CENTRO DE BIOCIENCIAS CAMPUS IV

VARIABILIDAD FLORAL DE Jatropha curcas L. DEL SUR DE MXICO TESIS

QUE PARA OBTENER EL TTULO DE

INGENIERO BIOTECNLOGO
PRESENTA

EDILMA PREZ CASTILLO

DIRECTOR DE TESIS

DR. ISIDRO OVANDO MEDINA

ASESOR

DR. MIGUEL SALVADOR FIGUEROA

TAPACHULA; CHIAPAS, JUNIO 2012.

DEDICATORIA Gracias primeramente a ti Dios padre; por la vida, la inteligencia que en mi has puesto, por darme ms de lo que necesito, por los momentos buenos y malos ya que de ellos aprendemos ms de lo que esperamos. Por la oportunidad de concluir una fase ms en mi vida. A mis padres; Ignacio Prez Muoz y Vidalicia Castillo Yoc, quienes me dieron la vida, gracias por el apoyo incondicional, por la confianza que depositaron m, que sin esperar nada a cambio me dieron todo, porque siempre me guiaron por un camino de rectitud y me ensearon tambin que es lo mejor, por el gran esfuerzo y sacrificio que hicieron para concluir una fase ms en mi vida este logro tambin es de ustedes. Gracias porque a ustedes les debo todo lo que soy y s que nunca podre recompensrselos.Los amo papitos. A mis hermanos; Marlin, Neydali y Jos Ignacio, por su inmenso cario, por los bellos momentos que han compartido conmigo desde la infancia, por apoyarme siempre con muestras de afecto y darme nimos para alcanzar esta meta tan importante en mi carrera profesional. Gracias hermanitos los quiero mucho!!! A mi hermosa sobrina Renata por llenarme de felicidad con su llegada. A mis abuelitos Juan Antonio y Mercedes por sus consejos y quienes me han heredado el tesoro ms valioso que puede drsele a un hijo "sus padres". A Mayrover Santiago, porque eres la persona ms importante en mi vida, gracias mi amor por lo bellos momentos que has compartido conmigo por llegar a mi vida y estar conmigo en esta fase tan importante, por darme siempre lo mejor de ti sin esperar nada a cambio, por dedicarme tiempo e impulsarme alcanzar mis metas. A mis amigos y compaeros de grupo Laura, Crisely, Karina, Tirzo, Gaby, Tort, Ricardo, Fernando y Jorge, por esos momentos inolvidables porque siempre estuvimos juntos en las

buenas y en las malas. De manera muy especial gracias Lau, Cris y Kary por su amistad incondicional. A mis amigos de laboratorio, Laura, Crisely, Tirzo, Calderon, Alex, Melesio, Giezy, Frank, Santos, Leny, Leydi, Gerardo, Sandy, Pablo y Magaa, Obed, porque de una u otra forma compartieron conmigo esta experiencia.

Y a todas aquellas personas que comparten conmigo este triunfo. Gracias.

AGRADECIMIENTOS A la Universidad Autnoma de Chiapas y al Centro de Biociencias por permitirme formar parte de su comunidad estudiantil, al laboratorio de Investigacin por dejarme ser parte de grupo de trabajo. Quiero agradecer sinceramente aquellas personas que compartieron sus conocimientos conmigo para hacer posible la conclusin de esta tesis, en especial al Dr. Isidro Ovando Medina, por haber tenido paciencia y confianza en m, por el esfuerzo, tiempo y dedicacin para culminar este trabajo, gracias por sus conocimientos adquiridos. A los doctores Miguel Salvador Figueroa y Ma. De Lourdes Adriano Anaya, por las asesoras y aportaciones que me brindaron conocimientos. A M.B Manuel Rabanales, porque siempre estuvo al pendiente de los avances obtenidos y ofrecindome su ayuda para tener este logro. Al M. C. Alfredo Vzquez Ovando por su colaboracin y comentarios positivos para la elaboracin de esta tesis. A la I.B.T Gemelli, M.B Rito, M. B. Gamaliel, por la amistad brindada y por el apoyo recibido durante esta estancia. A mis profesores y profesoras. Sus forma de ensear, todas diferentes y caractersticas, me incentivaron en muchos sentidos a seguir adelante y sin ustedes esto no hubiese sido posible. A mis padres por el cario y apoyo moral que siempre he recibido de ustedes y con el cual he logrado culminar mi esfuerzo, terminando as mi carrera profesional, que es para m la mejor de las herenciaslos quiero mucho.

para culminar este trabajo y por el apoyo

acadmico gracias, pero lo ms importantes por ofrecerme lo mejor de ustedes. Sus

PRESENTACIN Como todas los gneros de la familia Euphorbiaceae, Jatropha tiene distribucin natural en todos los continentes, de manera que existen especies nativas del Viejo y el Nuevo Mundo, por lo que se considera que su especiacin ocurri por vicarianza, es decir, el gnero se origin en el antiguo continente de Gondwana y con su separacin en frica y Sudamrica tuvieron historias evolutivas diferenciadas. Especialmente J. curcas, considerada en muchos estudios como la especie ms plesiomrfica o primitiva, es americana y posiblemente Mesoamericana. Algunas teoras recientes postulan que un taxn primitivo migr a travs del Istmo de Panam hasta Mxico, donde dio origen a las especies mexicanas que tienen caractersticas plesiomrficas, incluyendo J. curcas. Bajo la anterior hiptesis se plante el trabajo de tesis de Edilma Prez Castillo, quien estudi la diversidad gentica de J. curcas colectada en el Sur de Mxico utilizando marcadores morfolgicos florales. La idea se centr en el hecho que la diversidad es mayor en el centro de origen de la especie que en los sitios donde ha sido introducida, como en la zona tropical de Asia. Sus resultados mostraron no solo la variacin en caracteres florales, sino evidenci que esta especie tiene genotipos con caractersticas sexuales diversas. Hasta la fecha se saba que J. curcas es una especie monoica, con ejemplares ocasionalmente hermafroditas y algunos genotipos femeninos, mientras que el presente estudio se reportan adems plantas masculinas y distintos tipos de hermafroditas. Es interesante que los resultados de este estudio morfolgico estn en concordancia con los de estudios genticos usando marcadores moleculares reportados previamente, lo cual indica que los caracteres florales son conservados y heredables, lo que los convierte en confiables indicadores de diversidad.

Contenido Resumen 1.- Introduccin 2.- Materiales y mtodos 2.1 Sitio de estudio 2.2 Material biolgico 2.3 Contabilizacin de inflorescencias 2.4 Clasificacin de las flores 2.5 Caracteres determinados 2.6 Manejo de datos y anlisis estadstico 3.- Resultados y discusin 3.1 Dinmica de florecimiento 3.2 Sexo de las flores producidas por las accesiones de J. curcas 3.3 Variacin de J. curcas en caracteres florales 3.4 Anlisis discriminantes de los caracteres morfolgicos de las flores 3.5 Anlisis de conglomerados de los caracteres morfolgicos de las flores 4.- Conclusiones 5.- Referencias

Paginas 1 2 5 5 5 5 7 7 7 9 9 11 13 15 22 26 27

Variabilidad Floral de Jatropha curcas del Sur de Mxico. Prez-Castillo Edilma, Ovando-Medina Isidro, Salvador- Figueroa Miguel Centro de Biociencias, Universidad Autnoma de Chiapas; carretera a puerto Madero Km 2.0, Tapachula Chiapas. C.P 30700. Tapachula Chiapas Mxico. *Autor a quien debe dirigirse la correspondencia; E-mail:piscis_edicaz@hotmail.com; Tel. + 52-962-6427972; Fax. 019626427972. Resumen El estudio de la variacin morfolgica floral es prioridad de investigacin en Jatropha curcas L. Aunque se han realizado algunos estudios sobre morfologa floral, solo se han estudiado accesiones asiticas, por lo que hacen falta estudios en la regin mesoamericana, la cual es el centro de diversificacin de esta planta. Por lo anterior, se estudi la variabilidad morfolgica floral de J. curcas del sur de Mxico, mediante el uso de caracteres florales como: spalos, ptalos, nectarios, tricomas, filamento, anteras, polen, pistilo, ovario y vulos. Se realizaron mediciones de largo y/o ancho y/o dimetro y/o grosor; excepto de tricomas, los cuales se evaluaron como: flores glabras, medianamente pubescentes y abundantemente pubescentes. La mayora de las accesiones de J. curcas, presenta inflorescencias tpicas (monoicas), pero tambin se encontraron accesiones con inflorescencias atpicas (ginoicas, androicas, andromonoicas, subandroicas). Tambin se encontr dos tipos de variacin en caracteres florales: ocasional y recurrente. Las variables ms importantes de acuerdo a un anlisis de discriminante fueron: dimetro de la flor masculina, largo del ptalo femenino, largo de nectario masculino. Guerrero fue la poblacin ms diversa del Sur de Mxico y Centro la poblacin ms diversa del Estado de Chiapas. Un anlisis de conglomerados mostr que las accesiones de J. curcas del Sur de Mxico se agrupan sin mostrar correlacin con el origen geogrfico, mientras que las accesiones con sexualidad no tpica se agrupan juntas. Una prueba de Mantel encontr correlacin significativa entre las matrices de distancia generadas en este estudio y las matrices de distancias genticas (AFLP) previamente reportadas para las mismas accesiones (p=0.001). Palabras clave: Morfologa, Floracin, Chiapas, Anlisis de discriminante, Anlisis de conglomerados.

