Tcnicas de estudio citolgico

Microscopa

 Consiste en el aumento del objeto a observar, dado que el ojo humano tiene un poder de resolucin de 0,1 mm (100 m), y las clulas tienen tamaos inferiores. Hay dos tipos de microscopa:

 - Microscopa ptica: utiliza luz visible y lentes pticas para aumentar la imagen. Su poder de resolucin puede llegar a 0,2 m , con lo que un objeto puede ser ampliado un mximo de 1500 veces. Permite la observacin de clulas vivas.

 - Microscopa electrnica: utiliza haces de electrones y lentes electromagnticas, consiguiendo un poder de resolucin de 100 (1 = 10-10m), ampliando un objeto hasta 250.000 veces, que mediante tratamiento ptico digital puede llegar hasta el milln de aumentos.

Fraccionamiento celular:

 Consiste en la rotura de las clulas mediante un proceso osmtico, ultrasonidos, lisis enzimtica de manera mecnica, y posteriormente una centrifugacin que concentrar en diversas fases a los distintos orgnulos segn su tamao, con lo que se obtendrn separadamente, permitiendo ms fcilmente su estudio.

 El fraccionamiento celular permite separar los componentes de las clulas. Las membranas y organelos celulares suelen separarse mediante centrifugadoras, aparatos que hacen girar tubos de ensayo. Esto ejerce una fuerza centrfuga en el contenido de los tubos, que sedimenta las partculas suspendidas en la solucin (como los organelos y membranas de clulas).

 Despus de la centrifugacin algunas de las partculas forman un condensado en el fondo del tubo. Las diferentes partes celulares tienen densidad distinta, lo que permite separarla en fracciones celulares al centrifugar la suspensin a velocidad creciente (centrifugacin diferencial)

 Las membranas y los organelos de los condensados resuspendidos pueden purificarse despus mediante centrifugacin por gradiente de densidad. Dado que las densidades de los organelos y las membranas difieren, cada uno emigrar durante la centrifugacin y formar una banda a una altura distinta en el gradiente.

cito qumica

 Mediante reacciones coloreadas, enzimticas de inmunofluorescencia, se averigua la composicin bioqumica de las estructuras celulares, su localizacin y su funcionamiento.

 La citoqumica estudia la composicin qumica de la clula y permite detectar la localizacin topogrfica de algunos principios inmediatos, enzimas, metales pesados y otras sustancias. Se considera como un nexo de unin entre la morfologa y la bioqumica.

 En una reaccin bioquica hay tres pasos fundamentales: 1.- Fijacin: para preservar las estructuras y reactividad funcional celulares evitando fenmenos nocivos para las mismas e impidiendo tambin la difusin de componentes bioqumicos entre los diferentes compartimentos celulares as como al medio extracelular. Existen diversos fijadores: metanol, etanol, acetona, glutaraldehdo, formaldehdo, etc. 2.- Incubacin en el medio de reaccin: como consecuencia se liberar unos productos que bien por si mismos, o al combinarse con otra sustancia presente, dan lugar a un precipitado visible en el lugar de la reaccin. 3.- Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reaccin y permitir una ptima visualizacin del ncleo y del citoplasma. Las reacciones deben tener 3 caractersticas: sensibilidad, especificidad y reproductibilidad.

 PAS La reaccin de PAS o del cido perydico de Schiff se basa en la rotura de los enlaces -C-C- presentes en los carbohidratos por la accin del cido perydico, potente agente oxidante, liberndose grupos aldehdo que al combinarse con el reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo prpura intenso. La reaccin del PAS ha perdido utilidad en el diagnstico hematolgico despus de la aparicin de mejores marcadores. Sigue teniendo inters en la diferenciacin de diferentes tipos de leucemias linfoblsticas, en la eritroleucemia y en diversas mielodisplasias.

 PEROXIDASA La demostracin citoqumica de esta enzima se basa en la accin oxidante de la peroxidasa sobre el substrato, bencidina, en presencia de perxido de hidrgeno, apareciendo un precipitado amarillo ocre en el lugar del citoplasma en donde se ha producido la reaccin.

