .:cil m#todo de preparaci2n- El
:rea de ma*or potencialidad para las aplicaciones del 1uitosano es el :rea .armac#utica * biom#dica$
donde tiene utilidad principalmente como oli+osac:rido debido a sus propiedades .un+icidas *
bactericidas- Estos oli+osac:ridos son obtenidos por la depolimeriaci2n de la macro cadena del
1uitosano$ siendo #ste uno de los t2picos de investi+aci2n en la utiliaci2n de los biopolmeros 1ue
,a despertado ma*or inter#s-
En ese sentido$ la depolimeriaci2n tanto del 1uitosano como de la 1uitina se ,a realiado en tres
de.erentes .ormas!
Depolimeriaci2n 1umica! el +rado de polimeriaci2n va disminu*endo por acci2n de
sustancias 1umicas$ en especial :cidos minerales$ esto es debido a la susceptibilidad de ruptura
1ue presentan los enlaces +licosdicos cuando se encuentra en un medio :cido- Los :cidos
minerales m:s utiliados son! :cido clor,drico [73:]$ :cido .os.2rico [;]$ :cido .luor,drico
[6]$ :cido nitroso [<)A]- La ,idr2lisis con :cido clor,drico ,a sido combinada con
electrodi:lisis4ultra.iltraci2n * .iltraci2n en +el [7]-
Depolimeriaci2n .sica! la disminuci2n del +rado de polimeriaci2n de la cadena del
1uitosano se puede realia por diversos procesos .sicos$ por ejemplo por medio ultrasonido
[B)5C] *>o mediante la .otode+radaci2n en donde soluciones de 1uitosano son irradiadas con
ra*os S [55]-
Depolimeriaci2n biol2+ica! est: relacionada directamente con la depolimeriaci2n 1umica$
pero la di.erencia radica en el tipo de sustancia 1ue se utilia para producir la reacci2n de
,idr2lisis$ en este caso se usan enimas- Las mas usadas ,asta el momento son! lisoima
[56)57]$ papana [5935;]$ 1uitosanasas [5<)5A]$ 1uitinasas [5B)6C]$ bromelina [65) 66)67]-
7
5.6.3 C'itooligosacridos de quitina ( quitosano
La esco+encia del nFmero de unidades monosacardicas para de.inir los oli+osac:ridos u
oli+opolisac:ridos$ es arbitraria$ en al+unos casos el valor lmite ,a sido tomado como &' unidades
monosac:ridos [69]- Es decir$ tanto los oli+osac:ridos como los oli+opolisac:ridos son a1uellos
materiales 1ue est:n constituidos por una cantidad determinada de monosac:ridos sin lle+ar a .ormar
materiales con pesos moleculares mu* altos por1ue serian considerados polisac:ridos- Los
1uitooli+osac:ridos son a1uellos oli+osac:ridos * oli+opolisac:ridos obtenidos a partir de la 1uitina
*>o 1uitosano a trav#s de cual1uier tipo de depolimeriaci2n anteriormente mencionada- La
importancia de estos materiales * su +ran aplicabilidad es e)puesta a continuaci2n!
5.7.3 A*licaciones de los quitooligosacridos ( deri-ados
5-6-5-4 Aplicaciones en alimentos
El 1uitosano * sus oli+opolisac:ridos reFnen un conjunto de caractersticas .sicas$ 1umicas *
biol2+icas 1ue justi.ican su introducci2n en la .ormulaci2n de alimentos$ *a 1ue puede aumentar *
mejorar las propiedades nutricionales$ ,i+i#nicas *>o sensoriales de estos- El 1uitosano * sus
oli+opolisac:ridos pueden cumplir el rol de .ibra .uncional /a1uellas 1ue su consumo conlleva a
bene.icios en la salud0$ * a su ve son .ibras ,idrosolubles en las condiciones del sistema +:strico-
Adem:s$ posee propiedades emulsionantes$ antimicrobianas$ antio)idantes * +eli.icante- El
1uitosano destaca por su inocuidad al punto de lle+ar a ser menos t2)ico 1ue la sal [6]-
Quitosano como suplemento dietario o fibra dietaria: el 1uitosano se ,a incorporado a la dieta
alimenticia como suplemento dietario o como .ibra dietaria$ debido a 1ue posee la capacidad de
modi.icar marcadamente$ la absorci2n de lpidos$ *a 1ue se solubilia en el :cido clor,drico del
est2ma+o en donde emulsi.ica las +rasas$ a medida 1ue la emulsi2n pasa el intestino la capacidad
emulsionante del 1uitosano va .avorecida$ * posteriormente cuando ,a* un aumento del p< ,acia
valores li+eramente b:sicos la emulsi2n se endurece debido a 1ue el 1uitosano +eli.ica a esos valores
de p<$ en el sistema intestinal$ *a .ormado en sistema 1ue atrapo la +rasa * evito su absorci2n [6:3
7C]$ aun1ue tambi#n atrapa otros nutrientes /en menor proporci2n0- Debido a este mecanismo de
acci2n disminu*e el colesterol s#rico en san+re- Esta propiedad le ,a con.erido al 1uitosano el
nombre comercial de O.ibra atrapa +rasasP [6]-
Interaccin con otros nutrientes: el 1uitosano usado como .ibra dietaria interactFa con los
carbo,idratos * modi.ica el metabolismo de los +lFcidos$ este e.ecto est: presente debido al aumento
de la viscosidad del contenido +astrointestinal producto de la acci2n de la .ibra soluble$ lo cual
ocasiona la disminuci2n de la absorci2n de los +lFcidos [75379]. Aunado a esta acci2n est: el e.ecto
de aumento en la proli.eraci2n de c#lulas pancre:ticas [7:]$ lo cual conlleva a ma*ores bene.icios en
cuanto a la tolerancia a la +lucosa * a la modi.icaci2n de la secreci2n de insulina [77)79]- Las .ibras
dietarias reducen la di+estibilidad de las protenas * el 1uitosano no est: e)ento de ello$ pero el
atrapamiento de las protenas por parte del 1uitosano es mu* pe1ue3o [6]-
Aditivo alimentario: los aditivos alimentarios son sustancias 1ue directa$ o indirectamente$
modi.ican las caractersticas .sicas$ 1umicas o biol2+icas de un alimento- A e.ectos de su
mejoramiento$ deben ser inocuos$ * a su ve$ deben cumplir con las e)i+encias de desi+naci2n * de
purea 1ue estableca la le+islaci2n- El 1uitosano cumple con todas las e)i+encias antes e)puestas$
lo cual le ,ace un e)celente candidato para ser usado como un aditivo alimentario [6]-
Emulsionante: el 1uitosano tiene la capacidad de estabiliar * .ormar emulsiones mFltiples del tipo
a+ua>aceite>a+ua$ sin la adici2n de otro sur.actante * en un solo paso [7;]$ est: ventaja se debe a la
8
.orma ,etero+#nea de la cadena del polielectrolito- La estabilidad * la viscosidad de la emulsi2n son
proporcionales a la concentraci2n del 1uitosano en las soluciones en el 1ue es utiliado [7<]-
Conservante: el 1uitosano$ * sus ol+omeros de di.erentes pesos moleculares$ presentan actividad
antimicrobiana * pueden actuar sobre ciertas bacterias$ levaduras * ,on+os /a e)cepci2n de los
Zygomycetes, 1ue lo poseen como componente de su pared celular [6]D- Dic,a actividad no est:
totalmente dilucidada * por ello ,a* di.erentes mecanismos propuestos 1ue intentan e)plicarla [5C]-
El 1uitosano$ sus derivados * sus ol+omeros actFan contra ,on+os .ilamentosos [7A395]$
Saccharomyces cerevisiae y hodotorula glutinsis [96]$ Echerichia Coli [59)97]$ Shigella
dysenteriae$ Aeromona hydrophil * Salmonella typhimurium [99]$ !acillius cereus [99) 9:]$
!acillius sp-$ !acillius megaterium * Enterobacter sa"a#a"ii [9:]$ !acillius subtilis *
Staphyilococcus aureus [9;]$ Streptococcus rattus * Candida albicans [9C]-
Antio$idante: el 1uitosano muestra actividad antio)idante debido a la propiedad de 1uelar iones
met:licos de Co$ Cu$ Fe$ "+ * Ti$ elementos 1ue se encar+an de cataliar las reacciones de
autoo)idaci2n /reacci2n del o)+eno con los :cidos +rasos insaturados de los alimentos0 [9<]-
%el&culas comestibles: debido a su ,abilidad de .ormar pelculas semipermeables se ,a usado como
protector de alimentos * se ,a visto e)tender la vida Ftil * de estante de los mismos$ todo ello basado
en la actividad antimicrobiana 1ue presentan$ tanto el material matri$ sus derivados * sus
ol+omeros [9A)9B]-
5-6-&-4 Aplicaciones en la industria .armac#utica
En los Fltimos a3os el 1uitosano ,a sido propuesto para un sin nFmero de aplicaciones en la
industria .armac#uticas * sobre todo en la liberaci2n de .:rmacos de manera controlada- A partir de
5J8'$ el 1uitosano se comen2 ,a estudiar como e)cipiente$ debido a su similitud estructural *
1umica con la celulosa$ aunado a su no to)icidad$ su buena capacidad para .ormar +eles a valores
bajos de p<$ * a su .:cil reabsorbilidadQ todas estas caractersticas le ,acen un e)celente candidato
para ser utiliado en esta industria-
'iberacin de f(rmacos v&a oral: la liberaci2n de .:rmacos por va oral ,a sido la manera m:s
aceptada * m:s conocida de dosi.icar dro+as$ pero esta ,a venido evolucionando r:pidamente desde
el comprimido ent#rico ,asta los so.isticados sistemas de liberaci2n de orden cero- El 1uitosano en
las aplicaciones orales es utiliado como dilu*ente en tabletas de compresi2n directa$ en las 1ue
actFa como desinte+rante- En estos sistemas es mu* bene.icioso debido a su actividad anti:cida *
antiulcerosa$ la cual previene la irritaci2n del estoma+o por acci2n del .:rmaco [:C]- Tambi#n ,a
sido utiliado en complejos o meclas de e)cipientes con la .inalidad de controlar la liberaci2n del
.:rmaco$ como por ejemplo complejos de 1uitosano>al+inato$ 1uitosano>carbo)imetilcelulosa s2dica$
1uitosano>,ialuronato de sodio$ 1uitosano>:cido ctrico$ 1uitosano>pectina [:53::]$ en donde cada
uno de estos sistemas control2 e)itosamente la liberaci2n del .:rmaco * en donde$ dependiendo de la
cantidad de 1uitosano presente en el complejo$ se puede variar el e.ecto retardante-
)icroencapsulacin de f(rmacos: ,a* varias t#cnicas para encapsular un .:rmaco en una matri pero
cuando esta matri es el 1uitosano las t#cnicas m:s utiliadas son!
Geli.icaci2n ionotr2pica! es el entrecruamiento del 1uitosano usando contra iones
multivalentes$ de este modo se ,an preparado nanopartculas de 1uitosano car+adas con
do)orubicina [:;]-
9
Becado por aspersi2n! es el producto de la atomiaci2n de la soluci2n en aire seco a trav#s de
una bo1uilla- Con este procedimiento se prepararon microes.eras de 1uitosano car+adas con
de)ametasona [:<] * con diclo.enaco s2dico [:A]-
Emulsi2n4separaci2n de .ases! es un proceso 1ue consta de de dos partes$ se .orma una
emulsi2n * lue+o se endurece dic,a emulsi2nQ el Fltimo paso se puede ,acer de di.erentes
.ormas /entrecruamiento$ evaporaci2n del solvente$ +eli.icaci2n ionotr2pica0- Un sistema de
este tipo son las microes.eras de 1uitosano preparadas mediante un entrecruamiento en
suspensi2n con .ase oleosa>tricloroetileno$ emul+ente Bpan &' * car+adas con ,idrocloruro de
propanolol [:B]-
Coacervaci2n simple! una soluci2n :cida de 1uitosano es pro*ectada ,acia un medio
precipitante /TaM< por ejemplo0 para .ormar las +otas coacervadas$ despu#s estas +otas son
endurecidas por entrecruamiento- Be ,an preparado microes.eras car+adas con rotundina *
esteroides [;C);5]-
Coacervaci2n compleja! se usa la asociaci2n del 1uitosano con polianiones como el al+inato
[;6);7]$ tripoli.os.ato [;9]$ )antano [;:]$ carbo)imetilcelulosa * sul.ato de condroitina [;;]-
Estas t#cnicas inclu*en la .ormaci2n de nanopartculas para la dosi.icaci2n nasal de .:rmacos *
vacunas$ debido a 1ue el 1uitosano incrementa la penetraci2n de macromol#culas a trav#s de la
barrera nasal [:;]-
*ormulaciones para liberacin controlada y espec&fica +colon,: los polisac:ridos son los mejores
candidatos para dic,a tarea pero necesitan ser prote+idos del paso por el estoma+o e intestino
del+ado$ debido a su car:cter ,idro.lico * capacidad de ,inc,amiento- Para su protecci2n se utilia
un recubrimiento de 1uitosano *>o pectina [::]Q este procedimiento .ue evaluado para la liberaci2n
espec.ica de insulina en el colon [;<] * la liberaci2n espec.ica de 74amino4saliclico para el
tratamiento de la colitis en ratas [;A]-
-erapia g.nica: el 1uitosano ,a sido considerado uno de los mejores candidatos para la dosi.icaci2n
de +enes$ debido a la car+a ne+ativa del biopolmero$ la cual le ,ace interactuar * .ormar complejos
polielectrolitos con el pl:smido- El peso molecular del 1uitosano puede ser una limitante [;B)<C]$
/ispositivos transdermales: el 1uitosano se ,a utiliado para preparar dispositivos de dosi.icaci2n
transdermales para liberar el ,idrocloruro de proponolol en conejos [<5]$ en estos dispositivos las
membranas de 1uitosano se utiliaron con di.erentes densidades de entrecruamiento [<6]-
5-6-6-4 Aplicaciones biom#dicas
En esta :rea el 1uitosano ,a despertado un +ran inter#s debido a sus propiedades mas valiosas /su
baja to)icidad$ su biode+radabilidad * su biocompatibilidad0$ al punto 1ue *a ,a* en el mercado una
serie de dispositivos evaluados clnicamente- En las aplicaciones biom#dicas se puede destacar su
uso en!
Preparaci2n de ap2sitos * vendajes para el tratamiento de ,eridas
Preparaci2n de di.erentes soportes$ andamiajes$ cementos * encapsulados$ para la
re+eneraci2n * reparaci2n tisular-
-ratamiento de heridas y 0uemaduras: la primera etapa de la curaci2n de una ,erida es la ,emostasis
debido a la coa+ulaci2n san+uneaQ la 1uitina * el 1uitosano ,an demostrado tener e.ectos en la
aceleraci2n de curaci2n de ,eridas$ con un mejor acabado est#tico * ,asta car:cter anal+#sico- El
10
1uitosano presenta una ma*or .acilidad de ad,esi2n$ la 1ue aunada a sus propiedades
bacteriost:ticas$ ,emost:ticas$ anti.Fn+icas * a su permeabilidad al o)i+eno [<7]$ lo convierte en el
biomaterial 1ue presenta las mejores caractersticas para ser utiliado en la preparaci2n de
dispositivos a usar el tratamiento de ,eridas * 1uemaduras [<9)<:]-
Ingenier&a de te1idos: el 1uitosano es un e)celente candidato para ser utiliado en el material soporte
de los andamiajes para la preparaci2n de di.erentes tejidos u 2r+anos de seres vivos$ debido a todas
sus propiedades * caractersticas de material biocompatible * biode+radable$ adem:s del car:cter
b:sico en su .orma no ioniada * a su car+a positiva a p< :cido- Todos estos .actores le ,acen
mostrar un comportamiento mu* parecido a los +licosamino+licanos /,eteropolisac:ridos lineales *
ani2nicos presentes en la matrices e)tracelulares de los tejidos ,umanos0 *$ a su ve$ le permiten
tener las numerosas interacciones espec.icas de los +licosamino+licanos con otras interacciones no
espec.icas derivadas de la car+a presente [6]-
%iel artificial: el 1uitosano ,a sido uno de los materiales mas investi+ado con la .inalidad de
convertirlo en uno de los componentes de los substitutos d#rmicos * epid#rmicos$ en la actualidad se
,an desarrollados varios de estos sustitutos- Como ejemplo se puede citar el realiado por 9ra*e *
colaboradores [<;] el cual se desarroll2 sobre la base de col:+eno>sul.ato de condroitina>1uitosano$
dando mu* buenos resultados en sus ensa*os clnicosQ otro sustituto es el preparado con base de
+elatina>1uitosano entrecruado con +luteralde,do- En ambos casos$ .ibroblastos * 1ueratinocitos
son co4cultivados en andamiajes porosos asim#tricos 1ue mimetian a la piel ,umana [<<]-
Cart&lago: el 1uitosano se ,a utiliado en andamiajes para soportar la uni2n * proli.eraci2n de
condriocitos$ as como la biosntesis de componentes de la matri cartila+inosa$ con el resultado .inal
de la .ormaci2n de nuevo tejido cartila+inoso de tipo ,ialino [6]-
2ueso: por otra parte$ el 1uitosano es un promotor de la .ormaci2n de ,uesoQ as$ por ejemplo$ las
c#lulas madres mesen1uimales cultivadas en presencia de 1uitosano ,an demostrado un aumento
considerable en la di.erenciaci2n a osteosblastos comparadas con las cultivadas sin 1uitosano- En la
literatura se ,an descrito los di.erentes andamiajes porosos$ cementos .abricados a partir de
compositos de 1uitina>inor+:nicos o de 1uitosanos>inor+:nicos con prop2sitos estructurales [<A] En
biomedicina las biocer:micas .ormadas a partir de 1uitina o 1uitosano con .os.atos c:lcicos son las
mas interesantes para la reparaci2n * re+eneraci2n 2sea [<BE debido a 1ue su composici2n 1umica
es mu* similar a la composici2n inor+:nica en el tejido 2seo [AC]-
3tros te1idos: la 1uitina a sido propuesta como un buen biomaterial para la reparaci2n *
reconstrucci2n de tendones * li+amentos$ aplic:ndose sola o como una mecla con poli4U4
caprolactona [A5]- Be ,an meclado matrices de 1uitosano con col:+eno$ albFmina o +elatina$ se ,an
cultivado con ,epatocitos * se ,an evaluados como or+anoides ,ep:ticos [A6]$ el 1uitosano se ,a
estudiado para la reparaci2n del nervio peri.#rico [A7]$ etc-
3tras aplicaciones biom.dicas: una +ama de derivados sul.atados del 1uitosano * de la 1uitina ,an
presentado una e)celente actividad antiviral [A9)A:]- El sul.ato derivado de 1uitosano /T4M4sul.ato
de T4carbo)il4metil41uitosano$ ver .i+- &0 es un in,ibidor de la replicaci2n del <NH45 * no causa
e.ectos t2)icos en las c#lulas ,umanas [A;]- El derivado sul.ato de la +lucosamina /ver .i+- 5-&0 es
considerado una de los mejores medicamentos para el tratamiento * cura de la osteoartritis [A<]-
11
@ig. 5.6.3 Al+unos sul.ato derivados del 1uitosano
5-6-L-4 Aplicaciones en la a+ricultura
En este campo la 1uitina * el 1uitosano son utiliados con la .inalidad de incrementar * mejorar los
rendimientos a+rcolas- Bon mu* variadas las .ormas de aplicaci2n de estos biopolmeros$ entre ellos
tenemos!
ecubrimiento de semillas: el 1uitosano actFa de varias .ormas al ser utiliado sobre las semillas$
como a+ente .un+uicida$ como inductor de +enes 1ue re.ueran las caractersticas * la .ortalea de
las plantas [AA]) aumenta la +erminaci2n conllevando a ma*ores niveles de producci2n [6]$ etc-
ecubrimiento de productos agr&colas y pl(ntulas: la acci2n bactericida$ .un+icida * antiviral del
1uitosano * sus oli+opolisac:ridos es utiliada para prote+er las .rutas$ ,ortalias verduras *