1.- Introduccin Por el contenido de aceite de sus semillas Jatropha curcas es una planta que recientemente ha despertado inters como modelo cientfico y como cultivo agroindustrial. Desde la perspectiva agrcola el conocimiento acumulado sobre la biologa y ecologa de esta planta es limitado, as mismo reproduccin y propagacin. El conocimiento de la estructura floral es un indicador de taxonoma y diversidad adems para lograr el mejoramiento de plantas. Se ha estudiado el desarrollo y la anatoma floral de muchas plantas; en Solanaceae, se caracteriz la morfologa floral en dos cultivares de berenjenas (Solanum melongena L. y Solanum sp.) (Aramndiz, 2009). As tambin, se han realizado estudios sobre la morfologa floral comparativa de cinco genotipos de aceroleira (Malpighia emarginata) (Gomes et al. 2001). Con el fin de conocer variaciones intraespecficas, Visintin y Bernardello (2005) realizaron estudios sobre la fenologa, morfologa y anatoma de los verticilos florales de Tagetes minuta L. (Asteraceae) colectada en la localidad de Villa del Totoral, en Crdova, Argentina. La morfologa floral se ha utilizado para explorar las relaciones fenticas, como en el trabajo de Guevara y Bentez (2004), quienes realizaron una caracterizacin morfolgica en 19 especies pertenecientes a ocho familias dentro del Orden de las Liliceas y adicionalmente estudiaron dos especies pertenecientes a la familia Poaceae colectadas en los estados de Aragua y Yaracuy, en Venezuela. Muchas son las especies de la familia Euphorbiaceae a las cuales se les ha descrito la morfologa y anatoma floral (Steinmann, 2002), sin embargo, para el gnero Jatropha dicha descripcin es limitada. Jimnez y Martnez (1994) describieron las flores de dos poblaciones de J. andrieuxii, una con 61 flores pistiladas y 44 estaminadas y otra con 4 flores pistiladas y 7 estaminadas; encontraron que las flores pistiladas adems de ser gamoptalas, son ms grandes que las estaminadas. Por su parte Jimnez (1992) reporto que los sepalos de las flores de J. websteri son enteros. Estudios realizados en J. curcas orientan a que el centro de diversificacin de esta planta es la regin Mesoamericana (Heller, 1996; Ovando et al. 2009, 2011; Carels, 2009). En Mxico, J. curcas, conocida como pin, es un arbusto pequeo que suele no sobrepasar los 5 m de

altura; su principal utilidad es como cerca viva de parcelas agrcolas o ganaderas y como alimento en algunas regiones rurales (las variedades no txicas). Esta especie actualmente ha ganado importancia econmica y ambiental, por sus usos medicinales, farmacolgicos y principalmente para la extraccin de aceite a partir de sus semillas para convertirlo a biodiesel (Marroqun et al. 1997). J. curcas posee caractersticas que favorecen su desarrollo ptimo, particularmente su rpido crecimiento y desarrollo, su adaptacin a suelos marginales semiridas, es altamente resistente a la sequa, sirve como controlador de la erosin, etc. (Sujatha et al. 2005). Se han hecho muchos estudios sobre variacin gentica de J. curcas; sin embargo la mayor parte de estos estudios se han realizado con accesiones asiticas y africanas, donde se ha encontrado baja diversidad (Snchez-Gutirrez, 2010). Gohil y Pandya (2008) evaluaron la diversidad gentica de 9 genotipos de J. curcas en la regin semirida de la India (siete genotipos txicos y dos no txicos); un anlisis de varianza molecular mostr diferencias significativas entre genotipos e indica alta variabilidad gentica. Por otra parte, en la regin mesoamericana, y en particular en el Estado de Chiapas, son pocos los estudios realizados sobre variacin gentica en J. curcas. Snchez-Gutirrez (2010) estudiaron la variacin gentica de 147 accesiones, las cuales pertenecen a cinco poblaciones (Istmo, Fronteriza, Frailesca, Centro y Soconusco), usando marcadores AFLP, encontrando que la mayor variacin est dentro de las poblaciones (94.2%), seguida por la variacin entre poblaciones (3.9%); siendo Istmo la poblacin ms diversa. Otro trabajo es el realizado por Pecina-Quintero et al. (2011) evaluaron la diversidad gentica de J. curcas en 88 accesiones de siete regiones del estado, mediante el uso de marcadores AFLP. Una de las accesiones (Tuxtla Chico) present 100% flores pistiladas (femeninas) y fue la que tuvo el mayor nmero de fragmentos raros. Las poblaciones de J. curcas presentan gran variabilidad morfolgica con respecto a sus estructuras (Toral et al. 2008); se ha encontrado que generalmente plantas de la misma zona climtica muestran diferencias morfolgicas, en la forma y tamao de las semillas, as como en su contenido de protenas y lpidos (Martnez et al. 2010; Ovando et al. 2011).

Se han descrito ciertas caractersticas morfolgicas de J. curcas, por ejemplo, Heller (1996) describi algunas estructuras de esta planta como son: el porte, copa, tallo, raz, corteza y hojas. De igual manera, se realizaron estudios sobre la variacin de las semillas de J. curcas en la India Central, observando la morfologa de las semillas (color, tamao y peso), la germinacin (viabilidad, porcentaje de germinacin) y crecimiento de las plntulas, as como la sobrevivencia (Ginwal et al. 2005), encontrando variacin principalmente en cuanto a tamao de las semillas. Tambin se ha estudiado la variacin morfo-fisiolgica y parmetros de crecimiento en 34 cultivares de J. curcas en la India, los parmetros tomados en cuenta fueron: altura de la planta, circunferencia del tallo, ramas por planta y peso de 100 semillas (Saikia et al. 2009); estos parmetros fisiolgicos revelaron un alto grado de variacin. Otro estudio realizado fue el de Gohil y Pandya (2009), quienes determinaron el grado de variabilidad y heredabilidad de 14 caracteres morfolgicos en nueve genotipos (incluyendo dos variedades no txicas) en la India encontrando variaciones fenotpicas como la altura y follaje de la planta, dimetro del cuello, peso promedio y rendimiento de la semilla, excepto para la variable de nmero de ramas primarias, adems se encontr diferencias significativas entre los genotipos. Sin embargo, de las inflorescencias y principalmente de las flores se tiene poca informacin. Dichos caracteres, por ser altamente conservados, podran usarse como estimadores de la diversidad gentica de J. curcas mesoamericana. Un trabajo reciente sobre anatoma floral de J. curcas es el realizado por Wu et al. (2011), en China, quienes estudiaron el proceso de desarrollo de los rganos florales, dividieron el desarrollo floral temprano en XII fases, adems observaron los tipos de inflorescencias, encontrando que la diferenciacin sexual de las flores masculinas y femeninas se produce en la fase VII. Adems encontraron plantas con flores mayoritariamente masculinas y femeninas. El estudio de la variacin morfolgica floral es prioridad de investigacin en J. curcas. Aunque se han realizado pocos estudios sobre morfologa floral, principalmente son de accesiones asiticas (Wu et al. 2011), por lo tanto hacen falta estudios en la regin mesoamericana, ya que esta regin es el centro de diversificacin de esta planta; por lo tanto se espera que exista alta variabilidad morfolgica floral. Por lo que el objetivo de este trabajo fue describir la variabilidad morfolgica floral de Jatropha curcas L. del sur de Mxico.

2.- Materiales y mtodos

2.1 Sitio de estudio El trabajo se desarroll en el Laboratorio de Investigacin en Biotecnologa y en el Banco de Germoplasma de Jatropha del Centro de Biociencias (CenBio) de la Universidad Autnoma de Chiapas. Este ltimo ubicado en el Municipio de Tapachula, Chiapas. 14.4976 N, 92.4774 O y 58 msnm; temperatura promedio anual 30.7C, humedad media anual 80%, lluvia media de 2632.9 mm. (Estacin meteorolgica: 769043 MMTP) y suelo tipo andosol. El estudio se realiz de enero a diciembre del 2011.

