Protocolo para Extraccin de DNA para mesfilos.

1. A 300 L de medio con microorganismos centrifugar a 14.000 rpm por 15 minutos. 2. Botar el sobrenadante, lavar el pellet con TRIS HCl 20 mM pH 7,5, agregar EDTA 0,6 mM. 3. Centrifugar el pellet a 14.000 rpm por 15 minutos. 4. Sacar sobrenadante y resuspender pellet con 200 L de TRIS-HCl 50 mM pH 7,5, agregar 2 L lisozima 10 mg/mL. 5. Incubar a 37C por 1 hora. 6. Agregar 200 L o 300 L (dependiendo del tamao y dureza del pellet) de SDS 10%. 7. Dejar actuar a 37C por 30 minutos. 8. Si son los microorganismos muy duros dar un pulso de sonicasin por 10 segundos. 9. Luego sobre el mismo extracto, realizar una extraccin fenol-cloroformo (1Vol/1Vol). 10. Repetir la extraccin fenol-cloroformo. 11. Dejar precipitar en etanol absoluto frio (-20C). Toda la noche a -20C. 12. Centrifugar 30 minutos a 4C. 13. Secar pellet a temperatura ambiente.