pl:ntulas$ aplicando una soluci2n de 1uitosano sobre el material- En estas aplicaciones se aprovec,a
la .acilidad de .ormar pelculas 1ue presenta el biopolmero$ la cual .orma una barrera protectora
sobre el sistema 1ue se desea prote+er * as evita el ata1ue de ,on+os$ bacterias * virus [AB3B5]-
)atrices para la liberacin controlada de agro0u&micos: el 1uitosano es utiliado para preparar
matrices /,idro+eles0 1ue se encar+uen de la liberaci2n controlada de a+ro1umicos para el control
de pla+as$ suministro constante de nutrientes * .ertiliantes [B6]-
5-6-7-4 Aplicaciones control ambiental
La 1uitina * el 1uitosano ,an mostrado caractersticas apreciadas para el control ambiental * sobre
todo para el tratamiento de a+uas residuales * para el consumo domestico
Absorbente de iones met(licos: tanto la 1uitina como el 1uitosano son utiliados para el tratamiento
de a+uas residuales 1ue contienen metales como! Cu/NN0$ Cd/NN0$ Vn/NN0$ Pb/NN0$ Fe/NN0$ "n/NN0$ A+/N0$
<+/NN0 debido a su capacidad 1uelante [B73B:]-
Coagulacin y floculacin: el 1uitosano ,a sido utiliado como un a+ente coa+ulante * .loculanteQ la
car+a positiva 1ue desarrolla en medio :cido le permite interactuar con contaminantes suspendidos
en el a+ua$ produciendo una disminuci2n en la turbide- Adicionalmente$ su actividad bactericida
disminu*e el conteo de coli.ormes [B;3BA]-
12
/ecolorante: la 1uitina * el 1uitosano son utiliados para decolorar a+uas residuales aprovec,ando
la alta a.inidad de estos polmeros con colorantes [6]-
5-6-K-4 Aplicaciones en la industria de cosm#ticos
Bu actividad .un+icida$ la capacidad de atrapar :cidos or+:nicos$ compatibilidad con la piel$ entre
otras caractersticas$ le con.ieren al 1uitosano un conjunto de propiedades 1ue despiertan un +ran
inter#s en este campo-
Piel: el 1uitosano * sus derivados tienen varias ventajas para poder ser aplicados sobre la piel
/.ormulaciones de cremas ,idratantes$ lociones$ bronceadores$ cremas antiacn#0$ entre las 1ue se
pueden mencionar su car+a positiva$ su actividad bactericida * su peso molecular controlable- Estas
caractersticas les ,acen interactuar mu* bien con la piel$ * a su ve$ prote+e a #sta de la perdida de
a+ua transepid#rmica$ de los ra*os ultravioleta * del ata1ue bacterial [6)BB35C5]-
Cabello: el 1uitosano * parte del material 1ue constitu*e el cabello son complementarios$ en el
sentido de 1ue poseen car+as el#ctricas opuestasQ por ello$ el 1uitosano es utiliado en la .ormulaci2n
de cosm#ticos para el cuidado * limpiea del cabello- Entre los bene.icios 1ue el 1uitosano le
con.iere al cabello podemos mencionar! lo ,ace menos 1uebradio$ reduce la car+a electrost:tica$
evita su des,idrataci2n * la del cuero cabelludo$ protector UH [5C6)6]-
Aplicaciones en el cuidado oral: la 1uitina * el 1uitosano absorben la Candida albicans$ ,on+o 1ue
se ad,iere a los dientes$ por ello$ se convierte en un in+rediente ideal de rellenos dentales utiliados
en ciru+a dental * pr2tesis$ adem:s de su uso en .ormulaciones de pasta dental para enmascarar el
sabor de al+unos li+antes 1ue suelen tener estos productos [6]-
Antio$idante: un derivado del 1uitosano$ el ascorbato de 1uitosano presenta la propiedad de
estimular la sntesis del col:+eno$ de .orma m:s r:pida 1ue el :cido asc2rbico$ conllevando a
ma*ores propiedades antio)idantesQ por ello$ este derivado esta siendo utiliado en productos
cosm#ticos [5C7]-
5-6-(-4 Aplicaciones en la industria del papel
El uso de 1uitosano e ,idro)imetil1uitina como aditivo en las .ormulaciones del papel$ da lu+ar a
papeles con muc,as mejor caractersticas$ desde ma*or resistencia a 1uebrarse ,asta una mu* alta
resistencia al deterioro microbiano * enim:tico- En el papel .oto+r:.ico tambi#n se ,a lo+rado una
ma*or propiedad antiest:tica$ lo cual mejora su calidad [6]-
5-6-8-4 Aplicaciones en .ibras * reactivos para la industria te)til
El uso del 1uitosano como reactivo en la industria te)til puede variar en tres .ormas! /i0 producci2n
de .ibras permeables$ /ii0 como reactivo au)iliar para mejorar la viscosidad de las tintas * colorantes
en el estampado * /iii0 aplicado en la super.icie de la .ibra para mejorar sus propiedades [6]-
5.9.3 La -iscosimetr,a como m>todo *ara realizar un estudio de de*olimerizacin enzimtica
Como podemos ver$ la 1uitina$ el 1uitosano * sus derivados$ tanto sus oli+opolisac:ridos como los
derivados productos de la modi.icaci2n 1umica de al+unas de sus .unciones reactivas$ tienen un sin
nFmero de aplicaciones [5C9]- Por ello$ es de suma importancia desarrollar m#todos 1ue permitan
obtener dic,os productos de .orma r:pida- La depolimeriaci2n del 1uitosano * de la 1uitina es un
tema mu* actual * se ,a desarrollado un +ran inter#s por ellos en estos Fltimos a3os-
13
Uno de los procesos mas estudiados en este sentido es la depolimeriaci2n enim:tica- En este caso$
las cadenas del 1uitosano son OcortadasP mediante una enima adecuada$ dando como productos
cadenas del mismo material pero de peso molecular mas bajoQ teniendo mu* bien caracteriados los
materiales de partida * las di.erentes variables 1ue pueden a.ectar dic,o proceso$ podemos lle+ar al
punto de realiar estudios de cin#tica enim:tica-
Por otro lado$ la viscosimetra es una t#cnica 1ue proporciona una medida del peso molecular * del
comportamiento viscoel:stico de las cadenas de polmero$ siendo la t#cnica mas utiliada para
determinar el peso molecular del 1uitosano- Por ello$ el desarrollo de un m#todo basado en medidas
viscosim#tricas para el estudio de la de+radaci2n enim:tica de polmeros tiene su relevancia-
Con este .in desarrollamos el presente trabajo * proponemos el m#todo 1ue a continuaci2n se e)plica
para el estudio cin#tico de la depolimeriaci2n del 1uitosano por acci2n de la actividad
1uitosanolitica de la enima no especi.ica bromelina$ tomando en cuenta 1ue los resultados
encontrados en la literatura sobre la de+radaci2n enim:tica del 1uitosano por acci2n de la bromelina
no son conclusivos- Por un lado$ al+unos investi+adores a.irman 1ue la depolimeriaci2n ocurre de
.orma e)itosa * en una +ran e)tensi2n [65)66]$ mientras 1ue otros a.irman 1ue dic,a
depolimeriaci2n no ocurre o se realia con mu* bajo rendimiento [67]- A continuaci2n se resume el
trabajo 1ue se debe realiar$ el cual est: basado en una modi.icaci2n sustancial del m#todo propuesto
por Hercru*sse para la depolimeriaci2n enim:tica del ,ialuronano [5C:]!
Be miden valores de la viscosidad relativa /
rel
0 a diversos tiempos durante el transcurso de la
reacci2n de depolimeriaci2n-
Be obtiene valores de la viscosidad intrnseca del polmero /CE0 para cada tiempo$ usando
al+unas de las ecuaciones 1ue se encuentran en la biblio+ra.a /ecuaci2n de sano [5C;]$
ecuaci2n de Bolomon * Ciuta [5C<]$ ecuaci2n de Deb * C,atterjee [5CA]$ ecuaci2n de Ram *
Gaseen [5CB]0 para su determinaci2n con una sola medici2n- Estas mediciones se realian para
una serie de soluciones de concentraci2n conocida-
Los valores de CE obtenidos en la parte anterior son trans.ormados en valores de "
v
*>o @
v
$
usando la ecuaci2n de "ar;4<ouAin;4Ba;urada /"<B0 [55C]-
La pendiente inicial del +ra.ico @
v
vs tiempo de reacci2n produce la velocidad inicial con la
cual una cadena /v
om
0 disminu*e su +rado de polimeriaci2n promedio viscoso- Para encontrar
la velocidad total /v
o
0$ 1ue toma en cuenta todas las cadenas 1ue su.ren el proceso de
de+radaci2n a una concentraci2n determinada$ se multiplica v
om
por el valor de dic,a
concentraci2n /c
p
0$ es decir$ v
o
I v
om
c
p
-
Los valores de v
o
pueden ser tratados de acuerdo a la ecuaci2n de "ic,aelis4"enten$ en la
trans.ormaci2n de LineAaver49ur;$ +ra.icando 5>/v
o
c
p
0 vs 5>c
p
para obtener par:metros como
la constante de "ic,aelis4"ente /W
m
0$ velocidad m:)ima /v
ma)
0 [555) 556]$ etc-
El m#todo propuesto para realiar el se+uimiento cin#tico de la depolimeriaci2n del 1uitosano$ est:
basado en la determinaci2n de la viscosidad intrnseca del polmero en .orma instant:nea * continFa$
durante los estadios iniciales de la reacci2n de depolimeriaci2n procede- Las ecuaciones 1ue se
evaluar:n para determinar CE usando solo el valor de
rel
*>o
sp
$ denominado m#todo de un solo
punto$ son las si+uientes!
14
Tabla 5-5-4 Ecuaciones para la determinaci2n de la viscosidad intrnseca con una sola medida de viscosidad
Ecuaci2n Propuesta por TFmero Re.erencia
Bano /50 [5C;]
Bolomon * Ciuta /&0 [5C<]
Deb * C,atterjee /60 [5CA]
Ram * Gaseen /L0 [5CB]
Como podemos ver$ las ecuaciones anteriores solo toman en cuenta valores e)perimentales de
viscosidad relativa *>o viscosidad espec.icaQ por ello los valores de viscosidad intrnseca obtenidos
son directos$ no dependen de nin+Fn par:metro 1ue condicione la determinaci2n de esta propiedad
.sica- Tambi#n este m#todo es utiliado por1ue simpli.ica el trabajo cuando el nFmero de muestra es
demasiado +rande * el tiempo es una limitante [557]) aun1ue se ,an reportados trabajos donde se
conclu*e 1ue al+unas de estas ecuaciones producen resultados inaceptables$ aFn cuando se trabaje
con soluciones diluidas de polmeros-
15
6.3 Descri*cin del *ro(ecto
6.5.3 %bFeti-os
Generales!
Desarrollar un m#todo te2rico4pr:ctico para estudios cin#ticos de la depolimeriaci2n del
1uitosano basado .undamentalmente en mediciones viscosim#tricas-
Espec.icos!
Estudiar la depolimeriaci2n del 1uitosano con la a*uda de la enima proteoltica
bromelina * realiar$ en lo posible$ el estudio cin#tico de dic,a depolimeriaci2n-
Desarrollar un m#todo e)perimental para la separaci2n * caracteriaci2n de al+unos
productos oli+om#ricos de la depolimeriaci2n-
6.6.3 2i*tesis
La de+radaci2n enim:tica del 1uitosano con la a*uda de al+unas ,idrolasas como son la papana *
la lisoima ,a sido e)itosa$ como lo con.irma el +ran nFmero de publicaciones sobre la
depolimeriaci2n de la cadena polim#rica del 1uitosano con estas enimas- Por ser la bromelina una
,idrolasa$ con un .uncionamiento /cat:lisis de las reacciones de ,idr2lisis de los polisac:ridos0 mu*
parecido al de las enimas mencionadas$ se estima 1ue con ella se pueden obtener resultados
similares a los obtenidos con #stas$ +enerando oli+opolisac:ridos 1ue presenten una to)icidad similar
al 1uitosano pero con la ma*or actividad bactericida 1ue se ,a reportado para #stos-
16
7.3 +arte e8*erimental
7.5.3 eacti-os?
Quitosano /Flu;a$ 9ioC,emi;a0$ con peso molecular apro)imado K''-''' Da-
9romelina /EC 6-L-&&-L0 T? 94&&7& /Bi+ma C,emical Co-0-
A+ua desioniada /"illipore "illi Q58).
Xcido clor,drico /Riedel de <aYn$ 6(Z +rado analtico0-
Xcido ac#tico /Riedel de <aYn$ JJ$8ZQ dI 5-'7 +>ml0
<idr2)ido de sodio /EWA C,emical$ JJZ0
Acetato de sodio /Pro anal*si$ JJZ an,idro0
EDTA$ Bal dis2dica$ di,idrato /%-T- 9a;er$ 5''Z0
7.63 "nstrumentacin
Las medidas de viscosidad se realiaron con un viscosmetro Cannon /57'4D7'60 el cual
estaba sumer+ido en un ba3o termost:tiado Gallen;amp controlado a &7 t '$5 ?C-
Los espectros de FTNR se tomaron en un espectr2metro Per;in Elmer &''' con la muestra en
.orma de pastilla de W9r-
7.7.3 +uri=icacin ( caracterizacin de los reacti-os
6-6-5-4 Puri.icaci2n del 1uitosano
El 1uitosano se puri.ic2 por reprecipitaci2n en ,idr2)ido de sodio de la si+uiente manera! se pes2 5 +
del polmero * se disolvi2 en 5'' mL de una soluci2n acuosa de acido clor,drico '$& " en un
recipiente de boca anc,a$ e1uipado con un a+itador mec:nico- Be esper2 1ue el polmero se
disolviera por completo /& ,oras con a+itaci2n manual0 * se comenaron a a3adir lentamente &7'
mL de una soluci2n de TaM< '$55 "$ con a+itaci2n constante$ observ:ndose la precipitaci2n de
polmero en .orma de .ibras blan1uecinas- Terminada la adici2n de TaM< se dej2 reposar el sistema
* lue+o se .iltr2 por succi2n en un embudo <irsc, con un tama3o de poro de 5 milmetro$ lo+rando
separar el material .ibroso de la .ase l1uida- Al .iltrado se le realiaron lavados con a+ua
desioniada en el embudo de .iltraci2n$ este proceso de repiti2 las veces 1ue .ue necesario$ ,asta 1ue
el valor de p< del los residuos del lavado .uese mu* cercano a (- El material as obtenido se sec2 en
una estu.a a L' ?C durante una noc,e$ obteni#ndose una masa .inal de '$8&J& t '$'''5 +ramos- Be
+uard2 en un desecador ,asta 1ue se utiliara para preparar las soluciones necesarias para el trabajo
e)perimental-
6-6-&-4 Caracteriaci2n del 1uitosano
Espectroscopia *-I! el espectro de FTNR del material puri.icado se tom2 usando una pastilla de
W9r preparada con K m+ de 1uitosano * K' m+ de W9r /ver .i+ura L-50-
/eterminacin del peso molecular!
a0 "#todo viscosim#trico usando la ecuaci2n de <u++ins!
Las medidas de viscosidad se realiaron en un viscosmetro capilar Cannon modelo D7'6457'
sumer+ido en un ba3o termost:tiado a &7t'$5 ?C- La soluci2n de polmero se prepar2
disolviendo '$5&55 t '$'''5 + en 5'' ml de un bu..er :cido ac#tico /'$6'58 "0>acetato de sodio
17
/'$&'58 "0- De esta soluci2n se tom2 una alcuota de 5& mL * se coloc2 en el viscosmetro$ se
esperaron 7 minutos para lo+rar el e1uilibrio t#rmico * se midi2 el tiempo de cada de la soluci2n
a trav#s del capilar- Cada medici2n .ue realiada L veces por muestra * el procedimiento se
repiti2 para las ( soluciones de distinta concentraci2n /c
p
0 1ue se estudiaron- Las muestras a
distintas concentraciones .ueron preparadas variando el volumen de alcuota tomado de la
soluci2n matri de polmero * completando a un volumen total de 5& mL con la soluci2n del
bu..er /ver tabla L-&0- Para los c:lculos de todas las concentraciones se consider2 1ue la muestra
inicial de polmero tena un contenido de a+ua del 7 Z /p>p0$ como se determin2 mediante un
an:lisis termo+ravim#trico-
b0 "#todo viscosim#trico de un solo punto!
Con las medidas e)perimentales realiadas en el apartado anterior se utiliaron las ecuaciones de
Bano$ Bolomon4Ciuta$ Deb4C,atterjee * Ram4Gaseen /ecuaciones 5$ & 6 * L0$ para calcular la
viscosidad intrnseca del polmero para todas las soluciones iniciales estudiadas$ lue+o de lo cual
se determin2 "
H$
usando la relaci2n de "ar;4<ouAin;4Ba;urada /ver tabla L-K0-
7.9.3 Mediciones de la cin>tica de de*olimerizacin
6-L-5- Preparaci2n de las soluciones
Para estos e)perimentos las soluciones de polmero estudiadas .ueron las mismas 1ue se prepararon
para la determinaci2n de "
H
- Por su parte$ la enima se prepar2 de la si+uiente .orma! se pesaron
'$''7( t '$'''5 +ramos de enima$ tomada directamente como viene del proveedor$ * se colocan en
una soluci2n acuosa de EDTA al '$''56 " /'$'L(& +ramos de EDTA disueltos en 5'' mL de a+ua
desioniada0$ se esper2 1ue la enima se disolviera pero solo se lo+r2 obtener una soluci2n
li+eramente turbia-
6-L-&-4 "ediciones viscosim#tricas
Todas las soluciones .ueron tratadas de la si+uiente manera!
Be coloca un volumen determinado de la soluci2n matri de 1uitosano /'$55LJ +>dL0 dentro
del viscosmetro * se completa con la soluci2n amorti+uadora un volumen total de 5& mL-
Be sumer+e #ste en el ba3o termost:tiado$ dejando 1ue todo el sistema lle+ue al e1uilibrio
t#rmico /&7$' t '$5 ?C0 por un tiempo de cinco minutos-
Be realian las mediciones del tiempo 1ue tarda la soluci2n de polmero puro a trav#s del
capilar /L veces0-
Be procede a a+re+ar al sistema una cantidad constante de la soluci2n de enima /&' L$
7$KJ()5'
46
+>dL0$ cuidando 1ue #sta cai+a en la soluci2n con el sustrato$ se a+ita el sistema *
lue+o se deja el sistema en reposo por dos minutosQ transcurrido ese lapso$ se realian las
mediciones del tiempo de paso de la soluci2n a trav#s del capilar a diversos tiempo de
reacci2n durante un tiempo total de apro)imadamente J' minutos- La tabla 6-5 muestra la
relaci2n en peso 1uitosano>bromelina de las diversas soluciones estudiadas-
18
$abla 7.5.3 Relaci2n sustrato>enima en cada una de las soluciones estudiadas- El valor de la concentraci2n
de enima se mantuvo constante en todas las soluciones /J$L87 )5'
4K
+ dL
45
0-
Concentracin de quitosano /+-dL
45
0 elacin quitosanoGbromelina
/p>p0
'$'&J [>4 '$''5 6-'&(
'$'L6 [>4 '$''5 L-7LL
'$'7K [>4 '$''& K-'77
'$'(& [>4 '$''& (-7('
'$'8K [>4 '$''6 J-'8&
'$5'5 [>4 '$''6 5'-7JK
'$557 [>4 '$''6 5&-55L
19
9.3 esultados ( anlisis.
9.5.3 Caracterizacin del quitosano
L-5-5-4Determinaci2n del +rado de acetilaci2n por espectroscopa FTNR
El m#todo utiliado para determinar el +rado de acetilaci2n /GA0 del 1uitosano puri.icado es el
propuesto por 9a)ter et al [55<]$ 1ue emplea la ra2n de absorbancias A
5K77
>A
6L7'
/ver ecuaci2n 70-
La banda a 5K7(-5( cm
45
es asi+nada al carbonilo del +rupo acetamida /amida0$ la banda a 6L7L$7L
cm
45
es asi+nada a los +rupos ,idro)ilos * es tomada como la re.erencia interna /para ,acer las
correcciones en cuanto a las di.erencias de concentraci2n en las pastillas de bromuro de potasio0-
Con estos valores de absorbencias * las lneas bases para cada una de las bandas seleccionadas$ se
obtiene un valor de Z GA I 57 ZQ este valor corresponde a un porcentaje de desacetilaci2n /Z
GDA0 I 87 Z-
@ig. 9.5.3 FTNR del 1uitosano puri.icado- Pastilla de W9r-
/ec- 70
20
( ) 557 Z
6L7'
5K77
$
A
A
4A