2.2 Material biolgico Se estudiaron 103 accesiones (Cuadro 1) de J. curcas, colectadas en 33 sitios del Sur de Mxico, reportadas originalmente por Ovando et al. (2009). De cada accesin se colectaron 40 flores masculinas y 20 flores femeninas. Las flores fueron trasladadas al laboratorio en bolsas de polipapel y se conservaron a 4 C por un mximo de 72 h.

2.3 Contabilizacin de inflorescencias. La cantidad de inflorescencias presente en cada una de las 103 accesiones se determin cada 28 das por periodo de un ao.

Cuadro 1. Accesiones de Jatropha curcas L. del Banco de Germoplasma del Centro de Biociencias de la Universidad Autnoma de Chiapas, estudiadas en sus caracteres florales. Datos del sitio original de colecta Latitud Longitud Poblacin (Norte) (Oeste) 1510.300' 9235.100' Soconusco 1459.022' 1459.433' Soconusco 1505.115' 1525.505' 1443.742 1440.057 1454.29 1611.231' 1555.561' 1603.430' 1606.663 1540.473 1544.623 1539.030 1550.335 17 57.981 1647.562 1647.220 1640.012 1646.243 1616.430 1610,171 1619,475 1619.243 1543.366' 1611.238' 1619.306' 1550.564' 1904.2472' 1637.433' 20 15' 11'' 1853 1436.2752' 9229.146' 9253.854' 9225.935' 9210.071' 9215.38' 9364.816' 9259.842' 9350.782' 9241.035' 9200.129' 9216.722' 9208.170' 9154.238' 9228.824' 9316.191' 9254.618' 9339.242' 9323.641' 9217,850' 9316,059' 9320,976' 9220,578' 9633.971' 9744.825' 9753.564' 9600.154' 10222.0983' 9900.749' -97 15' 30'' 9904 9029.0830' Soconusco Soconusco Soconusco Soconusco Soconusco Istmo Istmo Istmo Frontera Frontera Frontera Frontera Frontera Frontera Centro Centro Centro Centro Frailesca Frailesca Frailesca Frailesca Oaxaca Oaxaca Oaxaca Oaxaca Michoacn Guerrero Veracruz Morelos Guatemala

Municipio (Accesin) Acapetahua (ACA) Cacahoatn (CAC) Huixtla (HUX) Mapastepec (MAP) Puerto Chiapas (PC) Suchiate (SCH) Tapachula (TAP) Arriaga (ARR) Pijijiapan (PIJ) Tonal (TON) La Concordia (CCR) Cd. Cuauhtmoc (CDCU) Chicomuselo (CHIC) Comalapa (COM) Lagos de Coln (LACO) Rizo de Oro (RIZ) Berriozbal (BERR) Ixtapa (IXT) Jiquipilas (JIQ) Ocozocuatla (OCZ) Pujiltic (PUJ) Villa Corzo (VCO) Villa Flores (VIF) Villa de las Rosas (VLR) El coco (ECO) Piedra Ancha (PA) Pinotepa Nacional (PIN) Zimatn (ZIM) Apatzingn (APA) Copala (COP) Pueblillo (PUEB) Yautepec (YAU) Guatemala (GUA)

Nmero de accesiones 2 5 8 7 11 4 1 11 4 2 4 5 1 5 1 3 1 1 2 1 6 3 2 1 2 1 1 1 1 2 1 1 3

2.4. - Clasificacin de las flores Las flores fueron clasificadas en femeninas, masculinas y hermafroditas. Para ello primeramente se retir el pedicelo a cada una de las flores y posteriormente se tom microfotografias utilizando un microscopio compuesto (Zeiss Axiolab) y/o estereoscopio (Zeiss Stemi 2000 C) equipado con cmara de video (AxioCam MRc) acoplada al programa Axio Vision. 2.5. - Caracteres florales determinados A todas las flores se les determin la cantidad de spalos, ptalos y nectarios. A las flores masculinas y hermafroditas se les determin el nmero de filamentos, anteras y la cantidad de polen. A las flores femeninas y hermafroditas se les determin la cantidad de vulos y las dimensiones del pistilo y ovario. Tambin se midi el largo y/o ancho y/o dimetro y/o grosor de los caracteres florales. La presencia de, tricomas se evalu de acuerdo a la siguiente escala: flores glabras, medianamente pubescentes y abundantemente pubescentes. 2.6. Manejo de datos y anlisis estadstico Por presentar diferencias en ms de un orden de magnitud, los datos de las determinaciones de los caracteres se codificaron como se muestra en el Cuadro 1. Los datos codificados fueron procesados mediante anlisis multivariado discriminante, con el cual se identificaron los caracteres ms informativos y se agruparon las poblaciones. Para visualizar las relaciones entre las poblaciones se realiz un anlisis de conglomerados empleando, las distancias euclidianas y el mtodo de aglomeracin de Ward. En ambos anlisis se siguieron dos vas, en la primera se utilizaron todas las poblaciones y en la segunda solo las de Chiapas, por ser las ms numerosas. Para estos anlisis se utiliz el programa XLStat versin 2012. Adems, se realiz la prueba de correlacin de Mantel entre las distancias genticas obtenidas mediante AFLP, reportadas para las mismas accesiones por Snchez-Gutirrez (2010), y las distancias morfolgicas de Fisher generadas en el anlisis de discriminante empleando el programa InfoStat versin 2011.

Cuadro 2. Codificacin de caracteres florales de accesiones de Jatropha curcas L. del Banco de Germoplasma del Centro de Biociencias de la Universidad Autnoma de Chiapas.
Dimetro de flor masculina Valor real (m) Valor codificado 0 0 <6000 1 <7000 2 <8000 3 <9000 4 <10000 5 <11000 6 Largo de ptalo masculino Valor real (m) Valor codificado 0 0 5000 1 6000 2 7000 3 8000 4 Ancho de nectario masculino Valor real (m) Valor codificado 0 0 <1000 1 <2000 2 Largo de spalo masculino Valor real (m) Valor codificado 0 0 < 3000 1 < 4000 2 < 5000 3 < 6000 4 < 7000 5 Ancho de ptalo masculino Valor real (m) Valor codificado 0 0 <2000 1 <3000 2 < 4000 3 < 5000 4 < 6000 5 Largo de filamento Valor real (m) Valor codificado 0 0 <3000 1 <4000 2 <5000 3 <6000 4 <7000 5 <8000 6 Ancho de antera Valor real (m) Valor codificado 0 0 < 800 1 < 1000 2 3 Largo se spalo femenino Valor real (m) Valor codificado 0 0 <5000 1 <7000 2 <9000 3 <11000 4 Ancho de ptalo femenino Valor real (m) Valor codificado 0 0 <3000 1 <4000 2 Ancho de spalo masculino Valor real (m) Valor codificado 0 0 < 2000 1 < 3000 2 < 4000 3 < 5000 4 < 6000 5 Largo del nectario masculino Valor real (m) Valor codificado 0 0 <1000 1 <2000 2

Grosor de filamento Valor real (m) Valor codificado 0 0 < 200 1 < 300 2 < 400 3

Largo de antera Valor real (m) Valor codificado 0 0 < 1000 1 < 2000 2 Dimetro de flor femenina Valor real (m) Valor codificado 0 0 <7000 1 <9000 2 <11000 3 <13000 4 <15000 5 Largo de ptalo femenino Valor real (m) Valor codificado 0 0 <6000 1 <7000 2 <8000 3 <9000 4 <10000 5 Ancho de nectario femenino Valor real (m) Valor codificado 0 0 <1000 1 <2000 2 Largo de ovario Valor real (m) Valor codificado 0 0 <2000 1 <3000 2 < 4000 3 Ancho de vulo Valor real (m) Valor codificado 0 0 <400 1 <500 2 <600 3

Dimetro de polen Valor real (m) Valor codificado 0 0 10-30 1 30-40 2 >40 3 Ancho de spalo femenino Valor real (m) Valor codificado 0 0 <3000 1 <4000 2 <5000 3 <6000 4 <7000 5 Largo de nectario femenino Valor real (m) Valor codificado 0 0 <1000 1 <2000 2

Largo de pistilo Valor real (m) Valor codificado 0 0 <2000 1 <3000 2 < 4000 3 Ancho de ovario Valor real (m) Valor codificado 0 0 <2000 1 <3000 2 < 4000 3

Grosor de pistilo Valor real (m) Valor codificado 0 0 <500 1 <1000 2 Largo de vulo Valor real (m) Valor codificado 0 0 <400 1 <500 2 <600 3 <700 4 <800 5

