La solucin cida (conservadora) en campaas de hibridacin y su efecto sobre la produccin-viabilidad de semilla sexual de caa de azcar

Rosa P. Latiegue1, Rosaura Briceo1, Luis G. Figueredo1, Jenny del C. Cova1 y Milagros A. Nio1
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Instituto Nacional de Investigaciones Agrcolas (INIA), Estado Yaracuy. Venezuela km 3 Va Sector El Rodeo, Estacin Local Yaritagua, estado Yaracuy. rlatiegue@inia.gob.ve telf. (58)4168504120.

Resumen La Obtencin de un cultivar de caa de azcar requiere de rigurosos procesos, entre los que se destacan cruzamientos biparentales y mltiples el cual dependen de la conservacin exitosa de las inflorescencias, la solucin cida de SO 2 es una tcnica usada para la preservacin cuya concentracin ideal debe ser de 150 mg.L 1

, debido a que la solucin es inestable existiendo prdidas de SO 2 por volatilizacin, un monitoreo durante el proceso. El presente trabajo tuvo como

es necesario

objetivo evaluar el manejo de la concentracin de SO2 en los cruces mltiples sobre el efecto de la cantidad y el poder germinativo de semilla sexual de caa de azcar. El trabajo se efectu en la casa de cruzamiento del INIA Yaracuy, los tratamientos fueron: T1: solucin 150 mg.L-1 reposicin diaria y T2: solucin 150 mg.L-1 reposicin interdiaria, los cultivares utilizados fueron: C32-368, CR 87339, V98-120. La duracin del proceso fue de 25 das hasta la recoleccin de las semillas. Se evalu peso de semilla y poder germinativo. El diseo de experimentos fue un

completamente al azar analizado bajo un arreglo factorial. Los resultados indicaron que no hubo diferencias para la variable peso de semilla en ninguna de las combinaciones de tratamiento, si hubo diferencias significativas en germinacin,
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siendo el tratamiento 2 y los cultivares C32-368 y V98-120 los que mayor poder germinativo presentaron demostrando que la concentracin de SO 2 no influy sobre la cantidad de semillas producidas pero si sobre su poder germinativo as como demostr formas del manejo de la solucin durante el proceso.

Introduccin La hibridacin es la accin y efecto del cruzamiento entre individuos de diferente constitucin gentica y constituye la base de todo Programa de Mejoramiento gentico. (Cruz O. et al 2008). La hibridacin en caa de azcar tiene como objetivo transferir a la nueva variedad uno o varios caracteres deseables presentes en los progenitores. Los primeros trabajos de mejora de la caa de azcar consistan en la recoleccin de panculas bajo polinizacin libre, muy pronto los estudios se encaminaron a buscar un mejor control de los cruzamientos hasta llegar al uso de bolsas de tela para proteger el cruzamiento entre el progenitor femenino y el masculino, conocido como cruce biparental. (Cruz y Actualmente la hibridacin de la Caraballoso, 2007).

caa de azcar, se realiza bajo distintas

modalidades como son: cruzamientos biparentales (familia de hermanos completos) Cruces mltiples (familia de medios hermanos) y Polinizacin abierta en campo (familia de medios hermanos). Los cruzamientos biparentales son cruces entre dos clones especficos, donde el clon portador de la semilla femenina () es androesteril o muy dbil polinizador y los clones que actan como polinizadores masculin os () son escogidos entre los que tengan una alta produccin de polen frtil (De Sousa et.al, 2008). En el cruzamiento mltiple se seleccionan un grupo de progenitores (femeninos y masculinos) con caractersticas deseables y se colocan juntos para que se fecunden. Para que estos cruzamientos se lleven con xito, es necesario conservar las inflorescencias, (para que se mantenga la viabilidad del polen), hasta que la polinizacin se lleve a cabo. Los primeros estudios en conservacin de inflorescencias se llevaron a cabo en Hawaii quienes encontraron que una solucin diluida de dixido de azufre (SO2) prevena el marchitamiento de los tallos. (Brett, 1947; Ramdoyal y Domaingue 1989). El SO2 permite mantener las panculas con vida hasta la madurez de la semilla, debido a que el SO 2 molecular es el encargado de la accin antimicrobiana y est directamente relacionado con el pH del medio, por
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lo tanto permite que los tallos de las inflorescencias se mantengan turgentes y las flores viables mientras se produce el proceso de polinizacin y posterior maduracin de la semilla. Desde entonces, ha habido muchas variaciones y estudios de los productos qumicos a usar y muchas formas diferentes de manejar las soluciones. Hoy en da en el INIA, no se utiliza el SO 2 en forma de gas sino se utiliza un reactivo llamado metabisulfito de sodio (Na 2S2O5) como sustituto, liberando el gas una vez que este es preparado. Esta metodologa es menos riesgosa y menos costosa, sin embargo la solucin utilizada sigue siendo inestable existiendo prdidas de SO 2 por volatilizacin, por lo cual es necesario un monitoreo y reposiciones de solucin con SO2 durante el proceso. El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar la frecuencia de aplicacin de SO2 en la solucin conservadora de la inflorescencia, y medir el efecto de la cantidad y el poder germinativo de la semilla sexual de caa de azcar obtenida bajo la modalidad de cruces mltiples.