,
_
$abla 9.5.3 Asi+naci2n de las bandas del espectro de 1uitosano [6]

Banda Hcm.
35
D Asignacin
6K'' a &8'' Tensi2n +rupos /4'<0$ /4T<0$ /4C<&0$/4C<60
5K7( Tensi2n del carbono carbonlico
57J' Hibraci2n de doblaje /4T<&0
5658 Tensi2n +rupo amida
55K' Tensi2n del puente +luc2sido /C4M4C0
55'' a 5'6' Hibraci2n anillo sac:rido
8J' Tensi2n /4C4<0 +rupos anom#ricos
L-5-&-4 Determinaci2n del peso molecular
a0 "#todo viscosim#trico usando la ecuaci2n de <u++ins!
Las medidas de viscosidad se realiaron como est: descrito en la parte e)perimental$ a la
temperatura &7 ?C$ utiliando el bu..er :cido ac#tico>acetato de sodio como solvente$ * a una
concentraci2n inicial del polmero de '$55L8 +-dL
45
- La tabla L-& muestra los valores obtenidos para
cada una de las soluciones estudiadas-
$abla 9.6.3 Tiempos de eluci2n promedio de las soluciones de polmero
c
*

/+ dL
45
0
t
elucin
/s0
t
elucin
H t D
/s0
c
*

/+ dL
45
0
t
elucin

/s0
t
elucin
H t D
/s0
'$''''
&J$(7
&J$(L
&J$(K
&J$(7
&J$(7 t '$'5
'$'(& [>4 '$''&
K6$6&
K6$6'
K6$65
K6$65
K6$65 t '$'5
'$'&J [>4 '$''5
L'$J&
L'$J5
L'$J'
L'$88
L'$J' t '$'&
'$'8K [>4 '$''6
(&$7&
(&$77
(&$76
(&$7L
(&$7L t '$'5
'$'L6 [>4 '$''5
L($&6
L($&7
L($&L
L($&6
L($&6 t '$'5
'$5'5 [>4 '$''6
8L$KL
8L$KK
8L$K7
8L$KL
8L$K7 t '$'5
'$'7K [>4 '$''&
7L$JJ
7L$J7
7L$JL
7L$JK
7L$JK t '$'&
'$557 [>4 '$''6
J8$6L
J8$6L
J8$67
J8$&8
J8$6& t '$'6
Cada uno de los valores e)perimentales obtenidos para t
eluci2n
es trans.ormado en viscosidad relativa
/
rel
0$ viscosidad espec.ica /
sp
0 * viscosidad reducida /
red
0 con las ecuaciones 5'45& /ver ap#ndice
&0 [55C]- Los resultados de dic,a trans.ormaci2n$ para cada una de las concentraciones a las 1ue se
trabaj2$ se muestran en la tabla L-6-
21
$abla 9.7.3 Halores calculados de las ma+nitudes utiliadas en viscosimetra
c*
/+ dL
45
0
telucin
/s0
rel s* red
'$'''' &J$(6 t '$'5 444 444 444
'$'&J [>4 '$''5 L'$J' t '$'& 5$6(K t '$''5 '$6(K t '$''5 56$'J t '$'L
'$'L6 [>4 '$''5 L($&6 t '$'5 5$78J t '$''5 '$78J t '$''5 56$KK t '$'6
'$'7K [>4 '$''& 7L$JK t '$'& 5$8LJ t '$''5 '$8LJ t '$''5 5L$(8 t '$'&
'$'(& [>4 '$''& K6$65 t '$'5 &$5&J t '$''5 5$5&J t '$''5 57$(6 t '$'&
'$'8K [>4 '$''6 (&$7L t '-'5 &$LL' t '$''5 5$LL' t '$''5 5K$(5 t '$'&
'$5'5 [>4 '$''6 8L$K7 t '$'5 &$8L( t '$''5 5$8L( t '$''5 58$68 t '$'5
'$557 [>4 '$''6 J8$6& t '$'6 6$6'( t '$''& &$6'( t '$''& &'$'8 t '$'5
Para la determinaci2n de la viscosidad intrnseca se utili2 el procedimiento +r:.ico 1ue ,ace uso de
la ecuaci2n de <u++ins /ver .i+ura L-&0$ es decir$ se +ra.ic2 la viscosidad reducida /
sp
>c
p
0 en .unci2n
de c
p
/.i+ura L-&0- Be utiliaron los 7 puntos de menor concentraci2n reportados en la tabla anterior *
la lnea recta obtenida con #stos permite determinar directamente del corte con el eje O*P el valor de
la viscosidad intrnseca /[]0 del polmeroQ de la pendiente se obtiene la constante de <u++ins /;
<
0$
la cual permite valorar si las cadenas de polmeros est:n su.riendo procesos de a+re+aci2n en las
condiciones e)perimentales estudiadas [55C]- Los valores recabados de esta manera se muestran en
la tabla si+uiente-
@ig. 9.6.3 Gr:.ico de sp>cp0 en .unci2n de cp /ecuaci2n de <u++ins0 para el 1uitosano puri.icado- Bolvente!
soluci2n amorti+uadora de :cido ac#tico /'$6'58 "0>acetato de sodio /'$&'58 "0- p< I L$&7- T I &7 ?C-
22
$abla 9.9.3 Resultados obtenidos a partir del +r:.ico de <u++ins
IE
/dL-+
45
0
+endiente
/dL
&
>+
&
0
J
2
Correlacin
/R
&
0
55$'K5 KL$J(K '$76K '$JJ&'
Utiliando la ecuaci2n de "ar;4<ouAin;4Ba;urada /ver ec- K0 [55C] se determin2 el valor del peso
molecular promedio viscoso /"
H
0 del 1uitosano utiliado$ usando los valores de * W reportados
por Rinaudo [55:]- Los resultados obtenidos de esta manera son similares a los obtenidos por
Be+nini * Fil,o [55;] usando una muestra de 1uitosano de la misma procedencia 1ue la usada en
este estudio
/ec- K0
$abla 9.:.3 Determinaci2n de peso molecular promedio viscoso
.85C
:

