CULTIVO CELULAR

Aislamiento de clulas

Las clulas pueden ser aisladas de los tejidos para cultivos in vitro de muchas maneras. Las clulas pueden ser purificadas con facilidad de la sangre, sin embargo slo los leucocitos son capaces de crecer en cultivo.

Mantenimiento de clulas en cultivo

Las clulas se cultivan y mantienen a una apropiada temperatura y mezcla de gases (habitualmente, 37C, 5% CO2 y 95% O2) en un incubador celular. Las condiciones de cultivo varan ampliamente para cada tipo celular, y la variacin de las condiciones para un tipo celular concreto, puede dar lugar a la expresin de diferentes fenotipos.

Incubadores de CO2

Incubadora

Manipulacin de las clulas en cultivo

Al estar generalmente las clulas en continua divisin durante el cultivo, es normal que crezcan hasta ocupar toda el rea o volumen disponible. Esto puede generar varios problemas: Agotamiento de los nutrientes del medio Inhibicin de la divisin celular por contacto: los contactos entre clulas pueden desencadenar un arresto del ciclo celular Estos problemas pueden afrontarse mediante mtodos de cultivo celular en esterilidad. El objetivo de estos mtodos es evitar la contaminacin con bacterias o levaduras que competiran por los nutrientes y/o podran infectar y as eliminar las clulas.

Cambios de medio
El objetivo de los cambios de medio es renovar los nutrientes y evitar la acumulacin de productos metablicos potencialmente txicos y de clulas muertas.

Transfeccin y transduccin
Otro mtodo comn en la manipulacin de las clulas es la introduccin de un DNA externo por transfeccin. Esto se lleva a cabo a menudo para conseguir que las clulas expresen una protena de inters. Ms recientemente, la transfeccin de RNA interferentes se han llevado a cabo como mecanismos adecuados para suprimir la expresin de un particular gen.