Manual de Hemostasia y Banco de Sangre Actualizado

GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formacin Versin: Cdigo: 001
UC-BAC-BANGL007 1 MORFOLOGIA Y RECUENTO DE PLAQUETAS Objetivo Los estudiantes estarn en capacidad de realizar un recuento de plaquetas con los diversos mtodos.
Fecha:
30 DE NOV 2010
Manual de calidad Pag 1 de 42
Laboratorio No Tema:
Fundamento
Las plaquetas representan fragmentos citoplasmticos derivados de los megacariocitos. Estn rodeadas por la clsica membrana celular de doble capa lipdica que contiene diversos receptores y fosfolpidos funcionalmente importantes. Las plaquetas en circulacin no se adhieren unas con otras, ni a la superficie endotelial, pero pueden ser estimuladas a agregarse por varios mediadores, jugando un papel importante en la hemostasia. Para ello forman nudos en la red de fibrina, liberan substancias importantes para acelerar la coagulacin y aumentan la retraccin del cogulo sanguneo. En las heridas las plaquetas aceleran la coagulacin, y adems al aglutinarse obstruyen pequeos vasos, y engendran substancias que los contraen. El recuento de plaquetas se realiza en sangre anticoagulada con EDTA y diluida con oxalato de amonio al 1% o citrato de sodio al 3,8% mediante el uso de la pipeta para dilucin de hemates. En el extendido se sangre perifrico, las plaquetas se observan con una tonalidad levemente basfila lo cual permite detallar una zona central granular llamada cronmetro y una zona perifrica ms clara denominada hialmero.
Materiales y Equipos
Item 01 Tipo MAT Descripcin Sangre con EDTA
Revisado por:
CLAUDIA MONTEJO
Elaborado por:
CLAUDIA XIMENA LOZANO TRUJILLO
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Fecha
30 de Noviembre de 2010
Fecha
Fecha
GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formacin Versin: Cdigo:

02 03
001
Fecha:
30 DE NOV 2010
UC-BAC-BANGL007 MAT Pipeta para la dilucin de hemates MAT Agua destilada
04 05 06 07 08 09
MAT MAT MAT MAT MAT EQU
Cmara de Neubauer Microaspirador Caja de Petri con papel filtro humedecido Laminas Laminilla de cuarzo Microscopio
Reactivos
tem 01 02 03 04 Descripcin Solucin de Oxalato de amonio al 1% o solucin de citrato de sodio al 3,8% Solucin limpiadora Aceite de inmersin Colorante de Wright
Procedimiento
Paso 1 METODO INDIRECTO 1. Realizar extendido de Sangre perifrica 2. Colorear el frotis con Colorante de Wright 3. Dejar secar la coloracin 4. Primero observar en objetivo de 10X para buscar la zona ideal. 5. Pasar a objetivo de alto poder 100X, Colocar aceite de inmersin. 6. Identificado el sitio donde se observen 100 glbulos rojos por campo, contar plaquetas en 10 campos microscpicos, y
Elaborado por:
Revisado por:
CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
Fecha
Fecha
GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formacin Versin: Cdigo: 001 Fecha: 30 DE NOV 2010
Manual de calidad
UC-BAC-BANPag 3 de 42 GL007 sumar el nmero total, sacar el promedio dividiendo por diez. 7. Luego este resultado lo multiplicamos por una constante que es 21.000 y el resultado se da en milmetro cbico (mm). Si el recuento es muy bajo contar en 20 campos. METODO DIRECTO 1. Mezcle cuidadosamente la sangre anticoagulada por inversin, por lo menos 30 veces, con el fin de obtener una muestra homognea. 2. Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 1.0 exactamente; haga uso del microaspirador 3. Elimine el exceso de sangre de las paredes externas de la pipeta para no contaminar la solucin diluente. 4. Aspire el lquido diluente hasta la marca 101 exactamente. 5. Sujete la pipeta entre los dedos ndice y pulgar, desprenda el microaspirador y agite la pipeta en forma horizontal durante tres minutos. 6. Deje reposar la pipeta por 10 minutos si esta trabajando con oxalato de amonio al 1% con el fin de lograr la hemlisis total de los glbulos rojos. 7. En caso de trabajar con Citrato de sodio al 3,8% omita este paso 8. Agite nuevamente 9. Descarte las primeras 4 gotas, para eliminar el lquido del capilar e inmediatamente llene la cmara en ambos lados. 10. Coloque la cmara en ambiente hmedo por 10 minutos. El ambiente hmedo se logra cubriendo la cmara con una caja de petri que llevara adherido un disco de papel filtro humedecido con agua. 11. Coloque la cmara en el microscopio. Enfoque con objetivo de 40X y observe el llenado de la cmara, no deben existir agregados plaquetarios. 12. Cuidadosamente enfoque el cuadrado central. 13. Disminuya la intensidad de la luz y as le ser ms fcil distinguir y contar las plaquetas. 14. Las plaquetas se reconocen como estructuras pequeas,
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Revisado por:
CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
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UC-BAC-BANPag 4 de 42 GL007 opacas, redondas o alargadas a veces con prolongaciones, que son medianamente retrctiles. 15. El numero esta determinado por el conteo de los 25 cuadrados en que se subdivide el cuadrado central, descartando las plaquetas que tocan las lneas derecha e inferior. CALCULO El nmero de plaquetas por mm se calcula de acuerdo a: Volumen del rea contada: 0.1 mm ( 1 X 1 X 0.1) Dilucin utilizada: 1:100 Numero de clulas contadas Plaquetas por mm = N de clulas contadas X 1 X dilucin Plaquetas por mm = N de clulas contadas X 10 X 100 Plaquetas por mm = N de clulas contadas X 1.000
VALORES DE REFERENCIA: El rango normal para el recuento de plaquetas es de Unidades clsicas: 150.000 400.000 / mm
. OBSERVACIONES 1. Correlacione el nmero de plaquetas observadas con el recuento obtenido en cmara, usualmente se observan de 8 2 0 plaquetas individuales por campo con objetivo de alto poder 2. Observe el tamao de la plaqueta circulante. Frecuentemente se pueden observar en bajo porcentaje, algunas plaquetas con tamao mayor (macroplaquetas) 3. Se debe tener especial cuidado con las soluciones
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UC-BAC-BANPag 5 de 42 GL007 diluentes, estas no deben estar contaminadas pues tanto las partculas como las bacterias pueden simular plaquetas. 4. La limpieza de las cmaras y de las pipetas es extremadamente importante en este procedimiento. 5. Los lquidos diluentes se deben mantener refrigerados y filtrar antes del uso 6. Si observa agregados en el recuento, el procedimiento debe repetirse. 7. No se debe reportar el recuento de plaquetas Directo sin confrontarlo con el extendido de sangre perifrico coloreado con Wright. 8. La diferencia del nmero de plaquetas entre los cuadrados centrales de la cmara no debe ser mayor de 10 plaquetas.
Consulta
1. Qu valores de referencia tienen las plaquetas? 2. Cul es el valor normal del volumen plaquetario medio? 3. Por el mtodo automatizado que errores se pueden tener en el recuento de plaquetas? 4. Qu es el dimorfismo plaquetario 5. En qu circunstancias fisiolgicas y patolgicas podemos encontrar trombocitosis y trombocitopenia?
Bibliografa
BERRIO, M. et-al El hemograma, anlisis e interpretacin con las tres generaciones. Editorial Universidad de Antioquia. Medelln, Antioquia 2003. VIVES J.L. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Editorial Salvat. TURGEON, M. Hematologa clnica. Teora y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno. 2006
ANEXOS
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CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
Fecha
Fecha
UC-BAC-BANGL007 No. Anexo NO APLICA
2 TIEMPO DE SANGRIA Objetivo
Determinar la funcin plaquetaria mediante pruebas de tamizaje que requieren una detallada historia clnica, manifestaciones hemorrgicas y evaluacin del riesgo hemorrgico.
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Fecha
Fecha
Fecha