/dL +
45
0
IE
/dL-+
45
0
M
-
/
+-mol
45
0
'$(K (L 55$'K5 655-'K5
La .i+ura L-& muestra la viscosidad reducida como .unci2n de la concentraci2n de las soluciones de
1uitosano estudiadas utiliando el m#todo +ra.ico para la determinaci2n de la viscosidad intrnseca-
En ella se observa una disminuci2n lineal de la viscosidad reducida a medida 1ue la concentraci2n
del 1uitosano disminu*e$ lo 1ue indica 1ue la ecuaci2n de <u++ins es aplicable a las soluciones de
polmero en estudio$ en las condiciones de trabajo seleccionadas /ver tabla L-60 [55A]- De la
re+resi2n lineal se obtienen los valores de la tabla L-L- La viscosidad intrnseca es una medida del
volumen espec.ico de una mol#cula de polmero en .orma aislada en el solvente estudiadoQ valores
de la constante de <u++ins entre '$64'$7 indican 1ue no ,a* e.ectos de a+re+aci2n entre las cadenas
de polmero en las condiciones estudiadas- El valor obtenido e)perimentalmente result2 ser de ;
<
I
'$76K$ indicando 1ue ,a* una perturbaci2n de #ste tipo [55A]- La viscosidad intrnseca por ser el
volumen espec.ico de un polmero aislado$ es determinada e)trapolando la recta a concentraci2n
nula [55C] /.i+- L-&0- Bu valor depende del tama3o de la mol#cula del soluto$ as como de su
interacci2n con el disolvente * de la temperatura de trabajo-
Con la e)presi2n de "ar;4<ouAin;4Ba;urada /"<B$ ecuaci2n K0 se calcula el peso molecular
promedio viscoso del 1uitosanoQ los resultados obtenidos se muestran en la tabla L-7- En la ecuaci2n
de "<B tenemos dos par:metros 1ue son constantes * 1ue dependen de cada pareja de
polmero>disolvente$ de la temperatura a la cual se ,a+a las medidasQ los valores de constantes
utiliados en los c:lculos son los reportados por Rinaudo * colaboradores [55:] /ver tabla L-70-
b0 "#todo viscosim#trico de un solo punto!
La determinaci2n del peso molecular promedio viscoso /"
H
0 a trav#s de las viscosidad intrnseca
calculada por el m#todo de un solo punto es realiada en muc,as oportunidades debido a 1ue dic,o
m#todo simpli.ica el trabajo cuando el tiempo para el estudio es una limitante- N+ualmente$ los
valores de [] 1ue se obtienen al aplicar las ecuaciones involucradas son directos$ no dependen de
23
nin+Fn otro par:metro /una constante previamente establecida$ por ejemplo0 1ue condicione el
estudio realiado [557]- En la tabla L-K encontramos los resultados arrojados por el estudio de
nuestro sistema con cada una de las ecuaciones seleccionadas /ecuaciones 5 ,asta la L0 para la
determinaci2n de la viscosidad intrnseca- Con dic,os resultados$ * utiliando la ecuaci2n de "ar;4
<ouAin;4Ba;urada$ se calcularon los valores de peso molecular promedio viscoso /"
H
0-
Los valores de viscosidad intrnseca obtenidos mediante la ecuaci2n de Bano [5C;] llevan a un valor
de "
H
/promedio0 m:s pr2)imo al valor obtenido a trav#s del m#todo +ra.ico- N+ualmente$ son los
resultados 1ue tienen menor dispersi2n con respecto a valor promedio calculado /ver tabla L-(0-
$abla 9.;.3 Halores obtenidos para la viscosidad intrnseca * peso molecular usando el m#todo un solo punto-
c*
+ dL
45
telucin
/s0
rel s* []
Ec- 5
M-
5
[]
Ec- &
M-
&
[]
Ec- 6
M-
6
[]
Ec- L
M-
L
'$'&J L'$J' 5$6(
K
'$6(K 55$6 6&5-&'
5
55$(6 66K-57
8
5&$' 6L8-77
'
5&$5 6LJ-J(
7
'$'L6 L($&6 5$78
J
'$78J 55$5 65'-J'
&
55$KL 66&-76
5
5&$' 67'-(7
L
5&$& 676-86
(
'$'7( 7L$JK 5$8L
J
'$8LJ 55$5 656-&7
'
55$J& 6L6-'8
6
5&$' 6K8-K8
7
5&$( 6(L-7&
6
'$'(& K6$65 &$5&
J
5$5&J 55$' 65'-6'
L
5&$'L 6L(-(6
&
5&$' 68'-L6
5
56$5 68J-(6
J
'$'8K (&$7L &$LL
'
5$LL' 5'$J 6'(-'(
K
5&$57 67&-'6
K
56$' 6J&-'5
(
56$7 L'7-KL
L
'$5'5 8L$K7 &$8L
(
5$8L( 55$5 656-6&
(
5&$7J 6K8-J5
J
56$' L5J-6J
7
5L$L L6J-J&
L
'$557 J8$6& 6$6'
(
&$6'( 55$& 65(-&6
L
5&$J( 686-K7
7
5L$' LL7-&6
(
57$& L(L-6K
&
[] en dL +
45
Q "H en + mol
45
$abla 9.<.3 Pesos moleculares promedios obtenidos utiliando las distintas ecuaciones estudiadas
!cuacin "H Desviaci2n est:ndar Z de dispersi2n
5 656-6&8 L-K(J 5$LJ
& 67&-'5K 58-66' 7$&5
6 68K-L68 67-K(5 J$&6
L 6J8-&8K L7-K87 55$L(
Los resultados obtenidos a partir de las viscosidades intrnsecas calculadas con las otras ecuaciones
/ecuaciones & ,asta la L0 muestran valores de "
H
si+ni.icativamente ma*ores al obtenido mediante el
m#todo +r:.ico *$ adicionalmente$ presentan una ma*or dispersi2n- Las desviaciones probablemente
puedan ser e)plicadas por las contribuciones lo+artmicas de estas ecuaciones$ las cuales$ como se
sabe$ son m:s remarcadas para valores ma*ores de 5 en su ar+umento- Como puede observarse
claramente de los datos en la tabla K$ los valores de "
H
son ma*ores para las soluciones m:s
concentradas$ es decir$ para las soluciones 1ue poseen valores de
sp
*>o
rel
m:s altos-
24
9.6.3 !studio cin>tico
L-&-5-4 Determinaci2n instant:nea del +rado de polimeriaci2n durante la de+radaci2n enim:tica-
El objetivo de esta parte del trabajo .ue el estudio de la disminuci2n de la viscosidad intrnseca a
medida 1ue ocurra la reacci2n de depolimeriaci2n del 1uitosano por la acci2n de la bromelina$ es
decir$ la ,idr2lisis del enlace +licosdico 1ue enlaa las unidades repetitivas en la cadena polim#rica-
Los valores del tiempo de eluci2n a trav#s del capilar durante el transcurso de la reacci2n mostraron
una disminuci2n apreciable en la viscosidad relativa$ comportamiento comFn en todas las soluciones
a di.erente concentraci2n de sustrato utiliadas- Los resultados obtenidos pueden apreciarse en las
tablas L-84L-5L- A partir de la viscosidad relativa *>o espec.ica$ * utiliando cuatro ecuaciones
di.erentes 1ue se .undamentan solo en una medici2n de #stas variables$ se calculan valores de
viscosidad intrnseca$ los cuales pueden ser relacionado directamente con "
H
* @
H
a trav#s de la
ecuaci2n de "<B /ecuaci2n K0 * las constantes * W reportadas por Rinaudo * colaboradores [55:].
25
$abla 9.A.3 Datos * resultados obtenidos para la soluci2n de 1uitosano de cp I '$'&J [>4 '$''5 +>dL
t
reaccin

/s0
t
ca,da
/s0

rel

s*
[]
Ec- 8
K
V
Ec-8
[]
Ec- J
K
V
Ec-J
[]
Ec- 5'
K
V
Ec-5'
[]
Ec- 55
K
V
Ec-55
'$'' L'$J' 5$6(7 '$6(7
55$65' 5J5( 55$('( &''K 5&$'66 &'8' 5&$'(' &'88
5K'$K7 L'$K7 5$6KK '$6KK
55$'8K 58K( 55$LK( 5J7& 55$(8' &'&& 55$857 &'6'
6L'$L7 L'$L7 5$6K' '$6K'
5'$J'( 58&8 55$&(K 5J'J 55$7(8 5J(( 55$K5& 5J8L
7&'$6' L'$6' 5$677 '$677
5'$((6 5(J8 55$56& 58(( 55$L&( 5JL6 55$L7J 5J7'
(''$5L L'$5L 5$6LJ '$6LJ
5'$K&J 5(KK 5'$J(J 58L6 55$&K7 5J'( 55$&JK 5J5L
8(J$J' 6J$J' 5$6L5 '$6L5
5'$L5& 5(5J 5'$(L8 5(J& 55$'&& 5876 55$'75 587J
5'7J$(K 6J$(K 5$66K '$66K
5'$&87 5KJ& 5'$K5& 5(K6 5'$88' 58&& 5'$J'8 58&8
5&6J$K' 6J$K' 5$665 '$665
5'$56J 5KK' 5'$L7( 5(&J 5'$(58 5(8K 5'$(LL 5(J&
5L5J$L6 6J$L6 5$6&7 '$6&7
J$J8L 5K&( 5'$&J& 5KJ6 5'$7LL 5(L8 5'$7(' 5(7L
57JJ$65 6J$65 5$6&5 '$6&5
J$8(L 5K'6 5'$5(K 5KK8 5'$L&& 5(&5 5'$LL( 5(&(
5((J$5( 6J$5( 5$65( '$65(
J$(LK 57(K 5'$'6J 5K6J 5'$&(J 5KJ' 5'$6'& 5KJ7
5J7J$'K 6J$'K 5$656 '$656
J$KLL 577L J$J65 5K5K 5'$5KK 5KKK 5'$58J 5K(5
&568$J' 68$J' 5$6'( '$6'(
J$LJK 57&6 J$((7 578& 5'$''& 5K65 5'$'&L 5K67
&658$8( 68$8( 5$6'K '$6'K
J$LKJ 575( J$(L7 57(K J$J(5 5K&L J$JJ6 5K&J
&LJ8$(' 68$(' 5$6'5 '$6'5
J$655 5L8L J$7(8 57L' J$(J( 578( J$85( 57J5
&K(8$K6 68$K6 5$&J8 '$&J8
J$&LK 5L(' J$7'J 57&K J$(&L 57(5 J$(L7 57(K
&878$78 68$78 5$&J( '$&J(
J$5JJ 5LK5 J$LK' 5757 J$K(6 57K' J$KJ6 57K7
6'68$7' 68$7' 5$&JL '$&JL
J$5&L 5LL7 J$685 5LJJ J$7J' 57L6 J$K5' 57L(
6&58$L7 68$L7 5$&J& '$&J&
J$'(8 5L67 J$66& 5L88 J$76J 576& J$778 576K
66J8$L5 68$L5 5$&J5 '$&J5
J$'L' 5L&8 J$&J& 5L8' J$LJ8 57&6 J$75K 57&(
67(8$&7 68$&7 5$&8K '$&8K
8$8J' 56JK J$56L 5LL( J$66& 5L88 J$67' 5LJ&
6(78$56 68$56 5$&8& '$&8&
8$((( 56(6 J$'5L 5L&& J$&'8 5LK& J$&&7 5LKK
6J68$5' 68$5' 5$&85 '$&85
8$(LJ 56K( 8$J87 5L5K J$5(( 5L7K J$5JL 5LK'
L558$'7 68$'7 5$&(J '$&(J
8$('& 5678 8$J67 5L'K J$5&7 5LL7 J$5L& 5LLJ
L&J($JJ 6($JJ 5$&(( '$&((
8$KL7 56LK 8$8(7 56J6 J$'K6 5L6& J$'(J 5L6K
LL(($J6 6($J6 5$&(7 '$&(7
8$788 566L 8$857 5685 J$''' 5L5J J$'5K 5L&6
LK7($(J 6($(J 5$&(' '$&('
8$L7K 56'( 8$K(7 567& 8$877 568J 8$8(' 56J&
L86($(' 6($(' 5$&K( '$&K(
8$6(' 5&J' 8$787 566L 8$(K5 56(' 8$((K 56(6
7'5($K7 6($K7 5$&K7 '$&K7
8$6&& 5&8' 8$767 56&L 8$('J 567J 8$(&6 56K&
75J($K6 6($K6 5$&K7 '$&K7
8$6'6 5&(K 8$757 565J 8$K88 5677 8$('& 5678
76(($K5 6($K5 5$&KL '$&KL
8$&8L 5&(6 8$LJ7 5657 8$KK( 5675 8$K85 5676
777($7( 6($7( 5$&K6 '$&K6
8$&LK 5&K7 8$L77 56'( 8$K&7 56L& 8$KL' 56L7
[] en dL +
45
Q t
solvente[enima
I &J$(7& s
26
$abla 9.B.3 Datos * resultados obtenidos para la soluci2n de 1uitosano de cp I '$'L6 [>4 '$''5 +>dL
t
reaccin

/s0
t
ca,da
/s0

rel

s*
[]
Ec- 8
K
V
Ec-8
[]
Ec- J
K
V
Ec-J
[]
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K
V
Ec-5'
[]
Ec- 55
K
V
Ec-55
'$'' L($&6
5$78
8 '$788
55$'L' 587( 55$K58 5J8K 5&$'J8 &'J7 5&$5(J &556
5K($'& L($'&
5$78
' '$78'
5'$J&J 586& 55$LJ7 5J78 55$JK7 &'KL 5&$'L6 &'8&
6LK$(5 LK$(5
5$7(
' '$7('
5'$(KK 5(J( 55$657 5J58 55$((5 &'&' 55$8L7 &'6(
7&K$&J LK$&J
5$77
K '$77K
5'$7L7 5(L8 55$'(5 58KL 55$7'( 5JK5 55$7(K 5J((
('K$'7 LK$'7
5$7L
8 '$7L8
5'$L5( 5(&' 5'$J6' 5866 55$677 5J&( 55$L&6 5JL&
887$(& L7$(&
5$76
( '$76(
5'$&L5 5K8& 5'$(6K 5(J' 55$5L( 5885 55$&5' 58J7
5'K7$7& L7$7&
5$76
' '$76'
5'$56L 5K7J 5'$K5J 5(KL 55$'&' 587& 55$'8& 58KK
5&L7$66 L7$66
5$7&
L '$7&L
5'$'65 5K6( 5'$7'K 5(L' 5'$8JJ 58&K 5'$J7J 586J
5L&7$'J L7$'J
5$75
K '$75K
J$J'& 5K'J 5'$6KL 5('J 5'$(LK 5(J& 5'$8'L 58'7
5K'L$8L LL$8L
5$7'
( '$7'(
J$(KK 578' 5'$&57 5K(( 5'$78( 5(7( 5'$KL& 5(KJ
5(8L$K6 LL$K6
5$7'
' '$7''
J$K75 577K 5'$'J' 5K7' 5'$L7& 5(&8 5'$7'K 5(L'
5JKL$L8 LL$L8
5$LJ
7 '$LJ7
J$7KJ 5768 5'$''' 5K6' 5'$67K 5('( 5'$L'8 5(58
&5LL$68 LL$68
5$LJ
& '$LJ&
J$75L 57&( J$JL' 5K5( 5'$&J& 5KJ6 5'$6L6 5('L
&6&L$&( LL$&(
5$L8
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&7'L$5' LL$5'
5$L8
& '$L8&
J$6K' 5LJL J$((& 5785 5'$55& 5K7L 5'$5K' 5KK7
&K86$86 L6$86
5$L(
6 '$L(6
J$&5' 5LK6 J$K'J 57L( J$J68 5K5( J$J8L 5K&(
&8K6$K8 L6$K8
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8 '$LK8
J$5&( 5LLK J$758 57&8 J$8L5 57JK J$88K 5K'K
6'L6$77 L6$77
5$LK
L '$LKL
J$'7L 5L6' J$L6J 5755 J$(7( 57(8 J$8'' 5788
6&&6$L6 L6$L6
5$LK
' '$LK'
8$J8( 5L5K J$6KK 5LJK J$K(J 57K& J$(&5 57(5
6L'6$&( L6$&(
5$L7
L '$L7L
8$8J( 56J8 J$&KJ 5L(7 J$7(7 57L' J$K5K 57L8
6786$5K L6$5K
5$L7
5 '$L75
8$867 5687 J$&'& 5LK5 J$7'6 57&7 J$7LL 5766
6(K6$'K L6$'K
5$LL
( '$LL(
8$((J 56(6 J$5L' 5LL8 J$L68 5755 J$L(8 575J
6JL&$J5 L&$J5
5$LL
& '$LL&
8$KJL 567K J$'LJ 5L&J J$6L' 5LJ' J$6(J 5LJ8
L5&&$8K L&$8K
5$LL
5 '$LL5
8$KKK 567' J$'58 5L&6 J$6'8 5L86 J$6LK 5LJ5
27
L6'&$8' L&$8'
5$L6
J '$L6J
8$K6& 56L6 8$J85 5L57 J$&KJ 5L(7 J$6'K 5L86
LL8&$(( L&$((
5$L6
8 '$L68
8$K57 56L' 8$JK6 5L55 J$&LJ 5L(5 J$&8K 5L(J
LKK&$78 L&$78
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J$J'8 5K55 55$'7J 58K5 5&$'78 &'87 5&$L55 &5KK
&677$76 (7$76
&$76
J 5$76J
J$865 57JL 5'$JKL 58L' 55$JL7 &'K' 5&$&J' &568
&767$'J (7$'J
&$7&
L 5$7&L
J$(KK 578' 5'$88& 58&& 55$87' &'68 5&$58( &557
&(5L$K5 (L$K5
&$7'
8 5$7'8
J$KJL 57K7 5'$(JL 58'6 55$(LK &'57 5&$'(7 &'8J
&8JL$&K (L$&K
&$LJ
K 5$LJK
J$KL& 577L 5'$(&J 5(88 55$KKJ 5JJ( 55$JJ6 &'(5
6'(6$87 (6$87
&$L8
& 5$L8&
J$78' 57L5 5'$K7& 5((& 55$78' 5J(( 55$8J( &'LJ
6&76$66 (6$66
&$LK
7 5$LK7
J$7'5 57&L 5'$777 5(7' 55$LKK 5J7& 55$((7 &'&5
6L66$5& (6$5&
&$L7
8 5$L78
J$L(' 575( 5'$75K 5(L& 55$L&' 5JL5 55$(&K &'5'
6K5&$(( (&$((
&$LL
K 5$LLK
J$L5K 57'K 5'$L7' 5(&( 55$6L6 5J&L 55$KL6 5JJ&
6(J&$76 (&$76
&$L6
8 5$L68
J$6(J 5LJ8 5'$L'7 5(58 55$&J' 5J5& 55$78( 5J(J
6J(5$JJ (5$JJ
&$L&
' 5$L&'
J$&JK 5L85 5'$6'6 5KJ7 55$5(5 588K 55$L7J 5J7'
L575$8& (5$8&
&$L5
L 5$L5L
J$&(' 5L(7 5'$&(' 5K88 55$566 58(8 55$L5J 5JL5
32
L665$L6 (5$L6
&$L'
5 5$L'5
J$&5' 5LK6 5'$5JK 5K(& 55$'L( 5878 55$6&( 5J&5
L755$'& (5$'&
&$68
( 5$68(
J$5LK 5LLJ 5'$558 5K7K 5'$J7K 5868 55$&6' 58JJ
LKJ'$KJ ('$KJ
&$6(
K 5$6(K
J$'JL 5L6J 5'$'77 5KL& 5'$886 58&& 55$575 588&
L8('$LJ ('$LJ
&$6K
J 5$6KJ
J$'K6 5L6& 5'$'5K 5K6L 5'$868 585& 55$5'L 58(5
7'7'$5J ('$5J
&$67
J 5$67J
J$'57 5L&& J$J7J 5K&5 5'$((5 5(J8 55$'6& 5877
7&&J$J& KJ$J&
&$67
' 5$67'
8$J(6 5L5L J$J'( 5K5' 5'$(55 5(8L 5'$JK8 58L5
7L'J$7J KJ$7J
&$66
J 5$66J
8$J&' 5L'6 J$8L6 57J( 5'$K6( 5(K8 5'$88J 58&L
778J$L7 KJ$L7
&$66
L 5$66L
8$8J8 56J8 J$85K 57J5 5'$K'7 5(K5 5'$87K 585K
[] en dL +
45
Q t
solvente[enima
I &J$(7& s
33
$abla 9.59.3 Datos * resultados obtenidos para la soluci2n de 1uitosano de cp I '$557 [>4 '$''6 +>dL
t
reaccin

