PREPARACIN DE EXTRACTOS ACUOSOS A PARTIR DEL LTEX SECO

Para la preparacin del extracto acuoso de 5 mg/ml a partir del ltex seco obtenido en la etapa anterior, se colocaron 55 mg de ltex seco en un mortero y se redujo su tamao lentamente, con el fin de evitar un aumento de temperatura a causa de la friccin.

A continuacin, se colocaron 50 mg del polvo de ltex en un matraz de 10ml y se aadi tampn fosfato 50 mM y pH 7,5 hasta aforarlo. Se coloc el matraz en refrigeracin durante 24 horas, para la solubilizacin de las protenas. Posteriormente, se centrifug la suspensin a 2 700 x g, durante 10 minutos. Se tom el sobrenadante con una pipeta y se coloc en un tubo de vidrio. Se prepararon tres extractos acuosos, uno por cada muestra de ltex seco. En la Figura 2.2, se presenta un diagrama de bloques de este proceso.

PRECIPITACIN DE LAS PROTENAS PRESENTES EN LOS EXTRACTOS ACUOSOS

Se realiz una precipitacin de las protenas por adicin de solvente orgnico. Para esto, se colocaron 20 ml de extracto acuoso en un vaso de precipitacin, se aadi 1 ml de una solucin de cloruro de sodio 4 M, se agit la mezcla y se agregaron 40 ml de una solucin de etanol al 96% en volumen. Posteriormente, se realiz una agitacin leve y se distribuy la mezcla en 4 tubos plsticos para centrifugar a 2 700 x g, durante 5 minutos.

En seguida, se desech el sobrenadante y se colocaron los tubos hacia abajo, sobre una toalla de papel absorbente, durante aproximadamente 30 minutos, hasta que el precipitado se present semiseco.

A continuacin, se resuspendi el precipitado en 40 ml de tampn fosfato de sodio 50 mM a pH 7,5, para obtener un extracto semipurificado. La Figura 2.9 presenta el diagrama del proceso de purificacin del extracto acuoso, por adicin de etanol al 96%