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Fecha:
30 DE NOV 2010
Fundamento
La hemostasia primaria se evala mejor con el tiempo de sangra, la cual es una medicin in vivo de la funcin de las plaquetas. Existen varios factores que afectan el tiempo de sangra, los cuales incluyen el nmero de plaquetas, su funcin y la integridad vascular. En 1910, Duke describi el mtodo de tiempo de sangra como una pequea incisin en el lbulo de la oreja (valor normal de 1 a 3 minutos) y relaciono la prolongacin de este tipo de hemorragia con trombocitopenia. Ms tarde IVY modifico esta prueba para hacerla mas fidedigna y establece una tcnica estandarizada que incluye tres aspectos fundamentales Zona apropiada de la cara volar proximal del antebrazo Presin por encima del antebrazo a 40 mm Hg para conseguir una presin constante, creando estasis venosa. La venostasia producida por la presin hace que los vasos permanezcan llenos de sangre Bistur (simplate) que permita una incisin de 5 mm de longitud y 1 mm de profundidad.
METODO ESTANDARIZADO IVY: La hemorragia provocada en la piel, al lesionar pequeos vasos, se detiene por la constriccin de estos (vasoconstriccin) y por la formacin del tapn plaquetario en el sitio de la lesin.
Item 01 02 03 06 07 Tipo MAT MAT MAT EQU EQU
Elaborado por:
Descripcin
Algodn
Papel de filtro Lancetas desachables (Simplate) Tensimetro Cronometro

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CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
Fecha
Fecha

tem
001
UC-BAC-BANGL007
Fecha:
30 DE NOV 2010
Reactivos
Descripcin
01 Paso 1
Alcohol
Procedimiento
2 Colocar el tensimetro, en el tercio superior del brazo, elevndolo a una presin de 40 mm Hg. Esta presin es mantenida durante la prueba Seleccionar un area de la parte extrema del antebrazo, libre de venas y cicatrices Limpiar con prepodine esta zona y dejarla secar Realizar una incisin horizontal con el Simplate, que realiza dos incisiones (estandarizadas) de 1 mm de profundidad por 5 mm de longitud. (la direccin de la incisin en el antebrazo tiene un efecto sobre el resultado. Se registran tiempos ligeramente ms largos cuando la incisin es horizontal que cuando es vertcal) Poner en marcha el cronometro Cada 30 segundos limpiar la sangre con papel filtro, tener cuidado de no tocar el sitio de la lesin Detener el cronometro en el momento en que la hemorragia cese y retirar el tensimetro.
Valores Normales:
1 a 9 minutos
Elaborado por:
Revisado por:
CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
Fecha
Fecha

5
001
UC-BAC-BANGL007 OBSERVACIONES:
Fecha:
30 DE NOV 2010
El tiempo de sangra es ms corto en nios recin nacidos que en adultos; tiende a ser ms prolongado en mujeres y disminuye con la edad El tiempo de sangra es inversamente proporcional al nmero de plaquetas, al volumen de las plaquetas y al hematocrito (la anemia aumenta el tiempo de sangra y la eritrocitosis lo disminuye) Pacientes con recuentos de plaquetas inferiores a 50.000lmm 3 no se les debe practicar la prueba Pacientes que estn recibiendo tratamiento a base de acido acetil saliclico deben esperar mnimo de siete a nueve das de ser suspendido el medicamento para poder realizarle la prueba La prueba de tiempo de sangra es ordenada prequirurgicamente para determinar el riesgo de hemorragia perioperatoria y posoperatoria. Sin embargo, esta prueba mide la formacin adecuada del tapn plaquetario en el sangrado superficial de la piel y no necesariamente en los rganos internos Estudios realizados recientemente han demostrado que el tiempo de sangra no es confiable cuando se usa como una prueba de tamizaje para evaluar el riesgo de sangrado excesivo perioperatorio. Un tiempo de sangra anormal puede llevar a posponer innecesariamente una ciruga, a realizar pruebas adicionales, y posiblemente, a un tratamiento inapropiado para normalizar el tiempo de sangra Se demuestra una vez ms, que una prueba nica no reemplaza una buena historia clnica ni el estudio integral prequirrgico, dentro del contexto clnico y de lgica medica. Desde el punto de vista tcnico, el tiempo de sangra es muy difcil de controlar a no ser que se utilice un mtodo estandarizado.
Consulta
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Fecha
Fecha
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UC-BAC-BANPag 10 de 42 GL007 1. Mencione y explique en qu consisten los diferentes mtodos que existen del tiempo de sangra 2. Indique en que patologas se aumenta el tiempo de sangra 3. Mencione los medicamentos que alteran el tiempo de sangra
Bibliografa
Descripcin BERRIO, M. et-al El hemograma, anlisis e interpretacin con las tres generaciones. Editorial Universidad de Antioquia. Medelln, Antioquia 2003. BROWN B. Hematology: priciples and procedures 6 ed. Filadelfia. Lea & Febiger; 1993. MIALE JB. Hematologia medicina de laboratorio 6 ed. Barcelona: Revert; 1985. LEE GR. Et al. Wintrobes clinical hematology. Filadelfia: Williams & Wilkins; 1999. WILLIAM WJ. Et al. Hematology. 5 ed. Nueva York. San Luis; 1995. VIVES J.L. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Editorial Salvat. TURGEON, M. Hematologa clnica. Teora y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno. 2006
ANEXOS (Si los hay)