/s0
t
ca,da
/s0

rel

s*
[]
Ec- 8
K
V
Ec-8
[]
Ec- J
K
V
Ec-J
[]
Ec- 5'
K
V
Ec-5'
[]
Ec- 55
K
V
Ec-55
'$'' J8$6& 6$6'7 &$6'7
55$&&5 58J( 5&$JKL &&JL 5L$757 &KK& 57$&65 &86K
&5K$(J JK$(J 6$&76 &$&76
55$'K& 58K& 5&$(76 &&L7 5L$&7K &7JJ 5L$J6J &(KL
6J7$K8 J7$K8 6$&5K &$&5K
5'$JLK 586K 5&$7JJ &&'J 5L$'K( &77L 5L$(&K &(56
7(L$(8 JL$(8 6$58K &$58K
5'$875 5857 5&$L(6 &58' 56$J5& &75( 5L$776 &K(5
(76$87 J6$87 6$57L &$57L
5'$(7& 5(J6 5&$6L6 &57' 56$(7& &L(J 5L$6(L &K&8
J6&$68 J&$68 6$5'7 &$5'7
5'$7J6 5(7J 5&$567 &5'6 56$LJ8 &L5J 5L$'J5 &7K'
5555$J( J5$J( 6$'J5 &$'J5
5'$7LJ 5(LJ 5&$'(K &'J' 56$L&( &L'& 5L$'55 &7L5
5&J5$85 J5$85 6$'8K &$'8K
5'$765 5(L7 5&$'76 &'8L 56$6JJ &6JK 56$J8' &766
5LKJ$(' 8J$(' 6$'57 &$'57
5'$&JJ 5KJ7 55$(7' &'5K 56$'6' &6'J 56$7(' &L6K
5KLJ$'' 8J$'' &$JJ5 5$JJ5
5'$&&' 5K(8 55$KL8 5JJ6 5&$J'( &&85 56$L6L &L'L
58&8$(K 88$(K &$J86 5$J86
5'$5J6 5K(& 55$K56 5J87 5&$8KL &&(5 56$68( &6J6
&''($LL 8($LL &$J6J 5$J6J
5'$'LL 5KL' 55$L&' 5JL5 5&$K65 &&5( 56$5&J &66&
&58K$8& 8K$8& &$J58 5$J58
J$J(6 5K&L 55$6&J 5J&5 5&$7&' &5J5 56$''( &6'L
&6KK$5( 8K$5( &$8JK 5$8JK
J$8JJ 5K'8 55$&66 5J'' 5&$L'L &5K7 5&$8(J &&(L
&7L7$L6 87$L6 &$8(5 5$8(5
J$856 57J' 55$5&& 58(7 5&$&(& &56L 5&$(6L &&L'
&(&L$JJ 8L$JJ &$87( 5$87(
J$(K& 57(J 55$'7( 58K5 5&$5J6 &55K 5&$KL( &&&'
&J'L$6( 8L$6( &$86K 5$86K
J$K8J 57KL 5'$JKL 58L' 5&$'85 &'J5 5&$7&L &5J&
6'8L$'5 8L$'5 &$8&L 5$8&L
J$KL( 5777 5'$J5' 58&8 5&$'5K &'(K 5&$L76 &5(K
6&K6$6J 86$6J &$8'6 5$8'6
J$7(6 576J 5'$85K 58'( 55$J'L &'7' 5&$66' &5L8
6LL&$86 8&$86 &$(8L 5$(8L
J$7'( 57&7 5'$(65 5(8J 55$8'& &'&( 5&$&5J &5&&
6K&&$&6 8&$&6 &$(KL 5$(KL
J$L67 575' 5'$K6J 5(KJ 55$KJ6 &''6 5&$5'' &'J7
68'5$(& 85$(& &$(L( 5$(L(
J$6(6 5LJ( 5'$7K5 5(7& 55$K'' 5J8& 55$JJ8 &'(&
6J85$L5 85$L5 &$(6K 5$(6K
J$66K 5L8J 5'$75L 5(L5 55$7L6 5JKJ 55$J6K &'78
L5K'$J6 8'$J6 &$(&' 5$(&'
J$&(( 5L(( 5'$LL' 5(&7 55$L77 5JLJ 55$8L' &'6K
L6L'$7& 8'$7& &$('K 5$('K
J$&&( 5LK( 5'$6(( 5(55 55$68' 5J6& 55$(78 &'5(
L7&'$'( 8'$'( &$KJ5 5$KJ5
J$5(& 5L77 5'$6'( 5KJK 55$&J( 5J5L 55$KK8 5JJ(
LKJJ$(L (J$(L &$K8' 5$K8'
J$565 5LL( 5'$&7K 5K87 55$&6K 5J'' 55$K'& 5J8&
L8(J$&( (J$&( &$KKL 5$KKL
J$'(6 5L6L 5'$58& 5KKJ 55$5LJ 5885 55$7'( 5JK5
7'7J$'& (J$'& &$K7K 5$K7K
J$'L& 5L&8 5'$5L6 5KK5 55$5'& 58(5 55$L7( 5J7'
7&68$7L (8$7L &$KL' 5$KL'
8$J8& 5L57 5'$'K8 5KL7 55$'56 5875 55$6K' 5J&8
7L58$56 (8$56 &$K&K 5$K&K
8$J65 5L'7 5'$''L 5K65 5'$J6( 586L 55$&(( 5J5'
77J($J7 (($J7 &$K&' 5$K&'
8$J'8 5L'' J$J(7 5K&7 5'$J'6 58&( 55$&L5 5J'5
[] en dL +
45
Q t
solvente[enima
I &J$(7& s
34
L-&-&-4 Determinaci2n de la velocidad inicial de la reacci2n de de+radaci2n enim:tica-
a0 "#todo de un solo punto usando las ecuaciones 54L!
En las .i+uras L-64L-J se presentan los resultados obtenidos al +ra.icar la variaci2n de @
H
en .unci2n
del tiempo para cada una de las distintas soluciones estudiadas$ con cada una de las L ecuaciones
e)ploradas- En todos los casos el valor de @
H
se obtiene dividiendo el valor de "
H
$ obtenido a partir
de la viscosidad intrnseca calculada con cada una de dic,as ecuaciones$ entre el valor de la masa
molar de la unidad repetitiva promedio de la cadena de polmero$ 1ue en este caso es 5K($5 +>e1
/ecuaci2n 5L del ap#ndice &0-
En la tabla L-57 se muestra el resumen de los resultados obtenidos durante el estudio cin#tico de la
reacci2n de de+radaci2n de las distintas soluciones estudiadas- Es importante ,acer notar 1ue los
valores de v
om
representan la velocidad inicial de de+radaci2n$ en unidades repetitivas por mol#cula
1ue se de+radan en un se+undo- Estos valores se obtienen de la pendiente de cada uno de los +r:.icos
@
H
vs tiempo de reacci2n$ para cada de las ecuaciones usadas en la determinaci2n de la viscosidad
intrnseca- Debido a 1ue se obtienen de esta manera$ es preciso multiplicar estos valores de v
om
por la
concentraci2n de la soluci2n de la cual se ori+inan para poder tener un valor de la velocidad total de
la reacci2n a dic,a concentraci2n$ el cual se ,a desi+nado como v
o
* es i+ual a v
o
I c
po
-v
om
-
Como se puede ver en esta tabla$ el valor de v
o
va aumentando a medida 1ue aumenta la
concentraci2n de la soluci2n de polmero$ como se espera$ debido a 1ue cuando ,a* ma*or cantidad
de cadenas en el sistema$ la velocidad de reacci2n es necesariamente ma*or por1ue ,a* m:s puntos
donde la enima puede reaccionar-
35
$abla 9.5:.3 Resultados obtenidos en el estudio cin#tico viscosim#trico de la de+radaci2n enim:tica de
1uitosano usando bromelina- "edio! bu..er :cido ac#tico /'$6'58 "0>acetato de sodio /'$&'58 "0- p< I L$&7-
T I &7 ?C-
c
*