3.- Resultados y discusin 3.1 Dinmica de florecimiento En la Figura 1 se muestra la dinmica de la presencia de flores en las accesiones de J. curcas del jardn comn del Centro de Biociencias de la UNACH. En dicho conglomerado se observaron flores durante todo el ao en las accesiones ARR-7, CDCU-3, MAP-8, PC-15 el resto, floreci de una a tres veces en el ao. El 85.2% de las accesiones florecieron durante los meses de marzo a abril, en agosto y noviembre se observ florecimiento en 59% y en 40.1% de las accesiones. Como en todas las plantas que producen flores, el florecimiento de J. curcas debe responder a los circuitos de control genticos los cuales, a su vez responden a la concentracin de nutrientes y fitohormonas clave y a las condiciones ambientales. En este ltimo sentido, la relacin entre precipitacin pluvial y el florecimiento de las accesiones de J. curcas (Figura 2) mostro que prcticamente todas ellas florecieron al inicio de la temporada de lluvia, lo que pudiera interpretarse como la necesidad de una cantidad mnima crtica de agua disponible en el suelo para iniciar el proceso de florecimiento. Por lo anterior el control de la humedad del suelo pudiera pudiera repercutir en que la planta floreciera todo el tiempo sugestin propuesta por Sukarin et al. (1987) y Joker y Jepsen (2003). En concordancia con lo anterior, en la poca y frecuencias de florecimiento de J. curcas depender del periodo, intensidad y frecuencia de lluvia lo que a su vez, depende fuertemente de la ubicacin geogrfica. As, en Nicaragua la floracin mxima se encontr durante los meses de abril, mayo, junio y agosto (Aker, 2012) mientras que para India se ha reportado dicho estadio para los meses de julio a septiembre (Bhattacharya et al. 2005), mayo y noviembre (Sukarin et al. 1987). Aunque las fluctuaciones observadas en el proceso de florecimiento de las distintas accesiones pudieran estar ligadas a los eventos que ocurren durante la poca de lluvia, la sincrona y la dinmica de maduracin de los tejidos, dependientes ambos de la plasticidad gentica de la accesin, pueden ser factores que impactan en los ciclos de florecimiento. En este sentido, el crecimiento vegetativo de J. curcas es simpodial y la inflorescencia terminal (Halle et al. 1978), por lo que la cantidad de inflorescencias en la planta depender del

nmero de ramas (yemas terminales) maduras presentes al momento del muestreo. En concordancia con dicho modelo de desarrollo, las inflorescencias presentes en cualquier momento en una planta de J. curcas deber ser un nmero par, a menos que el desarrollo de las ramas sea asincrnico. Por los resultados mostrados en la Figura 1 el determinante gentico del florecimiento en las accesiones de J. curcas utilizadas en el presente estudio parece un factor de alta influencia ya que, la cantidad de inflorescencias fue particular de la accesin.
ACA-5 ARR-7 CDCU-1 COP-3 HUX-7 OCZ-7 PC-8 ACA-6 ARR-9 CDCU-3 ECO-6 HUX-8 PA-3 PIJ-2 APA-1 BERR-1 CDCU-4 ECO-7 IXT-1 PC-11 PIJ-4 ARR-11 CAC-1 CDCU-5 GUA-1 JIQ-1 PC-12 PIJ-5 ARR-11.1 CAC-3 CDCU-6 GUA-2 JIQ-6 PC-13 PIJ-6 ARR-13 CAC-5 CHIC-1 GUA-3 MAP-2 PC-14 PIN-1 ARR-15 CAC-6 COM-12 HUX-1 MAP-3 PC-15 PUEB-2 ARR.16 CAC-8 COM-13 HUX-11 MAP-4 PC-2 PUJ-2 ARR-17 CCR-1 COM-2 HUX-3 MAP-5 PC-3 PUJ-3 ARR-2 CCR-2 COM-3 HUX-4 MAP-6 PC-4 PUJ-4 ARR-4 CCR-3 COM-4 HUX-5 MAP-7 PC-6 PUJ-5 ARR-6 CCR-5 COP-2 HUX-6 MAP-8 PC-7 PUJ-7

50 Inorescenias por accsein 40 30 20 10 0

Meses
Figura 1. Dinmica de floracin de 103 accesiones de Jatropha curcas L. del Banco de Germoplasma del Centro de Biociencias de la Universidad Autnoma de Chiapas.

700

0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 E F M A M J J A S O N D

Precipitacin (mm)

600 500 400 300 200 100 0

Meses (2011)
Figura 2. Relacin entre la proporcin de accesiones en florecimiento de Jatropha curcas L. del Banco de Germoplasma del Centro de Biociencias de la Universidad Autnoma de Chiapas y la precipitacin pluvial del ao 2011 en Tapachula; Chiapas, Mxico.

3.2 Sexo de las flores producidas por las accesiones de J. curcas Las flores producidas por las diferentes accesiones de fueron femeninas, masculinas y hermafroditas (Figura 2). De acuerdo al tipo y proporcin de flor producida, las accesiones se clasificaron en monoicas, androicas, ginoicas, andromonoicas y subandromonoicas (Cuadro 3). Dehgan y Webster, 1979 reportaron que J. curcas se caracteriza por ser una planta monoica con flores masculinas y femeninas en la misma inflorescencia (Dehgan y Webster, 1979) reportando, adems, la presencia de flores hermafroditas sin especificar si se trata de una caracterstica de una accesin o si estas se encontraron mezcladas con flores masculinas o femeninas en la misma accesin. Tambin se ha reportado la existencia de plantas con inflorescencias exclusivamente femeninas (Pecina-Quintero et al. 2011) o mayoritariamente masculinas (Wu et al. 2011). La presencia de dioicismo y arreglos complejos, adems de que la mayora de los individuos de este estudio fueron monoicos, orientan a pensar que en esta planta el sexo est ligado a un

Proporcin de plantas con inflorescencia

800

Precipitacin (mm)

Plantas orecidas

0.9

determinante complejo (posiblemente Y1 Y2) y/o que J. curcas se encuentra en proceso de evolucin. En este ltimo sentido, se ha establecido que el dioicismo, en las plantas, esta relacionado con los diversos factores ecolgicos (Vamosi et al. 2009) y se ha detectado en varios grupos de plantas no emparentadas. La aparicin del dioicismo se ha reportado en el gnero Ribers (Senters y Solis, 2003) y ha aparecido al menos dos veces en el gnero Silene a partir de un ancestro ginodioico (Desfeux et al. 1996). En la familia Siparunaceae el dioicismo se origin a partir de un ancestro monoico (Renner y Won 2001). En Monocotiledneas el estado dioico parece haber evolucionado a partir de un estado transitorio ginodioico ms que del estado monoico (Weibien et al. 2001). Por otro lado, el mecanismo que gobierna la aparicin de sexos separados en plantas ha trado como consecuencia la descripcin de cromosomas sexuales diferenciados aunque, en un nmero reducido de especies (Ruiz, 2004). Los cromosomas sexuales heteromrficos est ampliamente distribuido en animales superiores y las teoras de su origen y evolucin son resultado del anlisis de los cromosomas X e Y de humanos (Skalestky et al. 2003). Se estima que los cromosomas sexuales de los animales aparecieron hace 240 a 320 G-aos (Charlesworth, 2002). Por lo anterior, los sistemas ms jvenes como el de las plantas (Ruiz, 2004) son interesantes para comparar dicha hiptesis. Dado que el determinismo sexual en plantas y animales es fundamentalmente diferente, es posible que la arquitectura de los cromosmas sexuales sean potencialmente comparables (Charlesworth, 2002). En este sentido se ha hipotetizado que los cromosomas sexuales evolucionaron a partir de autosomas y que se ha requerido de al menos dos eventos evolutivos para la transicin desde el hermafroditismo hasta la dioicismo (Charlesworth, 1991). Por lo anterior, una mutacin de esterilidad masculina en los hermafroditas dara lugar a las hembras y los machos aparecieron a partir de la supresin de los genes femeninos. Los resultados de este trabajo orientan a pensar que la mutacin en los genes femeninos parece el mecanismo de aparicin de la dioecia (androdioecia) en J. curcas, situacin contraria a lo propuesto por Charlesworth y Charlesworth (1985) quienes proponen la aparicin de la ginodioecia. Por lo anterior en los individuos androginodioicos y androdioicos encontrados pudieran encontrarse reminiciencias de cromosomas sexuales en J. curcas.

Cuadro 3. Clasificacin de 103 accesiones de Jatropha curcas L. del Banco de Germoplasma del Centro de Biociencias de la Universidad Autnoma de Chiapas, con base en sus caractersticas sexuales.

Tipo de planta Monoica Dioicas Ginoicas Androicas Hermafroditas Andromonoicas Subandroicas

Accesiones (No.) 95

Caractersticas Plantas con flores masculinas y femeninas en la misma inflorescencia.