No. Anexo NO APLICA Descripcin
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30 DE NOV 2010
3 TIEMPO DE PROTROMBINA (PT) Y TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA TISULAR (PTT) Objetivo
Realizar la determinacin del tiempo parcial de tromboplatina tisular y el tiempo de protrombina, como medio para valorar la coagulacin sangunea en un paciente.
Fundamento
TIEMPO DE PROTROMBINA (PT) Cuando se aade calcio y un extracto mstico al plasma, el facto VII reacciona con el factor mstico y se forma un producto que convierte el factor X a su forma activa el factor Xa, este a su vez reacciona con el factor V, con el calcio y con los fosfolpidos para formar la protrombina en trombina. Entonces la trombina convierte el fibringeno en fibrina. La velocidad de formacin de la fibrina depende de los factores V, VII, X, II y I por lo cual, esta prueba es empleada para medir la actividad total de estos factores. RESULTADOS E INTERPRETACION: El control normal debe dar un Tiempo de Protrombina (PT) en 10.5 y 13.5 segundos que corresponde a un INR de 1.0. El cual esta prolongado cuando existe deficiencia congnita adquirida de los factores V, VII, X o protrombina, cuando el fibringeno esta por debajo de 100 mg% y cuando aparecen productos de degradacin de fibringeno o de fibrina o hay heparina. En la policitemia el PT puede estar prolongado como consecuencia de una desproporcin plasma / anticoagulante. EL PT es la prueba mas comnmente usada para controlar la terapia
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UC-BAC-BANPag 12 de 42 GL007 anticuoagulada oral con antagonistas de la vitamina K para el tratamiento y la prevencin tanto de trombosis venosa como de tromboembolismo arterial. La medicacin debe controlarse regularmente con PT para prevenir la sobreanticoagulante y el riesgo del sangrado. La estandarizacin de la prueba de PT se ha hecho con la introduccin de patrones internacionales de tromboplastina y con la definicin de una escala internacional de actividad anticoagulante. En 1983 la OMS adopto un sistema de normalizacin del PT para permitir la estandarizacion internacional del control anticoagulante oral. Los valores de los pacientes se informan en trminos de la relacin internacional (INR). Este sistema tambin ha sido recomendado por el Comit Internacional de Trombosis y Hemostasis (ICTH) y por el Comit Internacional para Estandarizacin de Hematologa (ICSH). FARMACODINAMICA DE LAS DROGAS CUMARINICAS: La sntesis de factores de coagulacin vitamina K dependientes (II VII IX X) en el hgado puede ser inhibida por derivados de la 4- hidroxicumarina y la indandiona.2 Normalamente la Vitamnina K cataliza la carboxilacin de los residuos de acido glutmico en los factores de coagulacin II, VII, IX y X as como en los inhibidores naturales de la coagulacin protena C y protena S. Los residuos modificados de acido glutmico (acido-gama-carboxi-glutmico) son necesarios para la interaccin, mediada por calcio, de estas protenas con fosfolpidos cargados negativamente. Los antagonistas de la vitamina K bloquean indirectamente la formacin de residuos de acidogamacarboxiglutamico, llevando a la liberacin en la circulacin de protenas inmodificadas llamadas PIVKA (Protenas induced by vitamina K absebce / antagonist). Las PIVKA no tienen actividad funcional fisiolgicamente importante, pero pueden afectar la determinacin del PT efectuada con algunos reactivos de tromboplastina. RELACION NORMALIZADA INTERNACIONAL (INR): Para obtener una escala universal de actividad anticuogulante oral la OMS y el ISTH ICSH han recomendado conjuntamente que el PT debiera convertirse a
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INR. Por definicin el INR es la relacin de PT que se habra obtenido si se hubiera usado la Preparacin Internacional de Referencia de la OMS. En la prctica el INR del plasma de un paciente se deriva de la relacin de PT y del ndice de Sensibilidad Internacional (ISI) de la tromboplastina. El INR se calcula usando la siguiente frmula: INR: (PT PACIENTE)ISI (PT NORMAL) La OMS ha propuesto que los fabricantes de tromboplastina indiquen la sensibilidad de cada lote de reactivo con el ISI correspondiente y que proporcionen una tabla de conversin en trminos de los resultados de PT. Es importante tener en cuenta las variaciones que pueden causar imprecisin del INR, estas incluyen: imprecisin en la calibracin del ISI por un mtodo anunciado, estimada en aproximadamente 5% Variacin entre laboratorios en la relacin mediada para el PT, estimada en aproximadamente 7% para ISI de 1.0 y de 9% para ISI de 2.0 La variacin biolgica del INR de un paciente estimada en aproximadamente 8%,. Para tromboplastina con un ISI de 1.0 parece posible limitar la variacin total en el INR de un paciente de 11 a 13.5%. Para tromboplastinas con un ISI de 2.0 a 2.5 puede observarse una variacin ms grande de hasta 26%. Por lo tanto no se recomienda utilizar para PT tromboplastinas que tengan un ISI superior a 2.5. Entre las mas importantes variables pre-prueba estn, pronta centrifugacin, minimizacin de los efectos de envejecimiento de la muestra, adecuada tcnica de congelacin y descongelacin, presencia de heparina, anticoagulante usado para el plasma, entre otros. Para efectos prcticos de unificacin de resultados, se recomienda informar el resultado de PT as: Resultados en segundos del paciente, control normal en segundos; e INR,
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correspondiente al resultado del paciente. Se considera prolongado un PT cuando el INR sea superior a 1.3. TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA TISULAR Cuando se aade calcio y cantidad suficiente de fosfolpidos plaquetarios al plasma, se activan todos los factores de la coagulacin necesarios para la formacin de protombinasa intrinsica, esta activa la protombina y la trombina as formada convierten el fibringeno en fibrina.5 VALOR NORMAL: 25 a 35 seg INTERPRETACION: El PTT esta prolongado en las deficiencias congnitas o adquridas de uno o mas de los factores XII, XI, X, IX, VIII, V, protombina y fibringeno. Esta prolongado si el fibringeno es inferior a 100 mg%; cuando aparecen productos de degradacin de fibringeno o de fibrina. Puede estar prolongado en presencia de anticuerpos antifosfolipido anticoagulante lpico. En individuos normales que no tienen historia hemorrgica ni alteraciones de los factores de coagulacin ocasionalmente se encuentra un PTT ligeramente prolongado. El PTT es la prueba mas comnmente usada para controlar terapia anticoagulante con heparina. La heparina tiene una vida media de aproximadamente 4 horas, requiere de antitrombina III como cofactor para poder inactivar las proteasas de serina activadas (Factor XIIa, XIa, IXa, Xa y IIa), su efecto anticoagulante es inmediato, dato que se debe tener en cuenta cuando se este monitorizando un paciente heparinizado. FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ANTICUAGULANTE DE LA HEPARINA IN VIVO Destruccin plaquetaria y liberacin del factor plaquetario 4 Tipo de heparina Proporcin de difusin en el espacio extravascular Resistencia del paciente despus de una trombosis Medicamentos que interfieren: Antibiticos, nicotina, glucosa 5% en
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001
UC-BAC-BANGL007 agua, antihistaminicos.
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30 DE NOV 2010
FACTORES QUE AFECTAN IN VITRO Tiempo de recoleccin Liberacin del factor plaquetario 4 por recoleccin o centrifugacin inadecuada Anticoagulante (citrato u oxalato) Dosificacin incorrecta Pruebas utilizadas para monitorizar
Item 01 02 03 04 05 06 Tipo MAT MAT MAT MAT EQU EQU Descripcin Plasma citratado del paciente Tubos de vidrio de 12mm x 7.5 cm Micropipetas graduadas de 100 y 200 microlitros Pipetas volumtricas de 1,2 y 5 ml Cronmetros Bao Maria 370C
Reactivos
tem 01 02 03 04 05 Descripcin Reactivo de Tromboplastina Agua destilada
Plasma control normal
Cloruro de calcio 0.025 M Reactivo para PTT