/+ dL
45
0
K
V

inicial
c
*o
/mol dL
45
0
!c. -
om
/ur mol
45
s
45
0
6
-
o
/ur s
45
dL
45
0
-
o
35
/ur
45
se+- dL0
c
*
35
/dL mol
45
0
'$'&J
5J5K
&''K
&'8'
&'88
8$JK7 )5'
48
8$7K( )5'
48
8$&K6 )5'
48
8$&&J )5'
48
8
J
5'
55
'$5J'J
'$&'7(
'$&58'
'$&5JJ
'$JJ(K
'$JJ(K
'$JJ(K
'$JJ(K
5$(55 )5'
48
5$(K& )5'
48
5$8'5 )5'
48
5$85' )5'
48
7$8L6 )5'
(
7$K(7 )5'
(
7$77& )5'
(
7$7&K )5'
(
5$557 )5'
(
5$5K( )5'
(
5$&5' )5'
(
5$&57 )5'
(
'$'L6
587(
5J8K
&'J7
&556
5$688 )5'
4(
5$&K8 )5'
4(
5$&65 )5'
4(
5$&&' )5'
4(
8
J
5'
55
'$5K8&
'$58((
'$&'LL
'$&'8&
'$JJ&L
'$JJ&5
'$JJ58
'$JJ5(
&$667 )5'
48
&$68' )5'
48
&$757 )5'
48
&$7L' )5'
48
L$&86 )5'
(
L$&'& )5'
(
6$J(K )5'
(
6$J6( )5'
(
($&'L )5'
K
($88( )5'
K
8$5&K )5'
K
8$5J( )5'
K
'$'7(
58(&
&'7'
&&'6
&&6(
5$86K )5'
4(
5$K(( )5'
4(
5$7K' )5'
4(
5$76K )5'
4(
8
J
5'
55
'$5757
'$5(K5
'$5J((
'$&'L6
'$JJ88
'$JJ8(
'$JJ8(
'$JJ8(
&$(8& )5'
48
&$J7& )5'
48
6$'87 )5'
48
6$568 )5'
48
6$7J7 )5'
(
6$68( )5'
(
6$&L& )5'
(
6$58( )5'
(
7$LL( )5'
K
7$JK7 )5'
K
K$L'J )5'
K
K$75' )5'
K
'$'(&
587L
&'(8
&&(6
&6&J
&$65K )5'
4(
&$'K( )5'
4(
5$8J' )5'
4(
5$8L7 )5'
4(
8
J
5'
55
'$5L&5
'$5(&'
'$5JJ'
'$&'JL
'$JJL(
'$JJL(
'$JJLK
'$JJLK
6$&J5 )5'
48
6$777 )5'
48
6$(K' )5'
48
6$8K& )5'
48
6$'6J )5'
(
&$856 )5'
(
&$K7J )5'
(
&$78J )5'
(
L$658 )5'
K
L$868 )5'
K
7$&J& )5'
K
7$L&& )5'
K
'$'8K
586K
&5'L
&6L6
&L&L
&$8'8 )5'
4(
&$L7' )5'
4(
&$&'' )5'
4(
&$5&K )5'
4(
8
J
5'
55
'$568K
'$5(6(
'$&'K5
'$&6'&
'$JJ5'
'$JJ'7
'$JJ'&
'$JJ5&
6$8J& )5'
48
L$&77 )5'
48
L$76L )5'
48
L$8J7 )5'
48
&$7KJ )5'
(
&$67' )5'
(
&$&'7 )5'
(
&$'L6 )5'
(
6$7K5 )5'
K
L$'8& )5'
K
L$7L7 )5'
K
L$('6 )5'
K
'$5'5
58(6
&&'K
&7'(
&K6'
6$&5' )5'
4(
&$(&( )5'
4(
&$6JJ )5'
4(
&$&8( )5'
4(
8
J
5'
55
'$5&7K
'$5KL8
'$&'&'
'$&&&&
'$JJL5
'$JJ68
'$JJ6K
'$JJ66
L$'6& )5'
48
L$LJL )5'
48
L$8LK )5'
48
7$'8& )5'
48
&$L8' )5'
(
&$&&7 )5'
(
&$'KL )5'
(
5$JK8 )5'
(
6$557 )5'
K
6$KK( )5'
K
L$5KJ )5'
K
L$6(& )5'
K
'$557
58J(
&&JL
&KK5
&86K
6$K&6 )5'
4(
&$JJK )5'
4(
&$786 )5'
4(
&$L&L )5'
4(
8
J
5'
55
'$5&J8
'$5(((
'$&5K(
'$&76(
'$JJ7K
'$J877
'$JJ'6
'$JJ76
L$('6 )5'
48
7$6&7 )5'
48
7$7J( )5'
48
K$57' )5'
48
&$5&K )5'
(
5$8(8 )5'
(
5$(8( )5'
(
5$K&K )5'
(
&$(K' )5'
K
6$66( )5'
K
6$8(& )5'
K
L$5&7 )5'
K
36
@ig. 9.7.3 Gra.ico de @H versus t reacci2n para la de+radaci2n enim:tica de la soluci2n de 1uitosano a cp I '$'&J /+-dL
45
0 Bano /\Q50 Bolomon *
Cuita /]Q&0 Deb * C,atterjee /^Q60 Ram * Gaseen /_QL0
37
@ig. 9.9.3 Gra.ico de @H versus t reacci2n para la de+radaci2n enim:tica de la soluci2n de 1uitosano a cp I '$'L6 /+-dL
45
38
@ig. 9.:.3 Gra.ico de @H versus t reacci2n para la de+radaci2n enim:tica de la soluci2n de 1uitosano a cp I '$'7( /+-dL
45
39
@ig. 9.;.3 Gra.ico de @H versus t reacci2n para la de+radaci2n enim:tica de la soluci2n de 1uitosano a cp I '$'(& /+-dL
45
40
@ig. 9.<.3 Gra.ico de @H versus t reacci2n para la de+radaci2n enim:tica de la soluci2n de 1uitosano a cp I '$'8K /+-dL
45
41
@ig. 9.A.3 Gra.ico de @H versus t reacci2n para la de+radaci2n enim:tica de la soluci2n de 1uitosano a cp I '$5'5 /+-dL
45
42
@ig. 9.B.3 Gra.ico de @H versus t reacci2n para la de+radaci2n enim:tica de la soluci2n de 1uitosano a cp I '$557 /+-dL
45
0 Bano /\Q 50 Bolomon *
Cuita /]Q &0 Deb * C,atterjee /^Q 60 Ram * Gaseen /_Q L0
43
b0 "#todo iterativo usando la ecuaci2n de <u++ins!
Usando un proceso iterativo basado en la ecuaci2n de <u++ins /ecuaci2n si+uiente0 para el c:lculo de
la viscosidad intrnseca punto a punto$ se pueden determinar valores instant:neos de @
H
a lo lar+o del
proceso de de+radaci2n enim:tica- Una ve obtenido el valor de la viscosidad intrnseca de cada
punto se calcula el valor de "
H
* @
H
como se describi2 en la parte L-&-5-
Para la determinaci2n de la viscosidad intrnseca en cada punto se coloca la ecuaci2n de <u++ins de la
si+uiente manera!
[] L
s*
Gc
*o
3 J
2
[]
6
c
*o
* se le dan valores a [] del lado i1uierdo de la ecuaci2n anterior /los valores de
sp
$ ;
<
* c
po
son
conocidos0 ,asta 1ue se obten+a un valor i+ual en el lado derec,o- El valor as encontrado corresponde
a la viscosidad intrnseca del sistema en las condiciones estudiadas- Los valores de [] * @
H
as
obtenidos se muestran en las tablas L-574L-&5-
Los +r:.icos de @
H
/obtenidos de la manera e)plicada anteriormente0 vs el tiempo de la reacci2n de
de+radaci2n enim:tica se muestran en las .i+uras L-5'4L-5K$ para cada una de las soluciones
estudiadas-
Los valores obtenidos por #ste m#todo para las velocidades iniciales de la de+radaci2n enim:tica se
presentan en la tabla L-&&-
$abla 9.5:.3 Halores de [] * @
H
obtenidos mediante
el proceso iterativo con la ecuaci2n de <u++ins para la
soluci2n de concentraci2n '$'&J +-dL
45
t reaccin
/s0
Valor de
[]
ensa(ado
[]
/dL +
45
0
K
V
/ur0
'$'' 55$5L665(6 55$5L665(6 58(J
5K'$K7 5'$J&6'K5( 5'$J&6'K58 5865
6L'$L7 5'$(L(L7(L 5'$(L(L7(L 5(J&
7&'$6' 5'$K57&8L( 5'$K57&8L8 5(K6
(''$5L 5'$L(687&K 5'$L(687&( 5(6&
8(J$J' 5'$&K'8&(7 5'$&K'8&(7 5K8K
5'7J$(K 5'$56J5865 5'$5675''8 5KK'
5&6J$K' J$JJ6'LL6 J$JJ6'LLL 5K&8
5L5J$L6 J$8L'7L8J J$8L'7L8J 57JK
57JJ$65 J$(6&7(67 J$(6&7(6K 57(6
5((J$5( J$K'K&7&6 J$K'K&7&L 57LK
5J7J$'K J$7'K(66K J$7'K(66K 57&7
y = -0,1726x + 1849,5
R
2
= 0,9943
1000
1500
2000
2500
0 500 1000 1500 2000 2500
t reaccin (s)
X
n
@ig. 9.5C.3 Gr:.ico de @H versus t reacci2n para la
de+radaci2n enim:tica de 1uitosano con bromelina
obtenidos con los datos de la tabla L-57-
44
$abla 9.5;.3 Halores de [] * @
H
obtenidos mediante
el proceso iterativo con la ecuaci2n de <u++ins para la
soluci2n de concentraci2n '$'L6 +-dL
45
t reaccin
/s0
Valor de
[]
ensa(ado
[]
/dL +
45
0
K
V
/ur0
'$'' 5'$8J6'&(J 5'$8J6'&(J 58&L
5K($'& 5'$(8585'& 5'$(8585'6 58''
6LK$(5 5'$K&''&'8 5'$K&''&'8 5(KL
7&K$&J 5'$6JJ75JL 5'$6JJ75JL 5(5K
('K$'7 5'$&(&86L8 5'$&(&86LJ 5K8J
887$(& 5'$'J(8&'' 5'$'J(85(6 5K75
5'K7$7& J$JJ5&(K6 J$JJ5&(KL 5K&8
5&L7$66 J$88J(&86 J$88J(&86 5K'(
5L&7$'J J$(K'J8(8 J$(K'J8(J 57(J
5K'L$8L J$K&K65J( J$K&K65J8 5775
5(8L$K6 J$75&(L88 J$75&(L88 57&(
5JKL$L8 J$L656(&K J$L656(&( 57'J
y = -0,1663x + 1815,1
R
2
= 0,9922
1000
1500
2000
2500
0 500 1000 1500 2000 2500
t reaccin (s)
X
n
@ig. 9.55.3 Gr:.ico de @H versus t reacci2n para la
obtenidos con los datos de la tabla L-5K
$abla 9.5<.3 Halores de [] * @
H
obtenidos mediante
el proceso iterativo con la ecuaci2n de <u++ins para
la soluci2n de concentraci2n '$'7( +-dL
45
t reaccin
/s0
Valor de
[]
ensa(ado
[]
/dL +
45
0
K
V
/ur0
'$'' 55$'58L('& 55$'58L('6 587&
5(L$68 5'$85L(6'6 5'$85L(6'L 58'(
67L$'5 5'$K8LL'6K 5'$K8LL'6( 5((J
766$7J 5'$767KJK8 5'$767KJK8 5(LK
(56$&( 5'$L&586J8 5'$L&586J8 5(&5
8J&$JK 5'$655'(7L 5'$655'(7L 5KJ(
5'(&$K' 5'$5858K66 5'$5858K66 5KKJ
5&7&$5J 5'$'66J656 5'$'66J65L 5K6(
5L65$8J J$J&75788 J$J&75788 5K5L
5K55$KK J$8L5L7JL J$8L5L7JL 57JK
5(J5$LJ J$((JL&5K J$((JL&5K 5786
5J(5$6' J$('JJ'J8 J$('JJ'J8 57K8
y = -0,149x + 1829,4
R
2
= 0,9973
1000
1500
2000
2500
0 500 1000 1500 2000 2500
t reaccin (s)
X
n
obtenidos con los datos de la tabla L-5(
45
$abla 9.5A.3 Halores de [] * @
H
obtenidos mediante
la soluci2n de concentraci2n '$'(& +-dL
45
t reaccin
/s0
Valor de
[]
ensa(ado
[]
/dL +
45
0
K
V
/ur0
'$'' 55$'&JJ5&7 55$'&JJ5&7 5877
58&$7' 5'$8&6L'(L 5'$8&6L'(L 58'J
6K&$&' 5'$(LKK78' 5'$(LKK785 5(J&
7L5$K6 5'$K''5LK7 5'$K''5LKK 5(K'
(&5$5& 5'$LK8&85J 5'$LK8&8&' 5(65
J''$K6 5'$6L'88K( 5'$6L'88K( 5('L
5'8'$&7 5'$&L5K'JK 5'$&L5K'JK 5K8&
5&7J$JJ 5'$5(6L68' 5'$5(6L685 5KK8
5L6J$L6 5'$'&7J&5L 5'$'&7J&57 5K6K
5K5J$5( J$J7(5'JL J$J7(5'JL 5K&5
5(J8$8J J$88&((&K J$88&((&K 5K'7
5J(8$6L J$(6K'LK& J$(6K'LK& 57(L
y = -0,1391x + 1835,6
R
2
= 0,9935
1000
1500
2000
2500
0 500 1000 1500 2000 2500
t reaccin (s)
X
n
obtenidos con los datos de la tabla L-58
$abla 9.5B.3 Halores de [] * @
H
obtenidos mediante
la soluci2n de concentraci2n '$'8K +-dL
45
t reaccin
/s0
Valor de
[]
ensa(ado
[]
/dL +
45
0
K
V
/ur0
'$'' 55$'7L7JL( 55$'7L7JL8 58K'
5J5$L7 5'$8L6L7JJ 5'$8L6L7L8 585L
6('$KJ 5'$KJL(L6& 5'$KJL(L66 5(85
7LJ$(K 5'$75567L7 5'$75567L7 5(L5
(&J$6K 5'$L65JJ5& 5'$L65JJ5& 5(&L
J'8$KJ 5'$&J86J'' 5'$&J86J'' 5KJ7
5'88$56 5'$58K'(58 5'$58K'(5J 5K('
5&K($76 5'$'K7'K5' 5'$'K7'K55 5KLL
5LL($5& J$J85JK7( J$J85JK78 5K&K
5K&K$(J J$J5L8L&L J$J5L8L&7 5K5&
58'K$&7 J$8'L766L J$8'L7667 5788
5J87$88 J$(&8K'JK J$(&8K'J( 57(&
y = -0,1483x + 1833,2
R
2
= 0,9906
1000
1500
2000
2500
0 500 1000 1500 2000 2500
t reaccin (s)
X
n
obtenidos con los datos de la tabla L-5J
46
$abla 9.6C.3 Halores de [] * @
H
obtenidos
mediante el proceso iterativo con la ecuaci2n de
<u++ins para la soluci2n de concentraci2n '$5'5
+-dL
45
t reaccin
/s0
Valor de
[]
ensa(ado
[]
/dL +
45
0
K
V
/ur0
'$'' 55$68&K6&K 55$68&K6&( 5J66
&'6$&L 55$5KJJ8L& 55$5KJJ8L6 588K
68&$K' 55$'(&7J5K 55$'(&7J5K 58KL
7K5$77 5'$J55(8J7 5'$J55(8J7 58&J
(L'$(6 5'$(8765L8 5'$(8765LJ 58'5
J&'$'6 5'$K(K(5L( 5'$K(K(5LK 5(((
5'JJ$7' 5'$7JL'JL& 5'$7JL'JL& 5(7J
5&(8$(7 5'$L(K788& 5'$L(K788& 5(66
5L78$55 5'$6(7(K5' 5'$6(7(K55 5(55
5K6($K8 5'$6'((&KL 5'$6'((&KL 5KJ(
585($'8 5'$&5&6J(K 5'$&5&6J(( 5K(K
5JJK$7( 5'$565'''& 5'$565'''& 5K78
y = -0,14x + 1911,2
R
2
= 0,9938
1000
1500
2000
2500
0 500 1000 1500 2000 2500
t reaccin (s)
X
n
@ig. 9.5:3 Gr:.ico de @H versus t reacci2n para la
obtenidos con los datos de la tabla L-&'
$abla 9.65.3 Halores de [] * @
H
obtenidos
mediante el proceso iterativo con la ecuaci2n de
<u++ins para la soluci2n de concentraci2n '$557
+-dL
45
t reaccin
/s0
Valor de
[]
ensa(ado
[]
/dL +
45
0
K
V
/ur0
'$'' 55$K(5LJ&K 55$K(5LJ&( 5JJ8
&5K$(J 55$L8KJ8L7 55$L8KJ8LK 5J7K
6J7$K8 55$67&'657 55$67&'65K 5J&K
7(L$(8 55$&L5J5J( 55$&L5J5J8 5J'&
(76$87 55$5&(L(78 55$5&(L(7J 58(K
J6&$68 5'$JL75(J( 5'$JL75(J( 586K
5555$J( 5'$8JL'&67 5'$8JL'&6K 58&7
5&J5$85 5'$8(L'&&( 5'$8(L'&&8 58&'
5LKJ$(' 5'$K'8&KL8 5'$K'8&KLJ 5(K&
5KLJ$'' 5'$75J&K5( 5'$75J&K58 5(L6
58&8$(K 5'$L88KL8L 5'$L88KL8L 5(6K
&''($LL 5'$65J6KK( 5'$65J6KK( 5KJJ
y = -0,1415x + 1984,3
R
2
= 0,9893
1000
1500
2000
2500
0 500 1000 1500 2000 2500
t reaccin (s)
X
n
@ig. 9.5;.3 Gr:.ico de @H versus t reacci2n para la
obtenidos con los datos de la tabla L-&5-
47
$abla 9.66.3 Resumen de los resultados obtenidos durante el estudio cin#tico usando la viscosidad intrnseca
calculada mediante un proceso iterativo de la ecuaci2n de <u++ins-
c
*o
/mol dL
45
0
-
om
/ur mol
45
s
45
0
6
-
o
/ur dL
45
s
45
0
-
o
35
/ur
45
dL s0
c
*o
35
/dL mol
45
0
J$5LL )5'
48
'$5(&K '$JJL6 5$7(8 )5'
48
K$66K )5'
(
5$'JLE['(
5$L5L )5'
4(
'$5KK6 '$JJ&& &$67& )5'
48
L$&7& )5'
(
($'(&E['K
5$87K )5'
4(
'$5LJ' '$JJ(6 &$(K7 )5'
48
6$K5( )5'
(
7$68JE['K
&$65K )5'
4(
'$56J5 '$JJ67 6$&&& )5'
48
6$5'L )5'
(
L$65(E['K
&$((& )5'
4(
'$5L86 '$JJ'K L$55' )5'
48
&$L66 )5'
(
6$K'8E['K
6$555 )5'
4(
'$5L'' '$JJ68 L$67K )5'
48
&$&JK )5'
(
6$&5LE['K
6$LL& )5'
4(
'$5L57 '$J8J6 L$8(' )5'
48
&$'7L )5'
(
&$J'KE['K
L-&-6-4 Determinaci2n de las constantes de "ic,aelis4"enten
En las .i+uras L-5(4L-&' se muestran los +r:.icos de 5>v
o
vs 5>c
po
/representaci2n de LineAeaver49ur;
o de dobles recprocos [555]0 para cada conjunto de datos obtenidos utiliando las ecuaciones de Bano)
Bolomon4Ciuta$ Deb4C,atterjee$ Ram4Gaseen$ respectivamente- La .i+ura L-&5 muestra el mismo tipo
de +r:.ico para el conjunto de datos obtenidos usando el proceso iterativo con la ecuaci2n de <u++ins-
Como puede apreciarse el comportamiento obtenido es lineal en todas las +r:.icas- En esta
representaci2n$ el corte con el eje de las ordenadas es el reciproco de la velocidad m:)ima /H
ma)
0$
representando este valor la m:)ima velocidad a la cual la enima va a reaccionar con el sustrato$ es
decir$ puede interpretarse 1ue dic,o valor sera la velocidad inicial de la reacci2n cuando la
concentraci2n del sustrato se ,ace in.inita [556]-
Por su parte$ la pendiente de los +r:.icos representa el cociente entre la constante de "ic,aelis4"enten
/;
"
0 * H
ma)
- El valor de ;
"
cuanti.ica la a.inidad 1ue presenta el sustrato por el sitio activo de la
enima *$ en t#rminos pr:cticos$ es i+ual a la concentraci2n de sustrato donde la velocidad inicial de la
reacci2n es la mitad de la velocidad m:)ima [556]-
48
49
@ig. 9.5<.3 Representaci2n de LineAeaver49ur; para los datos obtenidos en los estudios de de+radaci2n enim:tica del 1uitosano con bromelina$
usando los valores de [] obtenidos instant:neamente con la ecuaci2n de Bano
50
@ig. 9.5A.3 Representaci2n de LineAeaver49ur; para los datos obtenidos en los estudios de de+radaci2n enim:tica del 1uitosano con bromelina$
usando los valores de [] obtenidos instant:neamente con la ecuaci2n de Bolomon * Ciuta-
51
@ig. 9.5B.3 Representaci2n de LineAeaver49ur; para los datos obtenidos en los estudios de de+radaci2n enim:tica del 1uitosano con bromelina$
usando los valores de [] obtenidos instant:neamente con la ecuaci2n de Deb * C,atterjee-
52
@ig. 9.6C.3 Representaci2n de LineAeaver49ur; para los datos obtenidos en los estudios de de+radaci2n enim:tica del 1uitosano con bromelina$
usando los valores de [] obtenidos instant:neamente con la ecuaci2n de Ram4Gaseen
53
@ig. 9.65.3 Representaci2n de LineAeaver49ur; para los datos obtenidos en los estudios de de+radaci2n enim:tica del 1uitosano con bromelina$
usando los valores de [] obtenidos instant:neamente con el proceso iterativo de la ecuaci2n de <u++ins-
54
Los valores de ;
"
* H
ma)
obtenidos utiliando las diversas ecuaciones para determinar valores
instant:neos de [] est:n reportados en la tabla L-&6- Como puede apreciarse en #sta$ los resultados
obtenidos usando las ecuaciones de Bano$ Bolomon4Ciuta$ Deb4C,artterjee * <u++ins muestran una
buena con correlaci2n de sus puntos /R
&
` '$JJ5(0Q por su parte$ los resultados obtenidos utiliando la
ecuaci2n de Ram4Gaseen mostraron la peor correlaci2n /R
&
I '$J8K60$ adem:s de 1ue en el +r:.ico de
estos datos el intercepto con el eje O*P ocurre a valores ne+ativos del eje- Este Fltimo ,ec,o trae como
consecuencia 1ue los valores de ;
"
* H
ma)
obtenidos con estos datos sean ne+ativos$ con lo cual no
tienen si+ni.icado .sico * son desec,ados para cual1uier otro an:lisis-
$abla 9.67.3 Datos cin#ticos para la de+radaci2n del 1uitosano con bromelina
!cuacin +endiente
/mol s ur
45
0
"nterce*to
/ur
45
dL s0
6
.
m
/mol dL
45
0
V
ma8
/mol s
45
m+
45
0
Bano L$66JK 5$'J )5'
(
'$JJ65 6$J(( )5'
4(
J$KK )5'
4K
Bolomon4Ciuta L$LKJJ 7$(& )5'
K
'$JJ5( ($85( )5'
4(
5$8LL )5'
47
Deb4C,atterjee L$757& 5$J8 )5'
K
'$JJ&7 &$&86 )5'
4K
7$665 )5'
47
Ram4Gaseen L$(7( 45$'87 )5'
55
'$J8K6 4 L$686 )5'
455
4J$(5L )5'
45'
<u++ins 7$5((L K$J6 )5'
K
'$JJ&J ($LKK )5'
4(
5$7&' )5'
47
Los resultados 1ue mostraron una mejor correlaci2n /R
&
I '$JJ650 .ueron los obtenidos usando la
ecuaci2n de Bano para el c:lculo de valores instant:neos de []$ siendo esta la ecuaci2n 1ue tambi#n
present2 la menor dispersi2n de los resultados en la determinaci2n de un valor promedio del peso
molecular viscoso /5$7 Z$ tabla L-K0- Esta ecuaci2n ,a sido usada en estudios similares de
de+radaci2n de polmeros por m#todos viscosim#tricos [5C: ( 5C;]-
Mtra aspecto importante para considerar 1ue la ecuaci2n de Bano es$ de las ecuaciones ensa*adas$ la
ecuaci2n 1ue produce mejores resultados en los valores de [] determinados de las mediciones
instant:neas de []$ * por ende$ mejores resultados de los valores de la velocidad inicial de
de+radaci2n para cada una de las soluciones estudiadas$ es el ,ec,o de 1ue las concentraciones
estudiadas caen completamente en el intervalo de concentraciones 1ue de.inen la ona lineal del
+r:.ico v
o
vs c
po
[556]$ como puede apreciarse en la .i+ura L-&&- En este +r:.ico los puntos representan
los valores obtenidos e)perimentalmente * la lnea continua se es la representaci2n de la ecuaci2n de
"ic,aelis4"enten para este sistema$ simulada a partir de los valores de ;
"
* H
ma)
obtenidos
e)perimentalmente usando la ecuaci2n 5 para determinar los valores instant:neos de []-
v
o
I H
ma)
c
po
>/;
"
[c
po
0
Los +r:.icos de v
o
vs c
po
obtenidos con los datos recabados de las otras ecuaciones se muestran en las
.i+uras L-&64L-&7- To se inclu*e el +r:.ico obtenido con los datos recabados de la ecuaci2n de Ram4
Gaseen debido a 1ue los valores ne+ativos obtenidos para ;
"
* H
ma)
no tienen si+ni.icado .sico$ como
se mencion2 previamente-
55
@ig. 9.66.3 Representaci2n +ra.ica de v
o
vs c
po
/ecuaci2n de "ic,aelis4"enten0Q /\0 datos e)perimentales
obtenidos usando la ecuaci2n de Bano para determinar valores instant:neos de []-
o
vs c
po
obtenidos usando la ecuaci2n de <u++ins para determinar valores instant:neos de []-
56
o
vs c
po
/modelo "ic,aelis4"enten0Q /\0 datos e)perimentales
obtenidos con la ecuaci2n de Deb4C,atterjee para determinar valores instant:neos de []-
@ig. 9.6:.3 Representaci2n +ra.ica de v
o
vs c
po
obtenidos usando la ecuaci2n de Bolomon4Ciuta para determinar valores instant:neos de []-
57
L-&-7-4 Depolimeriaci2n de la cadena de 1uitosano con enimas ,idrolticas
Los resultados precedentes$ especialmente los obtenidos utiliando las ecuaciones de Bano * <u++ins
para obtener valores instant:neos de []$ muestran$ sin lu+ar a dudas$ 1ue la de+radaci2n del 1uitosano
estudiado$ con la bromelina utiliada$ si+ue claramente una cin#tica de "ic,aelis4"enten- Esta
cin#tica ,a sido propuesta por varios autores para la de+radaci2n de otras muestras de 1uitosano$
usando distintas ,idrolasas- En la tabla si+uiente se presentan al+unos par:metros cin#ticos obtenidos
por dic,os autores * se comparan con los valores obtenidos en este trabajo- Los valores entre
par#ntesis se presentan tal como ,an sido reportados por los autores * los valores en ne+rita son las
conversiones de #stos a las unidades usadas en el presenta trabajo$ para una mejor comparaci2n-
!nzima &ustrato *2 $
HMCD
.m Vma8 e=.
<idrolasa
puri.icada de la
bromelina
comercial
6-' 7' /'-'88 Z0
C.CAA g.dl
35
/6-7' amol GlcT>min>m+0
:.A785C
3A
mol. s
35
.mg
35
[65]
Papaina
puri.icada de
una muestra
comercial
Quitosano /"A (5;Da$
DD '$(L0 preparado de
la 1uitina obtenida de las
conc,as de camar2n0
6-7 6( /(-5L m+-ml
45
D
C.<59 g.dl
35
/&88-L8nmoles-min
45
-m+
45
0
9.AC<85C
3B
mol. s
35
.mg
35
[55B]
Pronasa
obtenida de
Btreptom*ces
+riseus
Quitosano commercial 6-7 6( /7-&5 m+ -ml
45
0
C.:65 g.dl
35
/5-68 nmoles-min
45
-m+
45
0
6.7CB85C3B mol. s35.mg35
[56C]
<idrolasa
puri.icada de
la celulasa
comercial
Quitosano comercial /"A
7K' ;Da$ DD '$J'0
7-& K' /'-5' m+>ml0
C.C5 g.dl
35
/'-L'& mol- min
45
m+
45
0
;.<85C3B mol .s
35
mg
35
[5<]
Quitosanasa
proveniente de
9acillus sp-
Quitosano /DD b '$(J80 7$7 6( /'$7& m+-ml
45
0
C)C:6 g dl
35
/($(5)5'
4K
mol-s
45
m+
45
0 [5A]
9romelina
comercial
Quitosano comercial /"
65' ;Da$ DD '$870
L$&7 &7 C.56 g.dl
35
B);;85C
3;
mol. s
35
mg
35
cste trabajo
De acuerdo con estos resultados la de+radaci2n enim:tica inicial del 1uitosano por la bromelina
pareciera se+uir un mecanismo de reacci2n similar al 1ue ,a sido demostrado para el polisac:rido
alternante R/54L0 :cido T4acetilmur:mico /TA"0 a T4acetil+lucosamina /TAG0 con lisoima de clara
de ,uevo$ el cual$ es llamado mecanismo de P,illips-
Tanto en el mecanismo de P,illips$ como en otros estudios descritos en la literatura consultada$ se
presume 1ue uno de los .actores determinantes en la de+radaci2n enim:tica del 1uitosano es la
presencia de unidades acetiladas en la cadena del polmero [56) 5A) 5B)565]$ es decir$ en muestras de
1uitosano 1ue no presente unidades acetiladas la reacci2n de ,idr2lisis enim:tica no se produceQ
mientras 1ue en muestras con +rado de acetilaci2n bajo la velocidad de reacci2n es mu* lenta-
58
:.3 Conclusiones
Be desarroll2 un m#todo e)perimental para el estudio cin#tico de la depolimeriaci2n enim:tica del
1uitosano bas:ndose s2lo en medidas viscosim#tricas- Be estudiaron dos procedimientos en los cuales
se determina la viscosidad intrnseca del biopolmero en la medida 1ue #sta va cambiando! /a0 m#todo
de un solo punto$ para el cual se ensa*aron cuatro ecuaciones reportadas en la literatura * /b0 m#todo
iterativo usando la ecuaci2n de <u++ins$ * sus respectivos par:metros$ determinados previamente- Los
mejores resultados .ueron obtenidos cuando se utili2 el m#todo de un solo punto$ empleando la
ecuaci2n de Bano para calcular los valores de la viscosidad intrnseca-
"ediante el m#todo desarrollado se demostr2 1ue la enima proteoltica no espec.ica bromelina
presenta actividad 1uitosanolitica$ lo+r:ndose cuanti.icar dic,a actividad$ en las condiciones
estudiadas$ mediante los si+uientes valores!
o
Constante de "ic,aelis4"enten I ;
"
I 6$J(( )5'
4(
mol>dL
o
Helocidad m:)ima I H
ma)
I J$KK )5'
4K
mol>s m+
59
;.3 ecomendaciones
La culminaci2n e)itosa del presente trabajo ,a planteado nuevas interro+antes cu*as respuestas
pudiera ser abordada con estudios m:s pro.undos del sistema estudiado- Al+unas pocas de ellas son!
dEs similar el mecanismo de acci2n de la bromelina sobre el 1uitosano al propuesto para la