3 2

Plantas con flores exclusivamente femeninas Plantas con flores exclusivamente masculinas

1 2

Plantas con flores masculinas y hermafroditas Planta que mayoritariamente posee flores masculinas, con unas pocas flores femeninas o hermafroditas

3.3 Variacin de J. curcas en caracteres florales. Se detect dos tipos de variacin en los caracteres florales de J. curcas: ocasional y recurrente. El primer tipo se refiere a la variabilidad entre inflorescencias de la misma planta, la cual puede tener su origen en la interaccin genotipo-ambiente (Heller, 1996) o en factores epigenticos (Yi et al. 2010). Ejemplos de variacin ocasional en flores masculinas son: nmero de ptalos (cuatro o cinco), spalos (cuatro, cinco o seis), nectarios (cuatro o cinco) y estambres (siete o diez). En flores femeninas se encontr variacin ocasional en el nmero de vulos (dos, tres o cuatro). El segundo tipo de variacin se refiere a caractersticas que siempre estuvieron presentes en una misma la planta, como la cantidad de tricomas y el tamao de los caracteres. Es posible que los caracteres que presentaron variacin recurrente, sean fijos o altamente heredables (Ovando-Medina et al. 2011). Solo la variacin recurrente se utiliz para los estudios de diversidad de poblaciones de J. curcas del Sur de Mxico. Los resultados de este estudio mostraron que los verticilios de las flores masculinas tpicas (Figura 2a) estn compuestos por cinco ptalos, cinco spalos, cinco nectarios, diez

estambres, diez anteras y granos de polen que varan entre 27-44 m de dimetro. En el caso de las flores femeninas tpicas (Figura 2b) se presentan cinco ptalos, cinco spalos, cinco nectarios, un ovario, tres vulos, un pistilo. En flores hermafroditas (Figura 2c) se presentan cinco ptalos, cinco spalos, cinco nectarios, diez estambres, granos de polen que varan entre 37-40 m de dimetro, un ovario, tres vulos, un pistilo. Estos datos coinciden con lo reportado previamente por otros autores (Heller, 1996, Toral et al. 2008, Wu et al. 2010). Respecto al tamao de las flores, se encontr que las masculinas son ms pequeas (5-10 mm) que las femeninas (7-15 mm) y hermafroditas (11-14 mm), presentan un color verde claroamarillas y la mayor cantidad de plantas poseen flores medianamente pubescentes. Sin embargo, Toral et al. (2008), mencionan que ambas flores, masculinas y femeninas, son pequeas (6-8 mm), presentan un color verdoso-amarillas en ocasiones pubescentes; con anteras verstiles y rganos sexuales sobresalientes. Adems se encontraron dos tipos de flores hermafroditas, la primera con diez estambres alrededor del ovario ms largos que el pistilo y la segunda con cuatro-seis estambres alrededor del ovario ms cortos que el pistilo. Podra existir mayor probabilidad que una planta que produce flores hermafroditas con estambres ms largos que el pistilo sea autofecundado, ya que al momento de abrir el saco polnico este polen sea aprovechado por el estigma, siempre y cuando este receptivo, sin necesidad de un agente dispersor (OcampoVelzquez et al. 2009). Sin embargo, Pinilla et al. (2011) observaron que las flores hermafroditas de J. curcas presentan protrandia, ya que en el desarrollo de las fases masculina y femenina primero se libera el polen a medida que se manifiesta el crecimiento del gineceo en los estilos y los estigmas, una vez producido la senescencia en las anteras, los estilos alcanzan su tamao ideal y con las papilas ya desarrolladas.

Figura 2. Diferenciacin de flores de Jatropha curcas de acuerdo al sexo; flor masculina(a), flor femenina (b), flor hermafrodita (c).

3.4 Anlisis discriminante de los caracteres morfolgicos de las flores Para el primer anlisis se utilizaron todas las poblaciones del Sur de Mxico, mediante el cual se identificaron los caracteres ms importantes para formar los cinco componentes principales y agrupar las accesiones por poblaciones. El componente principal 1 (F1) que es el ms importante explic un 46.02% de la variacin total (Cuadro 4) y las variables ms importantes por su contribucin al F1 fueron: dimetro de la flor masculina (DFM), largo del spalo femenino (LSF), largo del ptalo femenino (LPF), dimetro de flor femenina (DFF), grosor del pistilo (GP). El componente principal 2 (F2) explic un 20.90% de la varianza (Cuadro 4) y las variables que aportaron ms para este factor fueron: grosor del pistilo (GP), largo del ovario (LO), largo de nectario masculino y femenino (LNM) (LNF). Las variables correlacionadas para el componente principal 3 (F3) fueron largo del vulo (LO), cantidad de tricomas en flores femeninas (TF), con un 13.64% de la varianza, mientras que el componente principal 4 y 5 nicamente explicaron un 5-8% de la variacin total como se muestra en el Cuadro 4. Muchos autores han realizado estudios acerca de variacin morfolgica de la planta de J. curcas mediante anlisis de componentes principales; por ejemplo, Zapico et al. (2011) en Filipinas; evaluaron 21 variables morfolgicas cuantitativas de 13 accesiones de J. curcas, los cinco componentes principales explicaron un 88.12% de la variacin total, las variables ms importantes para el componente principal 1 (F1) fueron: altura de la planta, nmero de hojas, porcentaje de germinacin y supervivencia. Por otra parte, Vijayanand et al. (2009), en la

India, estudiaron 12 accesiones de J. curcas para evaluar la diversidad gentica, utilizando 19 caracteres morfolgicos, encontrando que los tres primeros factores contribuyeron un 89.2% de la varianza total observada, las variables que aportaron ms para el F1 fueron: dimetro del tallo, longitud y ancho de la hoja, crecimiento de las plantas, las cuales contribuyeron con un 35.7% para el F1. Machado (2011) realiz un estudio para caracterizar la variabilidad morfolgica y productiva de una coleccin de J. curcas, en Cuba, tomando en cuenta 13 caracteres morfolgicos, encontrando que la altura de la planta fue el indicador ms variable, seguido por el grosor del tallo y ramas primarias, el nmero de ramas primarias y secundarias, explicando un 74.63% entre el componente principal 1 (F1) y componente principal 2 (F2). Sin embargo, no se han encontrado investigaciones previas sobre variacin floral en J. curcas para su posible comparacin.

Cuadro 4. Valor propio de los cinco componentes principales, en base a caracteres florales de 103 accesiones de Jatropha curcas L. del sur de Mxico.

Componente 1 2 3 4 5

Total 2.430 1.104 0.720 0.445 0.264

% de variacin 46.018 20.898 13.642 8.424 5.001

% acumulado 46.018 66.916 80.558 88.982 93.983

En la Figura 3 se muestra el patrn de agrupacin de las accesiones por poblacin, de acuerdo al componente principal 1 y componente principal 2 (F1 y F2), los cuales explican en conjunto el 66.92% de la varianza; se observa como las accesiones que pertenecen a las poblaciones de Frontera y Oaxaca se agrupan hacia el F1, mientras que las accesiones que pertenecen a las poblaciones de Istmo y Centro se agrupan en el F2. La posicin de Guerrero en la parte extrema inferior izquierda del cuadrante es debido al alto porcentaje de varianza que mostraron estas accesiones en los caracteres evaluados y su contribucin a los F1 y F2. Estos resultados probablemente se deben a que en esta poblacin existen plantas con flores hermafroditas.

Observaciones (ejes F1 y F2: 66.92 %)

F2 (20.90 %)

-2

-4

-6 -6 -4 -2 F1 (46.02 %) 0 2 4

Centro Guerrero

Frailesca Istmo

Frontera Oaxaca

Guatemala Soconusco

Figura 3. Agrupacin por poblaciones de 103 accesiones de Jatropha curcasL. del Sur de Mxico, del Banco de Jatropha del CenBio de la Universidad Autnoma de Chiapas.

Para visualizar mejor la relacin entre poblaciones, se graficaron los centroides, los cuales se muestran en la Figura 4; se observa como las poblaciones de Centro e Istmo estn estrechamente relacionadas ya que Istmo se encuentra dentro del centroide de Centro. Adems, est poblacin tiene cierta relacin con las poblaciones de Oaxaca y Frailesca, lo cual puede deberse a la cercana geogrfica entre ellas. Por su parte, las poblaciones de Guatemala, Frontera, Soconusco y Guerrero estn separadas del resto y entre ellas. Es destacable la diferenciacin que existe entre las poblaciones Frontera y Soconusco, a pesar que son cercanas geogrficamente, lo cual puede deberse a la barrera fsica que representa la Sierra Madre de Chiapas. Por otra parte, Guerrero fue la poblacin ms diversa, esto debido a que en esta poblacin existen plantas con flores hermafroditas.