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Procedimiento
Paso
PT Precalentar a 370C los tubos de ensayo Para la reconstitucin y conservacin del reactivo debern seguirse las instrucciones indicadas por el fabricante Precalentar a 370C 0.2 ml de reactivo por cada prueba. Evitar la evaporacin del reactivo no dejndolo a 370C por un tiempo superior a 60 minutos Realizar por duplicado cada prueba iniciando con un control normal Pipetear o.1 ml de plasma en el tubo correspondiente Incubar el plasma 2 3 minutos mnimo y mximo 5 minutos Pipetear 0.2 ml de reactivo preincubado y simultneamente disparar el cronometro Parar el cronometro en el momento de la formacin del coagulo
Consulta
1. En que casos se puede alterar el PT 2. En que casos se puede alterar el PTT 3. En que casos se puede alterar el PT y el PTT
Bibliografa
BERRIO, M. et-al El hemograma, anlisis e interpretacin con las tres generaciones. Editorial Universidad de Antioquia. Medelln, Antioquia 2003. BROWN B. Hematology: priciples and procedures 6 ed. Filadelfia. Lea & Febiger; 1993.
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CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
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Manual de calidad
UC-BAC-BANPag 17 de 42 GL007 MIALE JB. Hematologia medicina de laboratorio 6 ed. Barcelona: Revert; 1985. LEE GR. Et al. Wintrobes clinical hematology. Filadelfia: Williams & Wilkins; 1999.
WILLIAM WJ. Et al. Hematology. 5 ed. Nueva York. San Luis; 1995.
VIVES J.L. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Editorial Salvat.
TURGEON, M. Hematologa clnica. Teora y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno. 2006
ANEXOS
No. Anexo NO APLICA Descripcin
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30 DE NOV 2010
4 HEMOCLASIFICACION DIRECTA E INVERSA Objetivo
Determinar la clasificacin sangunea en relacin con sistema ABO y el sistema RH, efectuando pruebas que identifique el tipo sanguneo de cada uno de los pacientes.
Fundamento
GRUPOS SANGUINEOS El grupo sanguneo es cada uno de los diversos tipos en que se ha clasificado la sangre de las personas en relacin con la compatibilidad de los hemates y suero de otro individuo que la recibe. Estos grupos
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UC-BAC-BANPag 19 de 42 GL007 son cuatro, segn la clasificacin que hizo Landsteiner, clasificacin hoy universal y se denominan: O, A, B, AB. Se caracterizan por las diferentes combinaciones de dos aglutingenos existentes en los glbulos rojos y de dos aglutininas contenidas en el suero. FACTOR Rh: El factor Rh es un aglutingeno encontrado en 1940 por Landsteiner y Weiner, en los glbulos rojos en unos primates (Macacus rhesus) y que tambin existe normalmente en el 85% de los humanos, que por esta causa se denomina Rh positivos. La sangre de estos transfundida a los Rh negativos (15%), provoca en el suero de estos ltimos la formacin de anticuerpos, que en sucesivas transfusiones pueden destruir los glbulos rojos del donante Rh positivo, invalidando as la transfusin y creando efectos adversos. Tambin en el embarazo un feto Rh + puede provocar en la madre Rh la produccin de aglutininas que podrn ser la causa de la enfermedad hemoltica de los recin nacidos. El factor Rh esta constituido por un complejo de seis antgenos fundamentales, formado por tres pares de genes alelos: Cc, Dd, Ee. El antgeno de mayor poder sensibilizante es el D, le siguen en importancia el e y el E. Un grupo sanguneo es una forma de agrupar ciertas caractersticas de la sangre que dependen de los antgenos presentes en la superficie de los glbulos rojos y en el suero de la sangre. Las dos clasificaciones ms importantes para describir grupos sanguneos en humanos son los antgenos y el factor Rh. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden desembocar en hemlisis, anemia, fallo renal, shock y muerte. LOS ANTIGENOS: Las personas con sangre del tipo A tienen glbulos rojos que expresan antgenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antgenos B en el suero de su sangre.
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UC-BAC-BANPag 20 de 42 GL007 Anlogamente, las personas con sangre del tipo B tienen la combinacin contraria, glbulos rojos con antgenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antgenos A en el suero de su sangre. Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antgenos (A o B) en la superficie de sus glbulos rojos, pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antgenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos. A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningn problema a cualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO HERENCIA DEL TIPO ABO: Los grupos sanguneos son heredados de los progenitores. Son controlados por un solo gen con tres alelos: O, A, B El alelo A da tipo A, el B da tipos B y el alelo i da tipos O, siendo A y B dominantes sobre i. As las personas que heredan dos alelos ii tienen tipo O; AA o Ai dan lugar a tipo A; y BB o Bi dan lugar a tipos B. Las personas AB tienen ambos fenotipos debido a que la relacin entre los alelos A y B es de codominancia. Por lo tanto, es prcticamente imposible para unos progenitores AB el tener un hijo con tipo O. HERENCIA DEL FACTOR RH: El factor Rh es heredado de la misma forma, con la diferencia de que hay dos alelos y el Rh es dominante. Los alelos son Rh + y Rh FRECUENCIA: La distribucin de los grupos sanguneos en la poblacin humana no es uniforme. El ms comn es O+, mientras que el mas infrecuente es AB-. Adems, hay variaciones en la distribucin en las distintas subpoblaciones humanas.
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UC-BAC-BANGL007 0+ 40% A+ 34% B+ 9% O7% A6% AB+ 3% B2%
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30 DE NOV 2010
Manual de calidad Pag 21 de 42 AB1%
TIPO FRECUEN CIA
DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO ABO Las pruebas utilizadas para establecer la hemoclasificacin sangunea relacionada a los diversos grupos sanguneos, aprovechan las caractersticas inmunolgicas que expresa cada individuo de acuerdo a su particular codificacin gentica. En dichas pruebas se evidencian los antgenos y/o anticuerpos del grupo sanguneo, de acuerdo a su comportamiento in Vitro. En cuanto al sistema ABO se investigan tanto antgenos o aglutingenos como los anticuerpos o isoaglutininas naturales. Loa glbulos rojos utilizados en estos procedimientos poseen en la membrana los antgenos, adems nos facilitan la visualizacin de la reaccin como si fuesen los indicadores del punto final de la hemoaglutinacin. La hemoaglutinacin se considera la reaccin de Ag Ac de mayor utilidad en el laboratorio de inmunohematologa, por lo que se hace indispensable recordar las caractersticas y las condiciones que modifican dicha reaccin, para poder determinar con claridad los requerimientos ptimos que permitan obtener la mayor constante de equilibrio en cada prueba especifica y en esta forma se asegure la confiabilidad y contribucin exitosa de los procedimientos empleados en el estudio de los grupos sanguneos. HEMOCLASIFICACION: SISTEMA Rh (Ag D) En el sistema Rh, existen varios antgenos: D, C, c, E, e; sin embargo, de rutina, solo se determina la presencia del Ag D en los eritrocitos y de acuerdo a su presencia o ausencia se dice que un individuo es Rh D positivo o Rh D negativo
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UC-BAC-BANGL007 DETERMINACION DEL Ag DEBIL
Consiste en determinar la variante D dbil en una muestra previamente tipificada como Rh: D negativo La determinacin de la variante D dbil, solo se realiza a muestras que por el mtodo manual usual han resultado D negativas
Item 01 Tipo MAT Descripcin Glbulos rojos A, B y O Tubos de ensayo Pipetas pasteur Muestra de sangre con EDTA Suero del paciente Laminas del paciente Palillos Centrifuga
02 03 04
MAT MAT MAT
05
EQU
Reactivos
tem 01 02 03 04 Descripcin Solucin salina 0.85% Anti A, Anti B, Anti A,B Anti D Albumina Bovina
Procedimiento
Paso
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Fecha
Fecha
Fecha