lisoima en la de+radaci2n del TA"e Un estudio sobre el mecanismo de reacci2n de la enima
/bromelina0 con el 1uitosano por medio de
5
<4R"T *
56
C4R"T$ in situ$ podra ser abordado-
dC2mo es la to)icidad 1ue pudiesen presentar los oli+osac:ridos obtenidos en esta
depolimeriaci2ne
En el presente caso dlle+an a ser m:s e.ectivos como bactericidas los productos de la
de+radaci2n con bromelinae Un estudio de esta naturalea es necesario en virtud de 1ue tanto
el 1uitosano como la bromelina son materiales biode+radables * de relativamente .:cil acceso-
60
:.3 Bibliogra=,a
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5
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c,itosanase .rom strectom*ces sp- T5(LP- Bioc'em. 0.) 655$ 6((4686 /5JJ70-
69
A*>ndice 5. !nsa(os *reliminares realizados
!8*eriencia 5. Degradacin enzimtica con *a*a,na.
Be realiaron$ en di.erentes condiciones e)perimentales$ estudios de la disminuci2n de la viscosidad de
una soluci2n de 1uitosano por acci2n de una soluci2n de enima papaina-
3btencin y preparacin de la solucin de en#ima! la enima .ue obtenida mediante la lio.iliaci2n del
l1uido lec,oso 1ue se separa en los cortes realiados sobre la super.icie de tres lec,oas verdes$
tambi#n llamado l:te) de la lec,oa- Posteriormente$ del polvo lio.iliado se prepararon dos
soluciones de di.erente concentraci2n!
Boluci2n E5! 5$' +>dL
Boluci2n E&! '$7 +>dL
Ambas soluciones de enima se prepararon disolviendo una cantidad pesada de la enima en una
soluci2n acuosa de EDTA al 5)5'
4&
mol>L-
Soluciones de 0uitosano! la soluci2n matri de 1uitosano .ue preparada pesando '$&'7' + del
biopolmero * se llevaron a un volumen .inal de &'' mL con una soluci2n acuosa de :cido clor,drico
a K$'8)5'
47
"-
Estudios viscosim.tricos! de la soluci2n matri de polmero se toma una alcuota de 5' mL$ la cual se
coloca dentro del viscosmetro capilar * se procede a re+istrar los tiempos de cadaQ posteriormente$
lue+o de a3adir & mL de la soluci2n de papana /E5 o E&0 se determinan los tiempos de cada de la
soluci2n para di.erentes tiempos de reacci2n-
Estudios a di.erentes temperaturas de reacci2n * concentraci2n de 1uitosano pero concentraci2n de
papana constante!
De la soluci2n matri de 1uitosano /concentraci2n '$5'&7 +>dL0 se tomaron 5' mL * se colocaron
dentro del viscosmetro$ el cual estaba termost:tiado a una temperatura espec.ica /57?C$ &'?C$ &7?C$
67?C * L7?C0 * se midi2 el tiempo de cada de dic,a soluci2n- Be+uidamente$ se a+re+aron & mL de la
soluci2n de enima /E5 o E&0 * se procedieron a re+istrar los tiempos de cada de la soluci2n a trav#s
del tiempo de la reacci2n- Los datos obtenidos se presentan en las .i+uras A54A7 para la concentraci2n
de enima 5)5'
4&
+>dL * AK4A5' para la concentraci2n de enima '$7)5'
4&
+>dL-
70
$abla A5.3 Datos * resultados obtenidos para la disminuci2n de la viscosidad de una soluci2n de 1uitosano /cp I
8$7L )5'
4&
+>dL0 a 57 ?C-
t
reaccin
t
elucin

rel

s*
5GLn
rel
PViscosidad
'$'' 5K5$K7 7$&7& L$&7& '$K6' 5''$''
&L($'7 5&($'7 L$5&8 6$5&8 '$('7 (6$7K
L8&$85 5&&$85 L$5&8 &$JJ' '$(&6 ('$6&
(5J$J( 55J$J( 6$JJ' &$8J8 '$(67 K8$57
6'7'$66 55'$66 6$8J8 &$787 '$(86 K'$(J
6&8J$&J 5'J$&J 6$787 &$775 '$(8J 7J$JJ
67&8$66 5'8$66 6$775 &$7&' '$(J7 7J$&K
L8L7$J8 5'7$J8 6$7&' &$LLL '$8'J 7($LK
75L7$8L 5'7$8L 6$LLL &$L6J '$85' 7($67
7LL7$65 5'7$65 6$L6J &$L&& '$856 7K$J7
(&LL$88 5'L$88 6$L&& &$L'8 '$85K 7K$K&
(7LL$86 5'L$86 6$L'8 &$L'K '$85K 7K$78
(8LL$&' 5'L$&' 6$L'K &$68K '$8&' 7K$5'
5'(8&$5K 5'&$5K 6$68K &$65J '$866 7L$7L
55'&&$57 5'&$57 6$65J &$65J '$86L 7L$7L
55&K&$5' 5'&$5' 6$65J &$658 '$86L 7L$7'
5LK8'$(7 5''$(7 6$658 &$&(L '$8L6 76$L(
5LJ&5$'K 5''$L8 6$&(L &$&K7 '$8L7 76$&K
575K'$J8 5''$'K 6$&K7 &$&75 '$8L8 7&$JL
5(J5J$J( JJ$J( 6$&75 &$&L8 '$8LJ 7&$8(
5857J$J6 JJ$J7 6$&L8 &$&L8 '$8LJ 7&$87
586JJ$J7 JJ$J6 6$&L8 6$5&8 '$('7 7&$8L
t
solvente[enima
I 6'$(8 s
@ig. A5.3Gr:.ico de la variaci2n del porcentaje de viscosidad versus el tiempo de de+radaci2n de una soluci2n
de 1uitosano con papaina /5)5'
4&
+>dL0 a 57 ?C-
71
8$7L )5'
4&
+>dL0 a &' ?C-
t
reaccin
t
elucin

rel

s*
5GLn
rel
PViscosidad
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('&$'K 5'&$'K 6$76J &$76J '$(J5 ('$7L
555J$K5 JJ$K5 6$L7L &$L7L '$8'( K8$58
567($'7 J($'7 6$6K7 &$6K7 '$8&L K7$(5
57JK$65 JK$65 6$66J &$66J '$8&J K7$''
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&&7L$'6 JL$'6 6$&K' &$&K' '$8LK K&$8'
&LJL$'5 JL$'5 6$&K' &$&K' '$8LK K&$(8
6855$JK J5$JK 6$58J &$58J '$8K& K'$85
L'75$8J J5$8J 6$58K &$58K '$8K6 K'$(L
L&J'$7K J'$7K 6$5L' &$5L' '$8(L 7J$LK
(L'8$&K 88$&K 6$'K' &$'K' '$8JL 7($&L
(KL($&L 8($&L 6$'&7 &$'&7 '$J'6 7K$&K
(88K$6' 8K$6' &$JJ& 5$JJ& '$J5& 77$6K
55''7$L5 87$L5 &$JK& 5$JK& '$J&5 7L$7'
55&L7$&& 87$&& &$J77 5$J77 '$J&6 7L$6&
55L8L$J7 8L$J7 &$JLK 5$JLK '$J&K 7L$'K
58&'6$K( 86$K( &$J'5 5$J'5 '$J6J 7&$8&
58LL6$58 86$58 &$88L 5$88L '$JLL 7&$67
58K86$'5 86$'5 &$8(8 5$8(8 '$JLK 7&$5J
t
solvente[enima
I &8$8L s
@ig. A6.3 Gr:.ico de la variaci2n del porcentaje de viscosidad versus el tiempo de de+radaci2n de una soluci2n
4&
+>dL0 a &' ?C-
72
8$7L )5'
4&
+>dL0 a &7 ?C-
t
reaccin
t
elucin

rel

s*
5GLn
rel
PViscosidad
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&57$'6 J7$'6 6$('7 &$('7 '$(KL K7$76
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55'7$8& 87$8& 6$6LK &$6LK '$8&8 7K$86
56L7$56 87$56 6$65J &$65J '$86L 7K$58
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solvente[enima
I &7$K7 s
4&
+>dL0 a &7 ?C-
73
8$7L )5'
4&
+>dL0 a 67 ?C-
t
reaccin
t
elucin

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5GLn
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PViscosidad
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58K77$'8 77$'8 &$7J' 5$7J' 5$'75 L7$6L
t
solvente[enima
I &5$&( s
4&
+>dL0 a 67 ?C-
74
$abla A:.3 Datos * resultados obtenidos para la disminuci2n de la viscosidad de una soluci2n de 1uitosano /cp I
8$7L )5'
4&
+>dL0 a L7 ?C-
t
reaccin
t
elucin

rel

s*
5GLn
rel
PViscosidad
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6(K($6J L($6J &$7J8 5$7J8 5$'L( 76$J8
L''($6' L($6' &$7J6 5$7J6 5$'LJ 76$85
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58KL6$7( L6$7( &$68J 5$68J 5$5L8 LK$J5
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solvente[enima
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@ig. A:.3 Gr:.ico de la variaci2n del porcentaje de viscosidad versus el tiempo de de+radaci2n de una soluci2n
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75
$abla A;.3 Datos * resultados obtenidos para la disminuci2n de la viscosidad de una soluci2n de 1uitosano /cp I
8$7L )5'
4&
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t
elucin