Ovando et al. (2011), utilizando las mismas accesiones, estudiaron la diversidad gentica estimada con los cidos grasos de la semilla de J. curcas encontrando que la variacin con respecto al contenido de aceite fue de 8.020%-54.28%. En ese estudio el componente principal 1 (F1) y componente principal 2 (F2), en conjunto explicaron un 89.25% de la variacin total. Mediante un grfico de centroides se mostr la relacin entre las seis poblaciones; los resultados son similares a la agrupacin observada de acuerdo a la variacin en caracteres florales, ya que Guatemala fue una de las poblaciones ms diversas en ambos estudios, adems de la estrecha relacin en la que se agruparon las poblaciones del centro y costa de Chiapas.
Centroides (ejes F1 y F2: 66.92 %) 3 2

Guatemala

Frailesca
1

Istmo
-7 -6 -5 -4 -3 -2 -1

Oaxaca
1

Centro 0
-1 -2 -3 -4

F2 (20.90 %)

Frontera

Soconusco

Guerrero

-5 -6 -7

F1 (46.02 %)

Figura 4. Grfico de centroides de las ocho poblaciones de Jatropha curcas L. del Sur de Mxico, del Banco de Jatropha del CenBio de la Universidad Autnoma de Chiapas.

El segundo anlisis discriminante estudi exclusivamente las accesiones del Estado de Chiapas, debido a que en este estado existe mayor extensin de cultivo tradicional de J. curcas. Mediante este anlisis se identificaron los caracteres ms importantes para formar los cinco componentes principales y agrupar las accesiones por poblaciones. El componente principal 1 (F1) que es el ms importante explic un 58.40% de la variacin total (Cuadro 5) y las variables ms importantes por su contribucin al F1 fueron: dimetro de flor masculina (DFM), largo de spalo masculino (LSM), ancho del ptalo masculino (APM) y largo del ptalo femenino (LPF). El componente principal 2 (F2) explic un 20.92% de la varianza (cuadro 5) y las variables ms importantes fueron: largo del nectario masculino (LNM)), ancho de la antera masculina (AAM), largo del ovulo (LOvu.) y la cantidad de tricomas en flores femeninas (TF). Para el componente principal 3 (F3) las variables ms importantes fueron: la cantidad de tricomas en flores masculinas (TM) y largo del ovario (LO) explicando un 16.81% de varianza, mientras que el componente principal 4 (F4) fue el que aporto menor variacin con menos de 4% de la varianza total, como se muestra en el Cuadro 5. Se encontr que las variables ms importantes, con respecto al F1 y F2, tanto en el anlisis de discriminante de todas las poblaciones, como el de las de Chiapas son dimetro de la flor masculina (DFM), largo del ptalo femenino (LPF), largo de nectario masculino, dimetro de flor masculina (DFM), largo del ptalo femenino (LPF) y largo del nectario masculino (LNM). Un estudio relacionado con lo anteriormente mencionado es el de Pinilla et al. (2010), quienes estudiaron 246 accesiones de J. curcas de Colombia mediante el estudio de 24 caracteres morfolgicos cualitativos y cuantitativos encontrando que altura de la planta, dimetro del tallo, proyeccin de la copa, longitud y ancho de la octava hoja, das de floracin, peso y longitud del fruto, longitud y ancho de la semilla, explicaron un 93.62% de la varianza para el componente principal 1 (F1).

Cuadro 5. Valor propio de los cuatro componentes principales, en base a caracteres florales de 90 accesiones
de Jatropha curcas L. del Estado de Chiapas.

Componente 1 2 3 4

Total 1.984 0.711 0.571 0.131

% de variacin 58.40 20.92 16.81 3.87

% acumulado 58.40 79.320 96.14 100

En la Figura 5 se muestra el patrn de agrupacin de las accesiones por poblacin, de acuerdo al componente principal 1 (F1) y componente principal 2 (F2), los cuales explican en conjunto el 79.31% de la varianza, se observa como las accesiones que pertenecen a la poblacin Soconusco es la nica que se agrupa para el F1, mientras que las poblaciones de Istmo y Centro se agrupan al F2. Para visualizar mejor las relaciones entre las cinco poblaciones, se graficaron los centroides (Figura 6), con lo cual se pudo diferenciar claramente cmo se forma un grupo que contiene a las poblaciones Istmo, Frailesca y Centro, cuya similitud puede deberse a que geogrficamente son cercanas; por su parte, las poblaciones Frontera y Soconusco presentan una marcada diferenciacin entre ellas y con respecto a las dems poblaciones. Esto evidencia que la Sierra Madre de Chiapas es una fuerte barrera fsica entre estas poblaciones y que podra ser la principal causa de diversificacin encontrada entre poblaciones. Centro fue la poblacin ms diversa.

5 4 3 2 F2 (20.92 %) 1 0

Observaciones (ejes F1 y F2: 79.32 %)

-1 -2 -3 -4 -5 -4 -3 -2 -1 0 1 2 3 4 F1 (58.40 %)

Centro

Frailesca

Frontera

Istmo

Soconusco

Figura 5. Agrupacin por poblaciones de 90accesiones de Jatropha curcas L. del Estado de Chiapas, del Banco de Jatropha del CenBio de la Universidad Autnoma de Chiapas.

Centroides (ejes F1 y F2: 79.32 %)

3

Istmo
F2 (20.92 %)
1

Frailesca
0 -2 -1 0

Centro
1 2

-3

Soconusco Frontera
-1

F1 (58.40 %) -2
Figura 6. Grfico de centroides de cinco poblaciones de Jatropha curcas L. del Estado de Chiapas, del Banco de Jatropha del CenBio de la Universidad Autnoma de Chiapas.

3.5 Anlisis de conglomerados de los caracteres morfolgicos de las flores Se realizaron dos anlisis de clasificacin ascendente jerrquica (dendrograma o anlisis de conglomerados); uno de ellos analiz 103 accesiones del Sur de Mxico, encontrando un dendrograma con cinco grupos como se observa en la Figura 7. El primer grupo fue el ms grande y contuvo 54 accesiones de la mayora de las poblaciones, no mostrando correlacin con el origen geogrfico. El segundo grupo nicamente agrup ocho accesiones, siendo la mayora de la poblacin Istmo. El tercer grupo est formado por 35 accesiones, las cuales pertenecen a las poblaciones de Centro, Frontera, Soconusco, Guatemala y Veracruz. El cuarto grupo est formado por plantas ginoicas es decir que nicamente producen flores femeninas. El ltimo grupo lo formaron dos accesiones (plantas) androicas, es decir que

nicamente producen flores masculinas y una planta andromonoica, es decir que produce flores hermafroditas y masculinas. Ningn grupo se form de acuerdo al origen geogrfico. El porcentaje de variacin dentro de los grupos fue de 59.43%, mientras que entre grupos fue de 40.57%; es decir que la mayor varianza est dentro de los grupos.

MAP-7 0CZ-7 HUX-11 PUJ-8 CAC-5 PA-3 MAP-5 PIJ-2 PC-6 PUJ-7 CDCU-1 ARR-15 SCH-1 PC-14 ARR-16 CCR-3 PC-4 COM-4 HUX-6 APA-1 PC-15 HUX-5 PC-8 MAP-8 MAP-6 CAC-8 ECO-6 ARR-9 PC-12 RIZ-4 ECO-7 PC-7 PC-3 VIF-2 ARR-2 ARR-4 COM-3 SCH-10 PIJ-6 SCH-2 PC-2 HUX-7 PIJ-4 MAP-4 PC-13 PIJ-5 CDCU-3 ARR-6 JIQ-6 COM-2 PUJ-5 CCR-5 COP-3 PIN-1 ARR-17 ARR-11.1 ARR-7 COM-13 MAP-3 HUX-3 VCO-3 TON-6 CDCU-5 VCO-2 ARR-13 CDCU-6 YAU-6 PUEB-2 ZIM-1 HUX-4 GUA-1 ACA-6 MAP-2 PUJ-2 CCR-2 CCR-1 COM-12 PC-11 GUA-3 SCH-6 HUX-8 GUA-2 VCO-1 BERR-1 TON-7 CDCU-4 VLR-1 PUJ-4 PUJ-3 ACA-5 VIF-3 RIZ-2 IXT CAC-3 CAC-1 HUX-1 CAC-6 TAP-2 JIQ-1 CHIC-1 ARR-11* COP-2 RIZ-3

Dendrograma
C1 C2 C3 C4 C5

54

104

154

204

Disimilitud

20

40

60

80

100 Disimilitud

120

140

160

180

200

Figura 7. Dendrograma de disimilitud de 103 accesiones de Jatropha curcas L. del sur de Mxico, del Banco de Jatropha del CenBio de la Universidad Autnoma de Chiapas.