1
001
Fecha:
30 DE NOV 2010
UC-BAC-BANGL007 HEMOCLASIFICACION DIRECTA: A. Mtodo en tubo:
Marque los tubos con Anti A, Anti B, Antti A,B Lavar los glbulos rojos del paciente 3 veces consecutivos en solucin salina y preparar una suspensin final al 3% en dicha solucin. Adicionar: A 2 gotas 1 Gota B 2 Gotas 1 Gota AB 2 Gotas 1 Gota
2 Reactivo anti-A Reactivo anti-B Reactivo anti AB GR paciente 3 Mezclar cada tubo y centrifugar 15 30 segundos Resuspender suavemente los botones celulares observar aglutinacin y
POSITIVO: Aglutinacin con cualquier antisuero. Reacciones positivas 3+ o 4+ de aglutinacin. NEGATIVO: La presencia de una suspensin uniforme de GR (O) 4 HEMOCLASIFICACION DIRECTA: Mtodo en lamina: 5 A
Elaborado por:
Marcar tres laminas portaobjeto como A, B y AB Adicionar: B AB

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Fecha
Fecha
Fecha

UC-BAC-BANGL007 Reactivo anti-A Reactivo anti-B
Fecha:
30 DE NOV 2010
2 Gotas
2 gotas -
Reactivo anti AB
2 Gotas
GR paciente 6
1 Gota
1 Gota
1 Gota
Mezclar cada preparacin con un palillo Rotar manualmente cada lamina Observar aglutinacin y registrar los resultados
POSITIVO: La aglutinacin fuerte de los glbulos rojos en presencia de cualquier anticuerpo ABO. Las reacciones positivas muestran 3+ de aglutinacin NEGATIVO: La presencia de una suspensin uniforme (O) de glbulos rojos. 7 HEMOCLASIFICACION INVERSA: PRUEBA INVERSA EN TUBO: Marcar tres tubos como A, B, O Adicionar:
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Fecha
Fecha
Fecha

8 Suero paciente GR A GR B GR O 9 10 11
001
UC-BAC-BANGL007
Fecha:
30 DE NOV 2010
A 2 Gotas 1 Gota
B 2 Gotas 1 Gota
O 2 Gotas
1 Gota
Incubar de 5 15 minutos a temperatura ambiente Mezclar cada tubo y centrifugar por 15 30 segundos Al terminar la centrifugacin observar el sobrenadante para evidencia la presencia de hemlisis. Resuspender los botones celulares y observar aglutinacin.
POSITIVO: Aglutinacin y/o hemlisis NEGATIVO: Una suspensin homognea de eritrocitos. Prueba directa en lamina: Marcar dos laminas como D y control Adicionar:
12
13
Suero Anti-D Albmina Bovina 22% Sangre 1 Gota 1 Gota Mezclar con palillos cada preparacin Rotar manualmente las laminas y observar aglutinacin. POSITIVO: Aglutinacin de glbulos rojos NEGATIVO: Una suspensin uniforme de glbulos rojos
D 2 Gotas -
Control 2 Gotas
14
OBSERVACIONES: Si la preparacin de glbulos rojos con albmina al 22% presenta aglutinacin, la prueba no se puede interpretar.
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Fecha
Fecha
Fecha
Manual de calidad
UC-BAC-BANPag 26 de 42 GL007 La desecacin en los bordes de la preparacin, no se debe confundir con aglutinacin.
15
Prueba directa en tubo: Lavar los glbulos rojos del paciente tres veces con solucin salina y suspenderlos del 3 5% Marcar dos tubos como D y control Adicionar D 2 Gotas 1 Gota CONTROL 2 Gotas 1 Gota
16 Suero Anti D Albmina Bovina al 22% GR paciente 17
Mezclar suavemente y centrifugar durante 15 -30 segundos Resuspender el botn celular y observar aglutinacin
POSITIVO: La aglutinacin de los glbulos rojos con anti-D NEGATIVO: Una suspensin uniforme de los glbulos rojos con anti-D 18 OBSERVACIONES: Si en el control se observa aglutinacin, la prueba no se puede interpretar, hasta realizar mas anlisis. DETERMINACION DEL Ag DEBIL 19 Lavar los eritrocitos a tipificar 3 veces con solucin salina y suspenderlos al 3 5% Marcar dos tubos con D y Control Adicionar: 20
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Fecha
Fecha
Fecha

UC-BAC-BANGL007 Anti D D 2 Gotas
Fecha:
30 DE NOV 2010
CONTROL -
Albmina Bovina
2 Gotas
GR paciente
1 Gota
1 Gota
21
Mezclar e incubar los tubos a 370C durante 15 30 minutos, segn las especificaciones del fabricante Centrifugar 15 45 seg Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia de aglutinacin. Si el tubo con anti D, los eritrocitos estn fuertemente aglutinados, pero no en el tubo control, registrar la prueba como D positiva y no realizar la fase siguiente con el suero de Coombs Si las clulas no son aglutinadas o los resultados son dudosos, lavar los eritrocitos 3 veces con abundante solucin salina. Decantar la SS. Adicionar: D 1 Gota
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CLAUDIA MONTEJO
22
23 Suero de
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CONTROL 1 Gota
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Fecha
Fecha
Fecha

24
001
UC-BAC-BANGL007 Coombs
Fecha:
30 DE NOV 2010
Mezclar y centrifugar 15 30 seg Resuspender suavemente cada botn celular, examinar para aglutinacin y registrar el resultado teniendo en cuenta la escala de intensidad. Si hay aglutinacin en el tubo de prueba con anti D, entonces el resultado es D positivo. Si el resultado es negativo, adicionar: D 1 Gota CONTROL 1 Gota
25
Clulas control de Coombs 26
Las clulas control de Coombs son GR O Rh D positivo sensibilizados con anti D Repetir la centrifugacin por 15 30 seg. La aglutinacin en este punto refleja la presencia de suero antiglobulina libre y confirma que la reaccin era realmente Negativa
27
OBSERVACIONES: Si se presenta aglutinacin en cualquier fase de la prueba en el tubo control, no se puede realizar la lectura.
Consulta
1. Que es el Fenotipo Bombay 2. Realice una tabla de compatibilidad entre los grupos sanguneos, teniendo en cuenta para cada grupo el Rh (-) y el Rh (+)..
Bibliografa
Elaborado por:
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CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
Fecha
Fecha
Manual de calidad
UC-BAC-BANPag 29 de 42 GL007 BERRIO, M. et-al El hemograma, anlisis e interpretacin con las tres generaciones. Editorial Universidad de Antioquia. Medelln, Antioquia 2003.
BROWN B. Hematology: priciples and procedures 6 ed. Filadelfia. Lea & Febiger; 1993. MIALE JB. Hematologia medicina de laboratorio 6 ed. Barcelona: Revert; 1985. LEE GR. Et al. Wintrobes clinical hematology. Filadelfia: Williams & Wilkins; 1999. WILLIAM WJ. Et al. Hematology. 5 ed. Nueva York. San Luis; 1995. VIVES J.L. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Editorial Salvat. TURGEON, M. Hematologa clnica. Teora y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno. 2006
ANEXOS
No. 1 RESULTADOS DEL LABORATORIO GRUPO NO: _______ INTEGRANTES:
HEMOCLASIFICACCION ABO:
Elaborado por:
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CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
Fecha
Fecha
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UC-BAC-BANPag 30 de 42 GL007 Directa en Directa en tubo Inversa lamina ANTIA ANTIA A B ANTI-B ANTI ANTI-B ANTI O AB AB
Resultado de la muestra analizada: Grupo:____________
No. 2
Hemoclasificacin Rh:
Directa en lamina Anti Control
Directa en tubo Anti D Control
Hemoclasificacin: Ag D DEBIL
D Centrifugacion inmediata Fase Coombs Celulas control

