TEMA: TRANSFORMACIN GENTICA DE PLTANO ( Musa sp. CV. HARTN) MEDIANTE BIOBALSTICA APLICADA A TEJIDOS MERISTEMTICOS ASESOR: Dr.

Walter Reyes Borja.

UNIVERSIDAD TCNICA DE BABAHOYO FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA DE INGENIERA AGROPECUARIA

AUTOR: Danny Aquiles Alvear Murillo.

BABAHOYO LOS ROS ECUADOR 2013

INTRODUCCIN
El pltano es uno de los cultivos ms importantes a nivel mundial al constituir el alimento bsico de millones de personas en los pases tropicales en vas de desarrollo y una importante fuente de ingresos para los mercados locales e internacionales. Este cultivo es atacado por enfermedades como la sigatoka negra, producida por el hongo Mycosphaerella fijiensis, han ocasionado grandes prdidas en la produccin. Aunque la sigatoka se controla comnmente a travs del uso de fungicidas, ello resulta en un elevado costo de produccin y provoca daos al ambiente, lo que ha hecho necesar io el desarrollo de variedades de pltano y cambures resistentes a travs de la aplicacin de distintos mtodos tales como hibridacin, mutagnesis, variacin somaclonal y t ransformacin gent ica. Mediante hibr idacin, por ejemplo, la Fundacin Hondurea de Investigacin.

MTODOS
Iniciacin y multiplicacin de pices

El proceso de iniciacin de pices meristemticos caulinares se realiz de acuerdo a la metodologa de Hardy y Garca (1994). Este proceso involucra la obtencin y esterilizacin del pice a sembrar mediante una serie de lavados y reducciones sucesivas del cormo inicial en soluciones de cloro comercial a distintas concentraciones. Una vez obtenido el pice, ste es lavado con agua destilada estril en cmara de flujo laminar y reducido a un tamao adecuado para su posterior siembra en medio slido de Murashige y Skoog suplementado con 2,5mgl-1 de BAP (MSMAP).
Para la multiplicacin de las yemas obtenidas durante el cultivo in vitro se emplearon dos procedimientos: 1) el procedimiento convencional consistente de la siembra del mater ial vegetal en medio MS-BAP slido y 2) el uso del sistema de inmersin temporal cada 30 minutos 6 minutos.

Figura 1. Aislamiento de multiyemas de Musa sp. cv Hartn a partir de grupos grandes de yemas cultivadas en medio MS-BAP. a: Recipiente con yemas sobre medio MS-BAP, b: grupo de yemas aisladas en placa de Petri con medio MS-BAP, c: dos yemas aisladas sobre medio MS-BAP en placa de Petri.

BOMBARDEO DE LOS PICES

Se utilizaron micropartculas de tungsteno de 1,1m de dimet ro ester ilizadas con etanol 70-100% y poster iormente incubadas con ADN, CaCl2 estril 2,5M y espermidina 0,1M (Klein et al., 1988). La distancia de disparo fue de 9,5cm, a una presin de 150psi. La concentracin de ADN utilizada fue de 2,0g/disparo (modificado de Klein et al ., 1988) . Se emple un vaco de 21lb de Hg y un tiempo de inyeccin de 0,1seg. Para evitar que los explantes fuesen expelidos al recibir la descarga de microproyectiles, sobre el tejido blanco se colocaron mallas metlicas con poros de 1mm.

RESULTADOS Y CONCLUSIONES.
A partir de un total de 50 pices meristemticos caulinares iniciados, de los cuales sobrevivieron nueve 9 (18%), se obtuvo un nmero de brotes suficientes y tiles para la regeneracin de las vitroplantas requer idas para el aislamiento de las multiyemas blanco del bombardeo. El alto porcentaje de mortalidad de los pices ex vitro iniciados se debi a contaminacin por bacterias y/o nemtodos presente en el material vegetal proveniente del campo utilizado para la iniciacin.

 Estomas abaxiales en hojas de plantas in vitro del cultivar Hartn regeneradas a partir de pices bombardeados. Se observan diferentes intensidades de azul (gris) como consecuencia de la tincin suministrada por la prueba histoqumica de GUS.

DISCUSIN
La utilizacin de sistemas de inmersin temporal en el cultivo in vitro de E. globulus origina altas tasas de proliferacin de brotes (cuadros 2 y 5). Estos resultados concuerdan con los obtenidos por McAlisteret al. (2005), quienes obtuvieron ms del doble de generacin de brotes con respecto al medio semislido en diferentes clones de Eucalyptus spp. Segn Preil (2005), este aumento se puede deber principalmente a que la absorcin de nutrientes y reguladores del crecimiento es por toda la superficie del tejido, lo que puede maximizar el desarrollo del explanto.

A: Tejido vascular GUS positivo en hoja de Hartn regenerada a partir de pice bombardeado a 150psi (20).
b: Borde de hoja sometida a prueba de GUS regenerada a partir de pice bombardeado (40).

RESULTADOS EN LAS PLANTAS DE LA INTEGRACIN DE LOS GENES.

Un total de 22 plantas mostraron integracin de los genes gus y bar en el genoma de sus clulas foliares, equivalente al 37,28% de las 59 plantas con expresin transitor ia GUS positiva y al 8,21% de las 268 plantas bombardeadas sobrevivientes. La amplificacin de fragmentos de estos dos genes para algunas de las plantas transgnicas.

GRACIAS POR SU ATENCIN.