En el segundo anlisis de clasificacin ascendente jerrquica (dendrograma o anlisis de conglomerados); analiz 90 accesiones, estas pertenecientes al estado de Chiapas; encontrando un dendrograma con cinco grupos como se observa en la Figura 8. El primer grupo fue el segundo ms grande formado por 38 accesiones, tambin provenientes de todas las poblaciones (Soconusco, Frontera, Istmo, fronteriza y Centro), aunque la mayora fueron de la poblacin Soconusco. Mientras que en el segundo grupo se incluyeron ocho accesiones, la mayora de la poblacin Istmo. El tercer grupo fue el ms grande y estuvo formado por 39

accesiones de todas las poblaciones. El cuarto grupo lo formaron dos accesiones, estas fueron plantas androicas, es decir, exclusivamente producen flores masculinas. Finalmente el ltimo grupo est formado por tres plantas ginoinas, es decir accesiones con flores exclusivamente femeninas. Al igual que en el primer dendrograma formado por la accesiones del Sur de Mxico, ningn grupo mostro correlacin de acuerdo al origen geogrfico. El porcentaje de variacin dentro de los grupos fue de 57.55%, mientras que entre grupos fue de 42.45%, es decir que ya la mayor varianza existente est dentro de los grupos. Los resultados coinciden con lo encontrado por Snchez-Gutirrez (2010), quien utilizando las mismas accesiones estudi la variacin gentica de J. curcas del estado de Chiapas, encontrando, mediante anlisis de conglomerados, que las accesiones estn agrupadas sin un patrn geogrfico.

PC-4 COM-4 VCO-1 HUX-6 PC-15 HUX-5 PC-8 MAP-7 0CZ-7 HUX-11 PUJ-8 MAP-5 CAC-5 PIJ-2 PC-6 PUJ-7 CDCU-1 ARR-15 SCH-1 PC-14 ARR-16 CCR-3 PC-12 RIZ-4 PC-7 SCH-2 PC-2 HUX-7 PIJ-4 MAP-4 PC-13 PIJ-5 CDCU-3 ARR-6 JIQ-6 COM-2 PUJ-5 CCR-5 ARR-17 ARR-11.1 ARR-7 COM-13 MAP-3 HUX-3 VCO-3 TON-6 MAP-2 PUJ-2 ACA-6 CDCU-5 VCO-2 ARR-13 CDCU-6 MAP-8 MAP-6 CAC-8 ARR-9 CCR-2 CCR-1 COM-12 PC-3 VIF-2 ARR-2 ARR-4 COM-3 SCH-10 PIJ-6 SCH-6 PC-11 HUX-8 HUX-4 BERR-1 TON-7 CDCU-4 VLR-1 PUJ-4 PUJ-3 ACA-5 VIF-3 RIZ-2 IXT CAC-3 CAC-1 HUX-1 CAC-6 ARR-11* RIZ-3 TAP-2 JIQ-1 CHIC-1

Dendrograma
C1 C2 C3 C4 C5

49

99

149

199

Disimilitud

20

40

60

80

100

120

140

160

180

Disimilitud

Figura 8. Dendrograma de disimilitud de 90 accesiones de Jatropha curcas L. del Estado de Chiapas, del Banco de Jatropha del CenBio de la Universidad Autnoma de Chiapas.

Se realiz una prueba de correlacin de Mantel entre la matriz de distancias generada de datos genticos reportados por Snchez-Gutirrez (2010) usando el programa GenAlEx versin 6.3 y la matrz de distancias a partir de datos morfolgicos, esta obtenida del anlisis de discriminante. Esta prueba de correlacin se realiz por poblaciones (5) y por accesiones (87); los resultados muestran que las matrices generadas por poblaciones no tienen correlacin (p = 0.448), mientras que las matrices generadas por accesiones s mostraron correlacin (p = 0.001). Lo anterior significa que el estudio de la diversidad de J. curcas utilizando marcadores morfolgicos florales revela patrones de agrupacin de accesiones similares a los que se obtienen con marcadores moleculares AFLP. Aunque existen muchos estudios de diversidad de J. curcas colectada en distintas partes del mundo (para una revisin ver Ovando-Medina et al., 2011), no hay reportes que utilicen marcadores florales como estimadores de variacin, por lo que no se pudieron contrastar los hallazgos del presente estudio. Un estudio de caracterizacin del desarrollo floral en J. curcas fue reportado por Wu et al. (2011), donde abordan detalladamente la anatoma de flores e inflorescencias, aunque no presentaron datos de variacin entre accesiones. Los resultados de la presente investigacin son una contribucin al conocimiento de la diversidad biolgica contenida en los cercos vivos de J. curcas del Sur de Mxico, los cuales sealan, junto con los datos de otras investigaciones que utilizaron marcadores fenotpicos y moleculares, que la regin mesoamericana es un centro de diversificacin de esta especie.

4.- Conclusiones Los caracteres florales de J. curcas de la regin mesoamericana son altamente variables entre accesiones, pero a la vez son informativos, ya que permiten la agrupacin a nivel de poblaciones. La floracin de J. curcas se presenta en tres eventos (marzo-abril, agosto y noviembre), siendo el pico de marzo-abril, correspondiente al inicio de lluvias, donde se despliega la mayor abundancia de inflorescencias, con 85.2% de las accesiones en floracin. No obstante, algunas accesiones florecen todo el ao (ARR-7, CDCU-3, MAP-8, PC-15). J. curcas requiere un periodo de reposo que coincide con la poca de secas, posteriormente la floracin se dispara con el inicio de las lluvias, pero se inhibe con un exceso de humedad en el suelo. El 93.2% de las accesiones son monoicas, 1.9% androicas, 2.9% ginoicas, 0.9% andromonoicas y 1.9% sub-androicas. El anlisis de discriminante revel que las variables ms importantes por su contribucin a la varianza son: dimetro de la flor masculina, largo del ptalo femenino, largo de nectario masculino. Se encontr que las poblaciones Centro e Istmo estn estrechamente relacionadas y que Centro comparte caractersticas florales con las poblaciones Oaxaca y Frailesca. Por su parte, las poblaciones Guatemala, Frontera, Soconusco y Guerrero tienen menos relacin con resto de poblaciones y entre ellas. A pesar de su cercana geogrfica, las poblaciones Frontera y Soconusco estn diferenciadas en sus caracteres florales. El anlisis de clasificacin ascendente jerrquica muestra que las accesiones de J. curcas del Sur de Mxico se agrupan sin un patrn geogrfico, mientras que las accesiones con sexualidad no tpica se agrupan juntas; de esta manera, un grupo estuvo formado por plantas ginoicas y otro por accesiones androicas y andromonoicas.

5.- Referencias 1. - Aramndiz, H.; Ayala, C.; Camacho, M. Caracterizacin de la morfologa floral de dos cultivares de berenjena (Solanum melongena L.) (Solanaceae). Rev. Fac. Nal. Agr. Medelln 2009, 62, 5125-5134. 2. - Gomes, J.; Pavini, M.; Perecin, D.; Geraldo, A. Morfologa floral e biologa reproductiva de genotipos de aceroleira. Sci. Agr. 2001, 58, 519-523. 3. - Visintin, A.; Bernardello, G.; Morfologa y Anatoma floral de Tagetes minuta L. (Asteraceae). Arnaldoa 2005, 12, 08-15. 4. - Guevara, L.; Bentez, C. Caracterizacin morfolgica y relaciones fenticas entre especies de los rdenes liliales y poales. Bioagro 2004, 16, 99-112. 5. - Steinmann, V.W. Diversidad y endemismo de la familia Euphorbiaceae en Mxico. Acta Bot. Mex. 2002, 61, 61-93. 6. - Jimnez, J.; Martnez, M. Redescripcin de Jatropha andrieuxii muell. Arg (Euphorbiaceae), una especie endmica del sur de Mxico. Acta Bot. Mex. 1994 26, 27-32. 7. - Jimnez, J. Especie nueva del gnero Jatropha (Euphorbiaceae) de la depresin del ro Balsas, Guerrero, Mxico. Anales Inst. Biol. Univ. Autn. Mxico, Ser. Bot. 1992. 63, 25-29. 8. - Heller, J. Physic Nut. Jatropha curcas L. Promoting the Conservation and Use of Underutilized and Neglected Crops; Institute of Plant Genetics and Crop Plant Research (IPK), International Plant Genetic Resources Institute (IPGRI): Gatersleben, Germany; Rome, Italy, 1996. 9. - Ovando-Medina, I.; Espinoza-Garca, F.; Nez-Farfn, J.; Salvador-Figueroa, M. Does Biodiesel from Jatropha Curcas Represent a Sustainable Alternative Energy Source? Sustainability 2009, 1, 1035-1041.