Elaborado por:
CONTROL
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Fecha
Fecha
Fecha

UC-BAC-BANGL007 de Coombs Resultados de la muestra analizada:
Fecha:
30 DE NOV 2010
Rh: _________Ag D dbil: ____________
ANALISIS:
5 COOMBS DIRECTO E INDIRECTO
Objetivo Conocer el procedimiento de las pruebas de compatibilidad y adquirir destreza en la realizacin del coombs directo e indirecto Interpretar cada uno de los resultados y tomar decisiones en las incompatibilidad de las pruebas
Fundamento
COOMBS DIRECTO Se usa para demostrar in vivo la cobertura de los eritrocitos con globulinas. Es til en la investigacin de anemias hemolticas
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CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
Fecha
Fecha
Manual de calidad
UC-BAC-BANPag 32 de 42 GL007 autoinmunes, hemlisis inducida por drogas, eritroblastosis fetal, reacciones aloinmunes contra eritrocitos recientemente transfundidos. Significado de los resultados anormales: Un examen de Coombs directo positivo indica anticuerpos contra los glbulos rojos, los cuales a su vez pueden indicar la presencia de una de las siguientes condiciones Anemia hemoltica autoinmune sin otra causa subyacente Anemia hemoltica inducida por medicamentos Eritroblastosis fetal Mononucleosis infecciosa Infecciones por Micoplasma Sfilis Leucemia linfoctica crnica u otro trastorno linfoproliferativo Lupus eritematoso sistmico u otra condicin reumatolgica Reaccion a transfusin como la ocasionada por unidades de sangre de compatibilidad inadecuada Esta prueba tambin es anormal en algunas personas sin que exista una causa clara, especialmente en personas de edad avanzada. Hasta el 3% de las personas que estn hospitalizadas sin un trastorno sanguneo conocido tendrn un resultado anormal en el examen de Coombs directo. COOMBS INDIRECTO Detecta anticuerpos hacia los glbulos rojos en la circulacin. Es importante para la determinacin de la compatibilidad entre dador y receptor en el caso de transfusiones de sangre. Detecta tambin la presencia de anticuerpos anti Rh en la madre durante el embarazo. Evala la necesidad de administrar inmunoglobulina Rh (Ag D). Ayuda a confirmar el diagnostico de anemia hemoltica. Significado de los resultados anormales:
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Fecha
Fecha
Fecha

001
UC-BAC-BANGL007
Fecha:
30 DE NOV 2010
Test positivo indica la presencia de anticuerpos circulantes contra los glbulos rojos En la embarazada con sangre Rh negativo, un test con titulo positivo alto significa que el feto puede desarrollar la enfermedad hemoltica del recin nacido. CELULAS CONTROL DE COOMBS
Cuando las pruebas de la antiglobulina, directa e indirecta, dan negativas, es necesario verificar el reactivo antiglobulina. Una manera fcil es, a partir de la prueba negativa, poner la suspensin en contacto con eritrocitos O Rh+, sensibilizados con anti D conocidos como clulas control de coombs y leer de nuevo. INTERPRETACION: La lectura con las clulas control de Coombs deben dar positivas, no mayor de dos cruces. Es importante recordar que una prueba de la antiglobulina negativa, sin control, puede interpretarse como una prueba negativa, falsa.
Item 01 Tipo MAT Descripcin Coombs directo 02 MAT Muestra de sangre con anticoagulante EDTA Tubos de ensayo Tapones de caucho Gradillas Pipeta pasteur
Coombs indirecto Suero problema

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Fecha
Fecha
Fecha
Manual de calidad
UC-BAC-BANPag 34 de 42 GL007 Muestra de sangre con anticoagulante EDTA Tubos de ensayo Micropipetas Gradillas Pipetas pasteur MAT EQU Bao Maria a 370C, centrifuga
04 06
Reactivos
tem 01 02 03 04 Descripcin Solucin salina al 0.85% Suero de coombs Albmina bovina Suero anti D
Procedimiento
Paso 1 Descripcin PRUEBA DE COOMBS DIRECTO 2 Suero de Coombs GR paciente GR O positivo
Elaborado por:
Lavar los eritrocitos 3 veces con SS y suspenderlos del 3 5% Marcar dos tubos como CD y control Adicionar: CD 2 Gotas 1 Gota Revisado por:
CLAUDIA MONTEJO
CONTROL 2 Gotas 1 Gota

Aprobado por:
Fecha
Fecha
Fecha

3
001
Fecha:
30 DE NOV 2010
Manual de calidad
UC-BAC-BANPag 35 de 42 GL007 Tambin puede realizar su control adicionando dos gotas del GR del paciente y dos gotas de SS Centrifugar 15 45 seg Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia de aglutinacin Graduar la aglutinacin 0, 1+, 2+, 3+, 4+. Si el resultado es negativo, adicionar: CD 1 Gota CONTROL 1 Gota
4 Clulas control de Coombs 5 Repetir la centrifugacin de 15 45 seg La aglutinacin en este punto refleja la presencia de suero antiglobulina libre y confirma que la reaccin era realmente negativa.
6 OBSERVACIONES: Si se presenta aglutinacin en cualquier fase de la prueba en el tubo control, no se puede realizar la lectura. 7 PRUEBA DE COOMBS INDIRECTO: 8 GR Paciente Suero del
Elaborado por:
Separar el suero del paciente con el que se va a realizar la prueba Lavar los eritrocitos del paciente 3 veces con SS y suspenderlos del 3 5% Marcar dos tubos como CI y Control Adicionar:
CI 2 Gotas 2 Gotas
Revisado por:
CLAUDIA MONTEJO
CONTROL 2 Gotas 2 Gotas

Aprobado por:
Fecha
Fecha
Fecha

UC-BAC-BANGL007 paciente 10 Albmina Bovina Solucin salina al 0.85% 11 12 Suero de Coombs Solucin salina 2 Gotas al 0.85% Centrifugar 15 45 seg Resuspender los botones celulares suavemente observar la presencia de aglutinacin Graduar la aglutinacin 0, 1+, 2+, 3+, 4+. Si el resultado es negativo, adicionar: CI 2 Gotas CONTROL Incubar a 370C por 20 minutos Despus de la incubacin los glbulos rojos se lavan tres veces con SS al 0.85% En el ultimo lavado descartar la SS al 0.85% hasta que quede la muestra en las paredes del tubo Adicionar CI 2 Gotas CONTROL 2 Gotas Centrifugar 15 45 seg Resuspender los botones celulares observar la presencia de aglutinacin Si el resultado es negativo, adicionar:
Fecha:
30 DE NOV 2010
suavemente
13
14 Clulas control de Coombs