Materiales y mtodos El trabajo se efectu en la casa de cruzamiento del Programa Venezolano de Desarrollo de Variedades de Caa de Azcar ubicado en la estacin local Yaritagua (ELY) del INIA Yaracuy. Se trabajo con la campaa de hibridacin 2010-2011, donde se realiz un cruce mltiple colectando los tallos con inflorescencias en la coleccin de progenitores ubicada en el campo experimental de la ELY. Los tallos fueron preservados con la solucin acida, siguiendo la metodologa de Verret et.al, (1925) (modificada) y adaptada en INIA por Latiegue et al, (2011). La solucin contiene 150 mg.L-1 de SO2, 75 mg.L-1 de H3PO4, 37,5 mg.L-1 de H2SO4 y 37,5 mg.L-1 HNO4 y la adaptacin es la utilizacin del metabisulfito de sodio (Na2S2O5) como sustituto del gas SO2. Se colocaron 3 inflorescencias por progenitor en tobos plsticos de 8 L con la solucin final. Debido a que la solucin es altamente inestable y existe una prdida diaria de un 40 a 60% de SO2 aproximadamente por volatilizacin, (Latiegue; et al 2011) es necesario hacer monitoreos y reposicin con 25 mL de solucin madre de metabisulfito para garantizar que la concentracin se encuentre entre 90 y 150 mg.L-1 SO2, valores por encima del rango no garantizan la viabilidad de la semilla,
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por el contrario valores muy bajos

no garantizan el mantenimiento de la

inflorescencia hasta la madurez de la semilla. Para determinar la frecuencia ms idnea de frecuencia de reposicin de metabisulfito durante el periodo del proceso (desde el inicio del cruce hasta la cosecha de la semilla) los tratamientos establecidos fueron: T1: solucin 150 mg.L-1 reposicin diaria T2: solucin 150 mg.L-1 reposicin interdiaria Los progenitores utilizados para el cruce mltiple fueron: P2: CR 87339 () P1: C32-368 () P3: V98-120 () P4: V00-50 () Se recolecto semilla sexual de los progenitores femeninos o que se pudieran comportar como femeninos, tales como: P1: C32-368 () P2: CR 87339 () P3: V98-120 () Una vez cosechada las semillas por progenitor se procedi a pesar las mismas a fin de obtener los gr de semilla producida, luego fueron sembradas en la superficie de sustrato comercial, utilizando 2 gr de semilla por bandejas de plstico, se humedeci y se cubri con plstico para lograr una humedad relativa del 90 a 95% por 7 das a fin de mantener la humedad y garantizar la germinacin. En este momento se retir definitivamente el plstico que cubre a las bandejas de germinacin y se procedi a contar el nmero de plantas germinadas. Se evalu peso de semilla colectada y poder germinativo (N de plantas germinadas/2 gr de semilla). El diseo de experimentos fue un completamente al azar analizado bajo un arreglo factorial. El paquete estadstico utilizado fue el INFOSTAT (Versin estudiantil).

Resultados y discusin En la tabla 1, se muestran los valores de peso de semilla para cada cultivar por tratamiento. En general no hubo diferencias significativas entre tratamientos lo que indica que la frecuencia de reposicin de SO2, no afecto la cantidad de semilla cosechada; estos resultados concuerdan con Miller, 1995, quien compar diferentes concentraciones de SO2, y el manejo de reposicin de las soluciones fue similar al planteado en este trabajo y sus resultados revelaron que no hubo diferencias entre la cantidad de semilla cosechada en gr para las variedades evaluadas. Lo que les permiti escoger la solucin ms econmica y prctica para el uso en su programa de hibridacin. Tabla 1: Peso por cultivar tratamiento Tratamiento progenitor 1 1 1 2 2 2 1 2 3 1 2 3 Cantidad de semilla cosechada (gr) 9,65a 9,97a 7,08a 8,65a 7,8a 9,06a de semillas para cada

