Experimento numero2 Resultados: 1)

Se examinaron los somitas de los embriones tratados 48 horas post fertilizacin. A fue el control, por lo tanto, tiene estructuras normales, los somitas tienen ngulos agudos, en forma de galen. B expuesto a 1.5% de etanol, muestra pequeos cambios estructurales en comparacin con C, expuesto a 2% de etanol, los somitas ya no poseen una estructura normal; ya no tienen ngulo agudo y tienen forma de U.

2) El tratamiento con etanol disminuye significativamente la longitud del cuerpo del pez. Tras 5 das post fertilizacin, se midi las longitudes, tanto del control como de los expuestos al alcohol. Se observo una disminucin significativa de la longitud de los embriones tratados. En los casos afectados con etanol al 1% y 1.5% la disminucin fue leve pero en los casos con etanol al 2% y 2.5% fue mucho mayor.

Para poder establecer la disminucin de la longitud, se considero al control como una longitud de 100%, para poder determinar la disminucin de cada caso. Teniendo: El embrin afectado con 2% de etanol muestra una disminucin de 20% y el de 2.5% de etanol tambin mostro una disminucin pero del 50% de sus longitudes

respectivamente. 3) La exposicin al alcohol muestra una reduccin de la distancia intraocular de los embriones del pez

a) En una visin frontal se observa al

embrin control con el embrin afectado por alcohol al 2.5%, que ojos casi

fusionados

b) Al administrar diferentes dosis de etanol por 3 horas durante la

gastrulacin, tras 24 horas de exanimacin, resulto en la disminucin de la

distancia

intraocular.

Notndose que los ojos fusionados y ciclopa

aparecen a partir de altas dosis de etanol (2.4%). Discusin: Se comprob diferentes efectos teratgenos del etanol al documentarse el desarrollo anormal de los tejidos axiales, incluyendo la notocorda. El retraso del desarrollo producido por el etanol conduce a una interrupcin evitando una adecuada elongacin de la notocorda; acortndola e interrumpindola. Los mltiples defectos como el retraso temprano conducen en parte a las alteraciones en los somitas, que han perdido su forma como se observa al compararlos con los controles; tambin conduce a un tronco acortado. Demostrndose que los defectos del embrin son dependientes de la dosis de. Cuando la exposicin de los embriones de pez cebra fue a dosis ms altas de etanol, la distancia intraocular (IOD) disminuye de una manera dependiente de la dosis. Ciclopa

slo se encuentra a dosis muy altas, pero las dosis ms bajas no producen una reduccin significativa en la IOD, sugiriendo un modelo del defecto similar al desarrollo de la lnea medio facial.

Se trat de determinar cambios del desarrollo de la expresin gnica producido por la exposicin de etanol, esperando que sean factores determinantes de los defectos del desarrollo. Se realiz: -Evaluacin cuantitativa de los niveles de expresin gnica en embriones tratados con etanol en comparacin con los controles, a travs de la extraccin de ARNm. Adems, se llev a cabo la hibridacin in situ para observar posibles patrones. Demostrando que determinados genes reducen la expresin de extensin espacial del embrin despus de la exposicin a etanol (gen SGC, gli1 y el six3b). Por lo tanto la reduccin de estos genes, tras 8 horas post fertilizacin (HPF) afectan en la reduccin de la IOD.

Conclusiones Se demostr los diferentes efectos teratgenos del alcohol en embriones de peces zebra. Observando cambios en longitud, cambios de forma de los somites, ciclopa y disminucin de la distancia intraocular. Se identific diversos genes que se ven afectados por el etanol, demostrando que existen diversos mecanismos mediante los cuales la expresin de genes puede ser aumentada o disminuida. Experimento 3: Resultados: Discusin: Las perfusiones placentarias, particularmente abiertas se utilizan comnmente para evaluar el aclaramiento del frmaco a una concentracin de estado estacionario. Tambin se puede aplicar para confirmar transporte activo de sustancias endgenas o exgenas, considerando que en el caso de un xenobiotico la misma concentracin tiene que ser aadido a la circulacin materna y fetal. Suponiendo que no hay gradiente de