Elaborado por:
CD 1 Gota
CONTROL 1 Gota
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CLAUDIA MONTEJO
Aprobado por:
Fecha
Fecha
Fecha

15 Repetir la centrifugacin de 15 45 seg La aglutinacin en este punto refleja la presencia de suero antiglobulina libre y confirma que la reaccin era realmente negativa.
001
UC-BAC-BANGL007
Fecha:
30 DE NOV 2010
16
CELULAS CONTROL DE COOMBS: Lavar tres veces glbulos rojos O+ Colocar 8 a 10 gotas de suspensin de glbulos rojos O positivos Colocar la misma cantidad de antisuero anti D al tubo Incubar a 37oC por 30 minutos Lavar de 5 a 6 veces en solucin salina 0.85% Resuspender al 3-5% en solucin salina 0.85% Probar estos glbulos rojos con una gota de suero de Coombs y buscar aglutinacin Este control dura 4-5 dias a 4oC
Consulta
1. Una de las fases de la prueba de coombs indirecta requiere albmina, mencione cul es la funcin de los potenciadores y que otros se pueden utilizar. 2. Cul es la utilidad de las pruebas de coombs, explique 3. De acuerdo a las diferentes fases en las que se realizan las pruebas de coombs, indique que clase de anticuerpos se pueden presentar
Bibliografa
Descripcin BERRIO, M. et-al El hemograma, anlisis e interpretacin con las tres generaciones. Editorial Universidad de Antioquia. Medelln, Antioquia 2003. BROWN B. Hematology: priciples and procedures 6 ed. Filadelfia. Lea & Febiger; 1993.
Elaborado por:
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CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
Fecha
Fecha
Manual de calidad
UC-BAC-BANPag 38 de 42 GL007 MIALE JB. Hematologia medicina de laboratorio 6 ed. Barcelona: Revert; 1985. LEE GR. Et al. Wintrobes clinical hematology. Filadelfia: Williams & Wilkins; 1999.
WILLIAM WJ. Et al. Hematology. 5 ed. Nueva York. San Luis; 1995.
VIVES J.L. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Editorial Salvat.
TURGEON, M. Hematologa clnica. Teora y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno. 2006
ANEXOS
No. Anexo No. Anexo Descripcin Prueba de Coombs directa CD Centrifugacin inmediata Fase Coombs Clulas control de Coombs Resultados de la muestra analizada: Control
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CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
Fecha
Fecha

UC-BAC-BANGL007
Fecha:
30 DE NOV 2010
Prueba de Coombs indirecta CI Centrifugacin inmediata Fase albmina Fase Coombs Clulas control de Coombs Control
Resultados de la muestra analizada:
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Fecha
Fecha
Fecha

UC-BAC-BANGL007
Fecha:
30 DE NOV 2010
6 PRUEBAS CRUZADAS Objetivo
Conocer el procedimiento de las pruebas de compatibilidad y adquirir destreza en la realizacin del Coombs directo e indirecto Interpretar cada uno de los resultados y tomar decisiones en las incompatibilidad de las pruebas
Fundamento
ANTIGLOBULINA HUMANA O DE COOMBS La prueba de antiglobulina o de Coombs, es un procedimiento necesario en el trabajo cotidiano de todo Banco de sangre, para demostrar la presencia de anticuerpos incompletos de grupos sanguneos, de significacin clnica, fracciones del complemento o algunos antgenos de los eritrocitos. Los anticuerpos incompletos, usualmente Inmunoglobulina G (IgG), son capaces de unirse a las clulas rojas, pero no de aglutinarlas cuando estn suspendidas en solucin salina, por las caractersticas de su molcula, el tamao muy
Elaborado por:
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Fecha
Fecha
Fecha
Manual de calidad
UC-BAC-BANPag 41 de 42 GL007 pequeo; sin embargo cuando se agrega otro anticuerpo, anti Ig G, la aglutinacin se hace posible. Este anticuerpo Ig G en si, es el suero antiglobulina. La prueba tiene una utilidad clnica muy amplia; es imprescindible cuando se trata de establecer la naturaleza inmune de diversas situaciones como: una reaccin transfusional, la enfermedad hemoltica del recin nacido, una anemia hemoltica relacionada con drogas o con mecanismos autoinmunes. Forma parte de estudios pretransfusionales que deben realizarse tanto al donante como al receptor, como las pruebas de compatibilidad y la deteccin e identificacin de anticuerpos inesperados. El principio de la prueba de la antiglobulina es demostrar anticuerpos incompletos, Inmunoglobulina G, o complemento, mediante el suero antiglobulina, el cual contiene un anticuerpo anti Ig G y / o un anticuerpo anticomplemento. El suero antglobulina se prepara a partir de colonias diferentes de conejos inmunizados con globulinas humanas. Los animales se inyectan con Ig G o betaglobulinas, altamente purificadas, las cuales actan como inmunogenos y provocan una respuesta de anticuerpos contra esas globulinas humanas: anticuerpos anti Ig G o anticuerpos contra el complemento. La prueba de la antiglobulina se hace mediante dos formas, la prueba directa y la prueba indirecta; son mtodos similares, pero se diferencian en la reaccin de sensibilizacin de las clulas rojas, es decir la unin entre antgeno y su correspondiente anticuerpo. En la prueba directa se demuestra esa sensibilizacin in vivo, en la prueba indirecta in Vitro. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD Cuando a un paciente se le va a realizar una transfusin de cualquier componente que contenga glbulos rojos, se debe clasificar para los sistemas ABO y Rh (Ag D) y buscar el componente del mismo grupo ABO y Rh (Ag D). Adems debe realizarse pruebas de compatibilidad,
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Fecha
Fecha
Fecha
Manual de calidad
UC-BAC-BANPag 42 de 42 GL007 entre el suero o plasma del receptor y los eritrocitos del donante
Item 01 Tipo MAT Descripcin Muestra de sangre con anticoagulante EDTA Pipetas pasteur Tubos de ensayo Micropipetas Gradillas Bao Maria a 370C Centrfuga
02 03 04 05 06
MAT MAT MAT EQU EQU
Reactivos
tem 01 02 03 04 Descripcin Suero problema Albmina Bovina Suero de Coombs
Solucin salina al 0.85%
Procedimiento
Paso 1 Descripcin La prctica consiste en buscar 1 unidad de sangre compatible.
Elaborado por:
Recolectar una muestra de sangre del receptor en tubo seco para obtener suero y en tubo con EDTA para lavar glbulos rojos Separar el suero del receptor Lavar los eritrocitos del receptor tres veces con solucin salina y resuspenderlos del 3-5%
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Fecha
Fecha