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PViscosidad
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@ig. A;.3 Gr:.ico de la variaci2n del porcentaje de viscosidad versus el tiempo de de+radaci2n de una soluci2n
de 1uitosano con papaina /'$7)5'
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76
$abla A<.3 Datos * resultados obtenidos para la disminuci2n de la viscosidad de una soluci2n de 1uitosano /cp I
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PViscosidad
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solvente[enima
I 65$6( s
@ig. A<.3 Gr:.ico de la variaci2n del porcentaje de viscosidad versus el tiempo de de+radaci2n de una soluci2n
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77
$abla AA.3 Datos * resultados obtenidos para la disminuci2n de la viscosidad de una soluci2n de 1uitosano /cp I
8$7L )5'
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reaccin
t
elucin

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5GLn
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PViscosidad
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solvente[enima
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@ig. AA.3 Gr:.ico de la variaci2n del porcentaje de viscosidad versus el tiempo de de+radaci2n de una soluci2n
4&
+>dL0 a &7 ?C-
78
$abla AB.3 Datos * resultados obtenidos para la disminuci2n de la viscosidad de una soluci2n de 1uitosano /cp I
8$7L )5'
4&
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t
elucin

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5GLn
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PViscosidad
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solvente[enima
I &6$7K s
@ig. AB.3 Gr:.ico de la variaci2n del porcentaje de viscosidad versus el tiempo de de+radaci2n de una soluci2n
4&
+>dL0 a 67 ?C-
79
$abla A5C.3 Datos * resultados obtenidos para la disminuci2n de la viscosidad de una soluci2n de 1uitosano /cp
I 8$7L )5'
4&
+>dL0 a L7 ?C-
t
reaccin
t
elucin

rel

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5GLn
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PViscosidad
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L''8$&6 L8$&6 &$L6& 5$L6& 5$5&7 76$56
L&L8$&5 L8$&5 &$L65 5$L65 5$5&K 76$5'
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(8LK$77 LK$77 &$6L( 5$6L( 5$5(& LJ$JJ
5'JKK$5L LK$5L &$6&( 5$6&( 5$58L LJ$&&
55&'7$K8 L7$K8 &$6'L 5$6'L 5$5J8 L8$6K
55LL7$7J L7$7J &$&JJ 5$&JJ 5$&'5 L8$5J
585K7$&( L7$&( &$&86 5$&86 5$&55 L($K'
58L'7$&L L7$&L &$&85 5$&85 5$&5& L($7L
58KL7$58 L7$58 &$&(8 5$&(8 5$&5L L($L6
t
solvente[enima
I 5J$86 s
@ig. A5C.3 Gr:.ico de la variaci2n del porcentaje de viscosidad versus el tiempo de de+radaci2n de una soluci2n
4&
+>dL0 a L7 ?C-
80
!8*eriencia 6? Degradacin enzimtica con bromelina.
Be reali2 el estudio de la disminuci2n de la viscosidad de soluciones de 1uitosano a di.erentes
temperaturas- Las soluciones del biopolmero se prepararon pesando '$&7'' + de 1uitosano 1ue se
llevaron a un volumen .inal de &7' mL con una soluci2n acuosa de :cido clor,drico /K$'8 )5'
47
0- El
procedimiento de medida .ue el mismo realiado en el apartado anterior- La concentraci2n de la
soluci2n de enima en este caso .ue de &$'8)5'
47
+>dL-
Los datos obtenidos se +ra.icaron en las .i+uras A554A5L-
$abla A55.3 Datos * resultados obtenidos para la disminuci2n de la viscosidad de una soluci2n de 1uitosano /cp
I J$J8 )5'
4&
+>dL0 a 57 ?C-
t
reaccin
t
elucin

rel

s*
5GLn
rel
PViscosidad
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5GLn
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PViscosidad
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6K&&8$6L 5K8$6L 7$L77 L$L77 '$78J 7J$&(
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6KJL($&6 5K($&6 7$L5J L$L5J '$7J& 78$(J
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solvente[enima
I 6'$8L s
82
I J$J8 )5'
4&
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t
reaccin
t
elucin

rel

s*
5GLn
rel
PViscosidad
'$'' 5J'$&6 K$K&L 7$K&L '$7&J 5''$''
&LK$KK 58K$KK K$LJJ 7$LJJ '$76L J($(J
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5L6K$&J 5(K$&J K$568 7$568 '$775 J5$6(
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&K&8$K6 5K8$K6 7$8(& L$8(& '$7K7 8K$K6
68&6$'6 5K6$'6 7$K(( L$K(( '$7(K 86$5K
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LL&'$(L 5K'$(L 7$7J( L$7J( '$785 85$(L
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7J5K$KL 57K$KL 7$L7L L$L7L '$78J (J$&'
K&5L$J& 57L$J& 7$6JL L$6JL '$7J6 (8$5L
(L5&$'& 57&$'& 7$&J6 L$&J6 '$K'' (K$6L
((55$5& 575$5& 7$&K& L$&K& '$K'& (7$(8
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55K'6$6K 5L6$6K L$JJ& 6$JJ& '$K&& ('$J8
5L7JJ$5K 56J$5K L$8L7 6$8L7 '$K6L K8$68
5L8J8$(6 568$(6 L$86' 6$86' '$K67 K8$55
575J8$7' 568$7' L$8&& 6$8&& '$K6K K($J(
&5(J'$J' 56'$J' L$778 6$778 '$K7J K6$&K
&&'J'$8K 56'$8K L$77K 6$77K '$K7J K6$&L
&&6J'$KL 56'$KL L$7LJ 6$7LJ '$KK' K6$5'
&8J87$8K 5&7$8K L$68& 6$68& '$K(( K'$5L
&J&87$L& 5&7$L& L$6K( 6$6K( '$K(8 7J$8(
&J787$65 5&7$65 L$6K6 6$6K6 '$K(J 7J$8'
6K585$&8 5&5$&8 L$&&6 6$&&6 '$KJL 7($65
6KL85$&6 5&5$&6 L$&&5 6$&&5 '$KJL 7($&8
6K(8'$85 5&'$85 L$&'K 6$&'K '$KJK 7($'&
t
solvente[enima
I &8$(& s
83
I J$J8 )5'
4&
+>dL0 a 67 ?C-
t
reaccin
t
elucin

rel

s*
5GLn
rel
PViscosidad
'$'' 57'$5' 7$J5L L$J5L '$7K6 5''$''
&'8$65 5L8$65 7$8LL L$8LL '$7KK J8$7K
LLK$7& 5LK$7& 7$((6 L$((6 '$7(' J($56
K87$L7 5L7$L7 7$(65 L$(65 '$7(6 JK$&(
55'&$88 5L&$88 7$K6' L$K6' '$7(J JL$&5
56L'$J5 5L'$J5 7$77& L$77& '$786 J&$K6
57(J$J6 56J$J6 7$756 L$756 '$78K J5$87
5JJ8$'& 568$'& 7$L68 L$L68 '$7J5 J'$65
&&6($&' 56($&' 7$L'K L$L'K '$7J6 8J$KK
&L(7$87 567$87 7$676 L$676 '$7JK 88$7(
6(J5$LJ 565$LJ 7$585 L$585 '$K'8 87$'8
L'65$6L 565$'' 7$5K& L$5K& '$K'J 8L$KJ
L&('$&J 56'$&J 7$56L L$56L '$K55 8L$5&
778($65 5&($65 7$'5K L$'5K '$K&' 85$(6
78&K$7& 5&K$L& L$J85 6$J85 '$K&6 85$'5
K'KK$&L 5&K$&L L$J(L 6$J(L '$K&6 8'$8(
(686$K( 5&6$K( L$8(6 6$8(6 '$K65 (8$85
(K&6$68 5&6$68 L$8K5 6$8K5 '$K6& (8$78
(8K&$J& 5&&$J& L$8L6 6$8L6 '$K6L (8$&5
5'J(8$7J 558$7J L$K(6 6$K(6 '$KLJ (L$(L
55'J($(8 55($78 L$K66 6$K66 '$K7& (6$J6
55&(($&' 55($&' L$K58 6$K58 '$K7L (6$K&
5L7(L$67 55L$67 L$7'K 6$7'K '$KKL (5$6L
5L85L$5K 55L$5K L$LJ8 6$LJ8 '$KK7 (5$58
57K7L$5L 55L$5L L$LJ( 6$LJ( '$KK7 (5$5(
&5(KJ$&( 5'J$&( L$6'7 6$6'7 '$K87 K($&K
&&''J$'K 5'J$'K L$&J( 6$&J( '$K8K K($'J
&&&L8$K7 5'8$K7 L$&85 6$&85 '$K88 KK$((
&8JK7$5K 5'7$5K L$5L6 6$5L6 '$('6 K6$J(
&J&'7$5' 5'7$5' L$5L5 6$5L5 '$('L K6$J&
&JLL7$'& 5'7$'& L$568 6$568 '$('L K6$8K
6K5K&$&6 5'&$&6 L$'&8 6$'&8 '$(58 K5$K&
6KL'&$'J 5'&$'J L$'&& 6$'&& '$(58 K5$75
6KKL&$'6 5'&$'6 L$'&' 6$'&' '$(5J K5$LK
t
solvente[enima
I &7$68 s
84
@ig. A55.3Gr:.ico de la variaci2n del porcentaje de viscosidad versus el tiempo de de+radaci2n de una soluci2n
de 1uitosano con bromelina /&$'8)5'
47
+>dL0 a 57 ?C-
47
+>dL0 a &' ?C-
85
47
+>dL0 a &7 ?C-
47
+>dL0 a 6' ?C-
86
!8*eriencia 7? Variacin de la -iscosidad de la solucin de quitosano
Debido a la observaci2n de 1ue la viscosidad de las soluciones de la misma concentraci2n 1ue se
preparaban con la soluci2n matri cambia de un da para otro se decidi2 estudiar la variaci2n de #stas
en el tiempo- Aparentemente la depolimeriaci2n o ,idr2lisis de la cadena de 1uitosano tambi#n es
e.ectuada por la acci2n de los :cidos minerales * or+:nicos-
$abla A5:.4 Comportamiento de la soluci2n de 1uitosano en :cido clor,drico /'$5 +>dL0-
D,as t
elucin
t
elucin

rel

s*
PViscosidad
5
&5J$&L
&5J$5'
&5J$&8
&5J$&7
&5J$&& t '$'8
($KL K$KL 5''
&
&5&$J'
&5&$8K
&5&$8(
&5&$88
&5&$88 t '$'& ($L5 K$L5 J($55
6
&'K$57
&'K$5'
&'K$5&
&'K$56
&'K$56 t '$'& ($58 K$58 JL$'6
L
&''$'5
5JJ$JJ
&''$''
&''$'&
&''$'5 t '$'5 K$J( 7$J( J5$&L
7
5J7$8'
5JK$''
5J7$J7
5J7$JJ
5J7$JL t '$'J K$8& 7$8& 8J$68
K
5J'$68
58J$J7
5J'$67
5J'$6K
5J'$6 t '$& K$K6 7$K6 8K$(J
87

@ig. A57.3 Hariaci2n de la viscosidad relativa * del porcentaje de viscosidad de la soluci2n de polmero versus
el tiempo-
88
A*>ndice 6. esumen de las ecuaciones utilizadas
Ecuaci2n de "ic,alelis4"enten!
/ec- (0
/ec- 80
Relaci2n de LineAeaver49ur;!
/ec- J0
Hiscosidad relativa!
/ec- 5'0
Hiscosidad especi.ica!
/ec- 550
Hiscosidad reducida!
/ec- 5&0
Grado de polimeriaci2n
6
v
7 )
v
8)
o
7 )
v
89:;,9 /ec- 560
Peso molar de la unidad repetitiva del 1uitosano
/ec- 5L0
Calculo de la concentraci2n en mol dL
45
/ec- 570
89
'
'
5

r sp
C
sp
red

- > &'6
5''
Z
- > 5K5
5''
Z
e0 g
A
e0 g
/A
)e0
<
+
( ) Inicial n e0<Q
p
6 )
d'
g
C
d'
mol
C

,
_

,
_
A*>ndice 7. Clculo de errores

/eterminacin y propagacin de errores: nin+una medici2n .sica puede dar un valor absolutamente
e)acto de una cantidad .sica$ por ello las mediciones .sicas se re+istran en un intervalo en el cual
debe estar comprendido el valor verdadero para la ma+nitud medida- Por lo +eneral las ma+nitudes de
inter#s son determinadas a partir de ma+nitudes .sicas medidas por lo 1ue el error en dic,a ma+nitud
debe ser obtenido a partir de los errores de las ma+nitudes medidas esto es conocido como
propa+aci2n de errores-
/eterminacin del error de la concentracin de la solucin matri#: como la ma+nitud de la
concentraci2n es determinada a partir de medidas .sicas directas estar: a.ectada por un valor de error$
debido a 1ue las medidas .sicas tienen un error asociado!
La concentraci2n se determina a trav#s de la si+uiente ecuaci2n
=
m
c
p

La masa! /'$555& t '$'''50 +ramos
El volumen! /5'' t '$'50 mL
Las ma+nitudes .sicas medidas tienen presente un error e)perimental por ello al utiliar la ecuaci2n para
determinar la concentraci2n es necesario determinar el error asociado * para ello es utiliado la derivada de las
medidas$ de la si+uiente .orma!
& L
5' 5 5' 5

+ $
=
c
$
m
c
c
p p
p
&
&
L
5' 5 5' 5
5

+ $
=
m
$
=
c
p
K
5' 5

$ c
p
%ropagacin de errores en la concentracin para las soluciones utili#adas en la medidas de
viscosidad: como las soluciones utiliadas para el estudio viscosim#trico se prepararon tomando una
alcuota de la soluci2n matri * lue+o se completo con solvente ,asta un valor de 5& mL$ por ello al
utiliar los aparatos de medidas en el valor de concentraci2n .inal se introduce un error sistem:tico-
La ecuaci2n 1ue es utiliada para la determinaci2n de la concentraci2n .inal es la si+uiente!
-
a p
pf
=
= c
c
pf
c
concentraci2n .inal en la diluci2n
p
c
concentraci2n de la soluci2n matri de polmero
a
=
volumen de alcuota tomada de la soluci2n matri
-
= volumen total de muestra
-
-
a p
a
-
p
p
-
a
pf
=
=
= c
=
=
c
c
=
=
c
+ +
&
6
5' &

$ c
pf
90
/esviacin en los tiempos de elucin: los valores de tiempo de eluci2n se determinaron en .ormas de
promedio * a los cuales con un estudio estadstico es determinado la desviaci2n est:ndar-
/eterminacin del error en la viscosidad:
elativa:
'

r
( ) ( )
'
&
' '
5
t
t
t
t
t
r
+
6
5' 5

$
r
Espec&fica:
'
'
5

r sp
( ) ( )
'
&
' '
5
t
t
t
t
t
sp

+
6
5' 5

$
sp
=iscosidad reducida:
C
sp
red

( )
( )
( )
p
p p
p
p
red
c
c t
t t
t
c t
tc
t
c t

+
+
&
'
'
'
&
' '
5

&
5' 5

$
red
=iscosidad intr&nseca:
Ecuacin de Sano:
[ ] ( )
1
]
1
5
8
8
5
r
p
c

[ ]
( )
( )
r
r p
p
p
r
c
c
c

(
8 &
8
5
5 8 8
[ ]
5
5' L

$
91
Ecuacin de Solomon>Ciuta:
[ ]
[ ]
p
r sp
c
'n &
5
&
[ ]
( )
( ) ( )
r
r sp p r
sp
r sp p
p
p
r sp
'n c 'n c
c
c
'n
+

&
5
&
5
&
5
& &
5
&
5
&
[ ]
&
5' J

$
Ecuacin de /eb>Chantter1ee:
[ ]
C
'n
sp sp r
6
5
&
&
5
6
1
]
1
,
_
[ ] +
,
_
+
+
,
_
+

r
sp sp r r p
p
p
sp sp r
'n c
c
c
'n
6
&
&
&
6
5
&
&
6
6
5 &
6
6 6
sp
sp sp r p
sp
'n c
,
_
+
+

6
&
&
&
6
6 6
5
[ ] 6 $ 5
Ecuacin de am>?aseen:
[ ]
C
'n
r sp
&

[ ]
r
r p
sp
p
p
p
r sp
c c
c
c
'n

+ +

&
5
&
5
&
&
[ ]
5
5' 8 $ (

$
92

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$abla 9.5.3 Asi+naci2n de las bandas del espectro de 1uitosano [6]

dEs similar el mecanismo de acci2n de la bromelina sobre el 1uitosano al propuesto para la

A*>ndice 7. Clculo de errores

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