concentracin para el transporte activo, se puede observar la acumulacin de la sustancia, ya sea en uno de los dos circuitos. Considerando que la proporcin de flujo puede influir en el tiempo en el que ocurre la transferencia transplacentaria. Para controlar esto, se usa un frmaco de referencia que sea transportado pasivamente, como antipirina. La velocidad de transferencia de la xenobiticos puede ser siempre en comparacin con la velocidad de transferencia de antipirina (relacin F / M debe estar por encima de 0,75). Dado que la transferencia de antipirina est limitada principalmente por el flujo y por la superficie de intercambio dependiente del cotiledn perfundido. Adems la prdida del volumen fetal se utiliza como marcador de la integridad de la barrera. Considerando desventajas debido al mtodo de perfusin ex vivo de placenta humana como variaciones inter - individuales y una baja tasa de xito. Por otra parte, un perodo de 6 horas de perfusin no puede simular un tratamiento crnico de drogas y por lo tanto no se puede excluir por completo la transferencia de un xenobitico despus de la exposicin a largo plazo. Sin embargo, hasta ahora el mtodo de perfusin placentaria ex vivo es el nico modelo para estudiar el transporte de diversos xenobiticos en la placenta. Se considera tambin que los experimentos con animales pueden proporcionar informacin sobre la embriotoxicidad, no obstante, debido a las diferencias anatmicas de la barrera placentaria entre los seres humanos y roedores estos resultados no se pueden extrapolar a los humanos. Otra posibilidad para investigar la transferencia transplacentaria puede ser modelos de cultivo celular como citotrofoblastos primarios, lneas celulares, coriocarcinoma aislado de vesculas de membrana de plasma o explantes de tejido placentario. El modelo ms utilizado es la lnea celular BeWo; estas clulas se derivan de un coriocarcinoma gestacional maligno, pudiendo formar una monocapa confluente, convirtiendose en una membrana permeable, por lo que los estudios de transporte se pueden realizar. Resultados de los estudios de transporte utilizando el modelo de clulas BeWo se correlacionan bien con los resultados obtenidos en el ex vivo de perfusin placentaria humana. Sin embargo, para estudiar los detalles de transporte de y el metabolismo, el modelo celular BeWo puede ser ms factible, debido a que es ms fcil de manipular

como la expresin de los transportadores o enzimas genticamente alterados, pero al carecer de flujo de sangre y la integridad de la monocapa tiene que ser evaluado cuidadosamente. Diferentes xenobiticos y nanopartculas tambin se unen a diferentes protenas plasmticas que pueden influir de manera significativa la transferencia transplacentaria. Por tal motivo se considero la inclusin de albumina, la protena de mayor proporcin en el plasma. Recientemente, un estudio mostr que las proporciones de transferencia de diversas sustancias en la placenta humana se correlaciona con los coeficientes de concentracin en sangre materna ajustndose de acuerdo con la grado de unin a protenas plasmticas. Conclusiones En general, el modelo de la perfusin placentaria ex vivo es un mtodo vlido y fiable para estudiar el transporte a travs de la placenta humana y para predecir paso transplacentario de xenobiticos y nanopartculas. Se debe considerar que la transferencia transplacentaria depende de la velocidad de transporte de las edades gestacionales, debido que el grosor de la barrera varia. Tambin se pueden usar modelos de cultivo celular, para determinar xenobioticos que atraviesan la membrana placentaria. Llegando a ser mucho ms manejable, puesto que en el laboratorio.

La Figura 4A muestra los perfiles de perfusin de partculas de poliestireno pequeas ( 80 nm ) que se transportan a travs de la placenta en comparacin con partculas de poliestireno ms grandes ( 500 nm ) que no fueron transferidos al compartimento fetal . Cada punto de datos representa la concentracin media de partculas hasta el punto de tiempo dado de al menos 3 experimentos independientes . Para obtener nanopartculas de poliestireno de la transferencia placentaria es dependiente de la talla 19 . Despus de 3 horas de perfusin de la placenta ya 20-30 % de las partculas de poliestireno de 80 nm aadido inicialmente fueron transferidos de la madre al circuito fetal , mientras que las partculas de poliestireno de 500 nm no aparecan en el circuito fetal incluso despus de 6 horas de perfusin . Sin embargo , la materna concentracin de las partculas de 500 nm est disminuyendo . Las imgenes de fluorescencia en seccin histolgica del tejido despus de la perfusin mostraron que estos partculas se acumulan en las vellosidades de la placenta ( datos no mostrados ) . La Figura 4B describe un perfil de la perfusin caracterstica de la 14Cantipyrine radiomarcado . Antipirina como una pequea molcula lipfila se distribuye en la barrera de la placenta a travs de difusin pasiva y sirve como control para la integridad de los circuitos . Despus de 4-6 horas de la perfusin de un equilibrio entre la concentracin de antipirina fetal y materna debe ser construido. Para evaluar y comparar la velocidad de transporte placentario de xenobiticos la relacin de la concentracin del frmaco del feto a la madre ( F / M ) por lo general se muestra (Figura 5 ) .