2
001
Fecha:
30 DE NOV 2010
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UC-BAC-BANPag 43 de 42 GL007 Disponer de los tubos pilotos la bolsa proveniente del donante Lavar los glbulos rojos provenientes de los pilotos del donante tres veces con solucin salina y resuspenderlos del 3-5% El procedimiento que se describe a continuacin se debe realizar para cada una de las unidades a transfundir Marcar dos tubos uno con el numero de la bolsa y el otro como autocontrol Adicionar: FASE SALINA: PRUEBA CRUZADA 2 Gotas 1 Gota AUTOCONTROL 2 Gotas 1 Gota
Suero receptor GR donante GR receptor 4
Centrifugar 30 45 seg Observar la presencia de hemlisis en el sobrenadante. Resuspender los botones para observar aglutinacin; si existe graduarla segn la escala La presencia de hemlisis o aglutinacin, constituye una prueba cruzada incompatible, una suspensin homognea de eritrocitos se considera como una prueba cruzada compatible en la Fase Salina o inmediata.
FASE ALBUMINA: PRUEBA CRUZADA 2 Gotas AUTOCONTROL 2 Gotas
Albmina bovina 6
Elaborado por:
Incubar 15-30 minutos a 370C

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Fecha
Fecha
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UC-BAC-BANPag 44 de 42 GL007 Centrifugar 30 45 seg Observar la presencia de hemlisis en el sobrenadante. Resuspender los botones para observar aglutinacin; si existe graduarla segn la escala La presencia de hemlisis o aglutinacin, constituye una prueba cruzada incompatible, una suspensin homognea de eritrocitos se considera como una prueba cruzada compatible en la Fase de Albmina Lavar tres veces con SS y decantar bien el sobrenadante en el ultimo lavado FASE DE COOMBS: PRUEBA CRUZADA 2 Gotas AUTOCONTROL 2 Gotas
Suero de Coombs 8
Centrifugar 30 45 seg Resuspender los botones para observar aglutinacin. Si existe, graduarla segn la escala La presencia de hemlisis o aglutinacin, constituye una prueba cruzada incompatible, una suspensin homognea de eritrocitos se considera como una prueba cruzada compatible en la Fase de Coombs Si el resultado es negativo, adicionar: PRUEBA CRUZADA 1 Gota AUTOCONTROL 1 Gota
Clulas control de Coombs 10
Centrifugar 30 45 seg Observar aglutinacin y registrar los resultados La presencia de hemlisis o aglutinacin, confirma que la prueba era realmente negativa en la fase de Coombs y que se ha trabajado correctamente. (Este es un
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Fecha
Fecha
UC-BAC-BANGL007 control interno que no se informa). OBSERVACIONES:
11
En algunos centros se emplean medios diferentes a la albmina para disminuir el potencial Z; entre ellos estn la solucin salina de baja fuerza inica (LISS), el Polietilenglicol (PEG) y el Polibreno de baja intensidad (LIP). Para cada uno existen protocolos que se deben seguir cuidadosamente El autocontrol debe permanecer negativo siempre Se deben registrar los resultados para cada unidad. Si la prueba es incompatible la unidad no se debe trasfundir, se debe buscar otra unidad de sangre y realizar las pruebas cruzadas correspondientes.
Consulta
1. Qu es un Banco de Sangre 2. Qu tipos de Banco de Sangre existen 3. Qu es un donante y cules son los criterios para proteger al donante 4. Qu es el receptor y cules son los criterios para proteger al receptor 5. Defina: Flebotoma teraputica. Donacin autloga. Hemafresis. Receptor especifico. Donacin dirigida. Donacin Voluntaria 6. Cules son las pruebas fsicas y de laboratorio que se realizan antes de la donacin
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Fecha

UC-BAC-BANGL007
Fecha:
30 DE NOV 2010
7. Cules son las condiciones que se deben tener en cuenta para que la flebotoma sea un xito. 8. Cules son los criterios de autoexclusin de un paciente
9. Cules son los parmetros postdonacin 10. 11. Enumere algunas reacciones adversas a la donacin Cules son los componentes que conforma la sangre total
12. Cules son las pruebas de laboratorio que se le realiza a cada unidad de sangre.
Bibliografa
Descripcin BERRIO, M. et-al El hemograma, anlisis e interpretacin con las tres generaciones. Editorial Universidad de Antioquia. Medelln, Antioquia 2003. BROWN B. Hematology: priciples and procedures 6 ed. Filadelfia. Lea & Febiger; 1993. MIALE JB. Hematologia medicina de laboratorio 6 ed. Barcelona: Revert; 1985. LEE GR. Et al. Wintrobes clinical hematology. Filadelfia: Williams & Wilkins; 1999. WILLIAM WJ. Et al. Hematology. 5 ed. Nueva York. San Luis; 1995. VIVES J.L. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Editorial Salvat. TURGEON, M. Hematologa clnica. Teora y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno. 2006
ANEXOS
No. 1
Elaborado por:
Descripcin
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Fecha
Fecha
UC-BAC-BANGL007 Prueba Cruzada: Prueba Cruzada Fase Salina Fase Albmina Fase de Coombs Clulas control de Coombs
Autocontrol
Interpretacin: ______________________________________________________
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CLAUDIA MONTEJO
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Fecha
Fecha

Manual de Hemostasia y Banco de Sangre Actualizado

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GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formacin Versin: Cdigo: 001

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UC-BAC-BANGL007 MAT Pipeta para la dilucin de hemates MAT Agua destilada

MAT MAT MAT MAT MAT EQU

CLAUDIA XIMENA LOZANO TRUJILLO

UC-BAC-BANGL007 No. Anexo NO APLICA

2 TIEMPO DE SANGRIA Objetivo

CLAUDIA XIMENA LOZANO TRUJILLO

GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formacin Versin: Cdigo: 001

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Papel de filtro Lancetas desachables (Simplate) Tensimetro Cronometro

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Manual de calidad Pag 9 de 42

ANEXOS (Si los hay)

GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formacin Versin: Cdigo: 001

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3 TIEMPO DE PROTROMBINA (PT) Y TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA TISULAR (PTT) Objetivo

CLAUDIA XIMENA LOZANO TRUJILLO

GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formacin Versin: Cdigo: 001

Manual de calidad Pag 13 de 42

GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formacin Versin: Cdigo: 001

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Manual de calidad Pag 15 de 42

Cloruro de calcio 0.025 M Reactivo para PTT

CLAUDIA XIMENA LOZANO TRUJILLO

GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formacin Versin: Cdigo: 001

Manual de calidad Pag 16 de 42

VIVES J.L. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Editorial Salvat.

TURGEON, M. Hematologa clnica. Teora y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno. 2006

GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formacin Versin: Cdigo: 001

Manual de calidad Pag 18 de 42

4 HEMOCLASIFICACION DIRECTA E INVERSA Objetivo

CLAUDIA XIMENA LOZANO TRUJILLO

CLAUDIA XIMENA LOZANO TRUJILLO

GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formacin Versin: Cdigo: 001

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TIPO FRECUEN CIA

UC-BAC-BANGL007 DETERMINACION DEL Ag DEBIL

MAT MAT MAT

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UC-BAC-BANGL007 HEMOCLASIFICACION DIRECTA: A. Mtodo en tubo:

Marcar tres laminas portaobjeto como A, B y AB Adicionar: B AB

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CLAUDIA XIMENA LOZANO TRUJILLO

16 Suero Anti D Albmina Bovina al 22% GR paciente 17

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Clulas control de Coombs 26

Resultado de la muestra analizada: Grupo:____________

Directa en lamina Anti Control

Directa en tubo Anti D Control

D Centrifugacion inmediata Fase Coombs Celulas control

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Rh: _Ag D dbil: ____