 FOSFATASA ALCALINA La fosfatasa alcalina es una hidrolasa perteneciente al grupo de las fosfomonoesterasas; hidroliza monosteres del cido fosfrico, actuando a un pH de 9,1 a 9,6; ligeros de pH determinan una rpida inactivacin de la enzima. La demostracin citoqumica se basa en la hidrlisis de ciertos substratos, de los cuales se liberan unos productos intermedios que combinados con una sal diazoica dan un precipitado coloreado.

 FOSFATASA ACIDA Es una enzima hidroltica perteneciente al grupo de las fosfomonoesterasas, que acta sobre los steres del cido fosfrico; su pH ptimo de actuacin oscila entre 4,7 y 5,5. Se trata de una enzima de ubicacin lisosmica. La demostracin citoqumica se basa en la hidrlisis del substrato naftol-AS-Bi-fosfato, liberndose unos productos intermedios que al combinarse con una sal diazoica dan un precipitado de color rojo anaranjado en el citoplasma

 ESTERASAS Son un grupo de enzimas capaces de hidrolizar steres en sus componentes cidos y alcoholes. Existen diferentes variedades segn el substrato empleado.

 HIERRO (Fe) El estudio de la hemosiderina mediante la reaccin de Perls, asociada a la valoracin conjunta del n de sideroblastos y del Fe de depsito de los macrfagos medulares, constituye un estudio imprescindible en la evaluacin de algunos sndromes anmicos de etiologa oscura. El Fe de depsito se encuentra en el interior de las clulas en forma de agregados o grnulos de hemosiderina detectables citoqumicamente mediante la reaccin de Perls. Esta reaccin se basa en la liberacin de los iones frricos de su unin con las protenas por la accin del cido clorhdrico; dichos iones frricos al reaccionar con el ferrocianuro potsico dan un precipitado azul verdoso de ferrocianuro frrico

Otras tecnicas
lisozima o muramidasa srica, reduccin del nitroazul de tetrazolio, determinacin de Hb fetal etc. tcnicas inmunocitoqumicas que a buen seguro tendrn cada vez mayor relevancia en el quehacer cotidiano de un laboratorio de diagnstico de morfologa sangunea

Radio isotopos

Operadores manejando telemanipuladores en la planta de produccin de radioistopos

Operadores manejando telemanipuladores en la planta de produccin de radioistopos

Un misil inteligente del tamao de una molcula: la infografa muestra un anticuerpo monoclonal (MAB) dirigido contra el antgeno CD-20, tpico de las clulas blancas cancerosas de los linfomas del tipo No Hodgkins y de la leucemia linfoctica crnica. Algunas firmas biotecnolgicas le ponen a estos misiles una carga nuclear: un tomo de Ytrio-90.

Una tomografa por emisin de positrones detecta varios "focos calientes" dispersos en el torso y una gran masa central, probablemente correspondientes a formaciones neoplsicas

 La visibilidad relativamente alta de sus aplicaciones mdicas suele opacar el papel de los radioistopos en otros rdenes de la vida moderna, como la industria, la agricultura y la preservacin de alimentos. Pese a las tecnologas de secado, enlatado, refrigerado, congelado, liofilizado y conser- vacin qumica, el mundo pierde rutinariamente entre el 10 y el 30 por ciento de sus cosechas debido a la accin de insectos, bacterias y hongos, o debido a procesos madurativos del propio producto

 La irradiacin con rayos gamma en distintas dosis ha probado ser muy barata y efectiva para la preservacin casi indefinida de granos, frutas fresca, productos secos, carnes y otros alimentos, para impedir su germinacin o maduracin, e incluso para su total esterilizacin parasitolgica. Los alimentos irradiados no se vuelven radiactivos. Est adems comprobado que la irradiacin no afecta las condiciones organolpticas de los productos ni sus cualidades alimenticias. El nico lmite a este mtodo para muchos alimentos es una vez ms- el temor de muchas personas a todo aquello relacionado con la radiactividad.