Los resultados por cultivar para cada tratamiento del nmero de plantas germinadas se muestran en la tabla 2: en el que se evidencia que hubo diferencias significativas Tabla 2: Nmero de semillas germinadas por progenitor para cada tratamiento N de plantas/2gr de semilla 13,25a

Tratamientos 1

progenitor 1

1 1 2 2 2

2 3 1 2 3

1,75a 11a 34,25b 0,25a 37,75b

entre tratamiento. Indicando que aun cuando la frecuencia de reposicin de entre 170 y 230 mg.L-1 de SO2, no afect la cantidad de semilla cosechada por variedad si afect el poder germinativo de la misma, exceptuando el cultivar 2, quien en ambos tratamientos manifest una muy baja germinacin debido quiz a la naturaleza fisiolgica del cultivar. Al verificar los niveles de SO2, por tratamiento se evidenci que la reposicin diaria (T1) mantuvo concentraciones muy por encima de los 150 mg.L-1 SO2, (entre 170 y 230 mg.L-1 de SO2) y en la reposicin interdiaria (T2) las concentraciones se mantuvieron entre 120 y 160 mg.L-1 de SO2, estos resultados indican que los niveles de SO2 del T1 pudieron afectar el poder germinativo o viabilidad de la semilla. Los resultados antes descritos permiten aseverar que bajo las condiciones de manejo de la hibridacin en la ELY, la adicin interdiaria de metabisulfito (T2) es la forma ms idnea de reponer los niveles de SO2, ya que es el que garantiza los niveles de concentracin que no afectan ni la cantidad producida ni la viabilidad o poder germinativo de las semillas.

Conclusiones. Bajo las condiciones de la ELY, y en el presente trabajo el T2 (adicin interdiaria de metabisulfito de sodio) es el tratamiento que no afecta negativamente la produccin de semillas ni su viabilidad, por lo que permite escoger esta frecuencia de reposicin del mismo durante las campaas de hibridacin. Sin embargo, ms trabajos de investigacin son necesarios para evaluar otras frecuencias de reposicin junto con mayor cantidad y variedad de progenitores.
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Referencias Bibliograficas. Brett, P. 1947. An Investigation into Sugarcane Breeding in South Africa. Proc. S.A. Sugar Tech. Assn., 21, 104-108. Cruz O. y Caraballoso V. 2007. Hibridacin de la caa de azcar. Disponible desde internet en: http://www.monografias.com/trabajos43/hibridacion-canaazucar/hibridacion-cana-azucar.shtml. Cruz Coca, Perez R, y Caraballoso V.2008. Estrategia para cumplir con los programas de cruces de la caa de azcar en el Centro Nacional de Hibridacin. Disponible desde internet en: http://www.monografias.com/trabajos57/sistema-control-cana-azucar/sistema-

control-cana-azucar.shtml De Sousa-Viera, R.; R. Briceo; A. Daz; R, Rea; M. Nio; A. Rivero; G. Aza; A. Ortiz y J. George. 2008. Programa venezolano de desarrollo de variedades de caa de azcar. Revista Digital INIA HOY N 1, enero-abril. Disponible desde internet en: http://192.168.1.11/www.inia/images/stories/docman/IH01desousa.pdf Latiegue R. Briceo R., Figueredo L., Nio, M., Rivero A., Aza G y Hernndez Theofilo., 2011. Mtodos de conservacin de inflorescencias de caa de azcar en las campaas de hibridacin del programa venezolano de desarrollo de variedades en INIA Yaracuy-Estacin Local Yaritagua. INIA Divulga 19:12-17 Disponible desde internet http://sian.inia.gob.ve/repositorio/revistas_tec/inia_divulga/id19/id19_latiegue.pdf Miller, J. 1995. Methods of preserving female tassels used in sugarcane crosses. American Society of Sugar Cane Technologists. 14: 12-19. en:

Ramdoyal, R y R. Domaingue. 1989. Potassium metabisulphite as a substitute for sulphur dioxide in preservative solutions used during crossiong of sugarcane. In XX Congress ISSCT. Vol 2. Proceedings. p. 851-859 Verret, J. 1925. A method of handling cane tassels for breeding work. Hawaiian planters Rec. 29: 84-94.