10. - Ovando-Medina, I.; Espinosa-Garca, F.J.; Nez-Farfn, J.S.; Salvador-Figueroa, M. State of the art of genetic diversity research in Jatropha curcas. Sci. Res. Essays 2011, 6, 1709-1719. 11. - Carels, N. Jatropha curcas: A Review. Adv. Bot.l Res. 2009, 50, 39-86. 12. - Marroquin, E. A., Blanco, J. A.; Granados, S.; Caceres, A.; Morales, C. Clinical trial of Jatropha curcas sap in the treatmen of common warts. Fitoterapia 1997 68, 160-162. 13.- Sujatha, M.; Makkar, H.P.S.; Becker, K. Shoot bud proliferation from axillary nodes and leaf sections of non-toxic Jatropha curcas L. Plant Growth Regul. 2005, 47, 83-90. 14.- Snchez-Gutirrez, A. Diversidad gentica de poblaciones de Jatropha curcas L. del Estado de Chiapas, Mxico. Tesis de Licenciatura. Centro de Biociencias, Universidad Autnoma de Chiapas. 2010,18 pp. 15. - Gohil, R.H.; Pandya, J.B. Genetic diversity assessment in physic nut (Jatropha curcas L.) Int. J. Plant. Prod. 2008, 2, 321-326. 16.- Pecina-Quintero, V.; Anaya-Lpez, J.L.; Zamarripa, A.; Montes, N.; Nuez, C.A.; Solis, J.L.; Aguilar-Rangel, M.R.; Gill, H.R.; Meja, D.J. Molecular characterisation of Jatropha curcas L. genetic resources from Chiapas, Mxico through AFLP markers. Biomass Bioenerg. 2011, 1-9. 17. - Toral, O.; Iglesias, J.M.; Montes, S.; Sotolongo, J.A.; Garca. S.; Torsti, M. Jatropha curcas L., una especie arbrea con potencial energtico en Cuba. Pastos y Forrajes, 2008, 31,191-207.

18.- Martnez-Herrera, J.; Martnez Ayala, A.L.; Makkar, H.; Francisco, G.; Becker, K. Agroclimatic conditions, chemical and nutrional characterization of different provenances of Jatropha curcas L. from Mxico. Eur. J. Sci. Res. 2010, 39, 396-407. 19.- Ovando-Medina, I.; Espinosa-Garca, F.J.; Nez-Farfn, J.; Salvador-Figueroa, M. Genetic Variatin in Mexican Jatropha curcas L. Estimated with Seed Oil Fatty Acids. J. Oleo Sci. 2011, 60, 301-311. 20. - Ginwal, H.S.; Phartyal, S.S.; Rawat, P.S.; Srivastava, R.L. Seed Source Variation in Morphology, Germination and Seedling Growth of Jatropha curcas Linn. in Central India. Silvae Genet. 2005, 54, 2. 21. - Saikia, S.P.; Bhau, B.S.; Rabha, A.; Dutta, S.P.; Choudhari, P.K.; Chetia, M.; Mishra B.P.; Kanjilla P.B. Study of accession source variation in morpho-physiological parameters and growth performance of Jatropha curcas Linn. Curr. Sci. 2009, 96, 12-25. 22. - Gohil, R.H.; Pandya, J.B. Genetic evaluation of Jatropha (Jatrhopa curcas Linn) genotypes. J. Agric. Res. 2009, 47, 3. 23. - Wu Jun; Liu Yuan; Tang Lin; Zhang Fuli; Chen Fang. A study on structural features in early flower development of Jatropha curcas L. and the classification of its inflorescences. Afr. J. Agric. Res. 2011, 6, 275-284. 24. - Sukarin W.; Yamada Y.; Sakaguchi S. Characteristics of physic nut, Jatropha curcasL. As a new biomass crop in the Tropics. Japan. Agric. Res. Quart. 1987, 20, 302-303. 25. - Joker, D. & Jepsen, J. Seed leaflet. Jatropha curcas L. Disponible en: http://www.dfsc.dk/pdf/ Seed leaflets/jatropha_curcas_83.pdf. 2003 consulta: abril 2012.

26. - Aker C.; Ph. D. La Biologa Reproductiva de Jatropha curcas. Centro de Investigacin Forestal, Facultad de Ciencias y Tecnologa Universidad Nacional Autnoma de Nicaragua, Len. 2012. 27. - Bhattacharya, A.; Kumar, S. Floral Biology, Floral Resource Constraints and Pollination Limitation in Jatropha curcas L. Pakistan J. Biol. Sci. 2005, 8, 456-460. 28. - Hall, F., Oldeman R.; Tomlinson, P. Tropical trees and forests. Springer Verlag, Berln. 1978. 442 pp. 29. - Dehgan, B.; Webster, G. Morphology and infrageneric relationships of the genus Jatropha (Euphorbiaceae). U. Calif. Publ. Bot. 1979, 74, 1-73. 30. - Vamosi, S.; Heard, S.; Vamosi, J.; Webb, C. Emerging patterns in the comparative analysis of phylogenetic community structure. Molecular. Ecology 2009, 18, 572592. 31. - Senters, A.; Solis, D. Phylogenetic relationship in Ribes (Glossulariaceae) inferred from ITS sequence data. Taxon 2003, 52. 51-66. 32. - Desfeux, C.; Maurice, S; Henry, J., Lejeune, B.; Gouyon, P. Evolution of reproductive systems in the genus Silene. Proc. R. Soc. Lond. B. 1996, 263, 409-414. 33. - Renner, S.; Won, H. Repeated evolution of dioecy from monoecy in Siparuna (Siparunaceae,Laurales). Syst. Biol. 2001, 50, 700-712. 34. - Weibie., G.; Oyama, R.; Donoghue. Phylogenetic analysis of dioecy on monocotylendons. Am. Nat. 2000, 155, 46-58. 35. - Ruiz, M. Sex chromosomes in plants. In: Encyclopedia of plant and crop science. Dekker Agropedie. Marcel Dekker, New York. 2004, 4, 1148-1151 pp.

36. - Skaletsky, H.; Kuroda-Kawaguchi, T.; Minx, P.; Cordum, H.; Hillier, L.; Brown. L.; Repping, S.; Pyntikova, T.; Ali, J.; Bieri, T.; Chinwalla, A.; Delehaunty, A.; Delehaunty, K.; Du, H.; Fewell, G.; Fulton, L.; Fulton, R.; Graves, T.; Hou, S.; Latrielle, P.; Leonard, S.; Mardis, E.; Maupin, R.; McPherson, J.; Miner, T.; Nash, W.; Nguyen, C.; Ozersky, P.; Pepin, K.; Rock, S.; Rohlfing, T.; Scott, K.; Schultz, B.; Strong, C.; Tin-Wollam, A.; Yang, S.; Waterston, R.; Wilson, R.; Rozen, S.; Page, D.; The male-specific region of the human Y chromosome is a mosaic of discrete sequence clases. Nature 2003, 423, 825-837. 37. - Charlesworth, D. Plant sex determination and sex chromosomes. Heredity. 88: 94-101. Charlesworth B. and Charlesworth D. 1978. A model for the evolution of dioecy and ginodioecy. Am. Nat. 2002, 112, 975-977. 38. - Charlesworth, B. The evolution of sex chromosomes. Science 1991, 25, 1030-1033 39. - Charleswort, B. Distribution of dioecy and self.incompatibility in angiosperms. In: Greenwood PJ. And Slakin M. (eds). Evolution-eassy in honour of Maynard Smith. Cambridge University Press. Cambridge 1985, 237-268 pp. 40. - Yi, C.; Zhang, S.; Liu, X.; Bui, T.H.; Hong, Y. Does epigenetic polymorphism contribute to phenotypic variances in Jatropha curcas L.? BMC Plant Biol. 2010, 10, 259:1259:9. 41. - Ocampo-Velzquez, R.; Malda-Barrera, G.; Surez-Ramos, G. Biologa reproductiva del organo Mexicano (Lippia graveolens Kunth) en tres condiciones de aprovechamiento. Agrociencia 2009, 43, 475-482. 42. - Pinilla, J.A.; Campusano, L.F.; Rojas, S.; Pachon-Garca, J. Caracterizacin Morfolgica y Agronmica de la Coleccin Nacional de Germoplasma de Jatropha curcas L. Orinoquia. 2011, 15, 131-147.

43. - Zapico, F.L.; Nival, S.K.; Aguilar, C.H; Eroy, M.N. Phenotypic Diversity of Jatropha curcas L. from Diverse Origins. J. Agric. Sci. Technol. 2011, 5, 1939-1250. 44. - Vijayanand, V.; Senthil, N.; Vellaikumar, S.; Paramathma, M. Genetic Diversity of Indian Jatropha Species as Revealed by Morphological and ISSR Markers. J. Crop. Sci. Biotech. 2009, 12, 115-120. 45. - Machado, R. Caracterizacin morfolgica y productiva de procedencias de Jatropha curcas L. Pastos y Forrajes. 2011, 34, 267-280.