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CULTIVO DE TEJIDOS ANIMALES

Banco de Clulas y Tejidos


CRIOPRESERVACIN

Antibiticos - Antimicticos
Concentracin Usos
Sulfato de Estreptomicina Penicilina G Neostatina Sulfato de Neomicina Sulfato de Kanamicina 50-100 g/ml

Espectro
Bacterias Gram Positivas y negativas Bacterias Gram negativas Hongos y levaduras Bacterias Gram Positivas y negativas Bacterias Gram Positivas y negativas, Micoplasmas Bacterias Gram Positivas y negativas, Micoplasmas Hongos y levaduras

Estabilidad Medio a 37oC


5

50-100U/ml 100 U/ml 50 g/ml

3 3 5

100 g/ml

Sulfato de Gentamicina

5-50 g/ml

Anfotericina B (Funguizone)

0,5 3 g/ml

Autoclave
Cualquier recipiente, herramienta... Debe ser esterilizada Cualquier recipiente, herramienta... Debe ser esterilizada

CRIOPRESERVACION

UCV. Facultad de Ciencias.

Sistemas de cultivo.
Cultivo en monocapa Cultivo tridimensional

Disgregacin enzimatica

Explantes

Han brindado la posibilidad de simular la arquitectura del tejido in vivo

APLICACIONES

Merentes E. y Nagy A. (1993)

LIPOSUCCIN

TERAPIA CELULAR

Potencial Teraputico de Clulas Madres Adultas Enfermedades Degenerativas, Cardiovasculares

ESTTICA

Enfemedad de Crohn (Fistulas recto-vaginal)

AMBIENTE FUNCIONAL IN VITRO

Componentes de un cultivo
SOPORTE FASE GASEOSA

CELULAS

MEDIO DE CULTIVO

Fase gaseosa
La concentracin de oxgeno necesaria depende de los requisitos de las clulas La concentracin de dixido de carbono depende de la capacidad buffer del medio de cultivo Usualmente el equilibrio dixido de carbono (en la fase gaseosa) - bicarbonato (en la fase lquida) acta como buffer del cultivo

Soporte
Slido: Clulas adheridas a vidrio o distintos tipos de materiales sintticos.
POLICUBETAS

FRASCOS ESTTICOS

BOTELLAS RODANTES (ROLLERS)

Soporte
Lquido: Clulas en suspensin

Superficies cubiertas con sustancias que favorecen el crecimiento celular

Soporte

CLULAS FBHE CRECIDAS DURANTE 5 DAS SOBRE SOPORTE PLSTICO DESNUDO

CLULAS FBHE CRECIDAS DURANTE 5 DAS SOBRE SOPORTE PLSTICO CON COBERTURA DE COLGENO I

MICROCARRIERS

Composicin de las soluciones Salinas balanceadas Ringer Tyrode NaCl KCl CaCl2 MgCl26H2 O MgSO47H2 O Na2HPO412 H2 O NaH2PO4H 2O KH2PO4 NaHCO3 Glucosa Rojo Fenol Atmosfera aire aire 95%aire/ 5%CO2 1.00 1.00 0.05 0.03 2.27 1.00 2.20 1.00 0.05 95%aire/ 5%CO2 1.10 0.005 aire 9.00 0.42 0.25 8.00 0.20 0.20 0.10 Gey 7.00 0.37 0.17 0.21 0.07 3.00 0.125 0.15 0.06 0.35 1.00 0.02 aire aire 0.20 0.10 0.154 0.39 Earle 6.80 0.40 0.20 Puck 8.00 0.40 0.012 Hanks 8.00 0.40 0.14 0.10 0.10 0.12 2.31 Dulbecco (PBS) 8.00 0.20 0.40 0.10

Medios de cultivo celulares


CUALIDADES: Especfico para la clula a cultivar Nutritivo pH adecuado Capacidad buffer Isotnico Estril

Medios de cultivo celulares


Medios definidos Medios de composicin natural: Plasma Suero Extractos de tejidos embrionarios

Medios de cultivo celulares


COMPONENTES: Agua Sales Glucosa cidos grasos Vitaminas Suero Pptidos Micro y oligoelementos Aminocidos esenciales Factores de crecimiento Otro regulador de pH Indicador de pH Antiespumante Antibiticos?

Factores crticos
Temperatura de cultivo: depende del origen de las clulas. Mamferos: 37C, peces e insectos: 18-22C, aves: 38.5C, etc. Contaminaciones: gran complicacin en los laboratorios de cultivos celulares, principalmente a escala industrial. Pueden ser por levaduras, hongos, virus, bacterias, micoplasmas, otras clulas, etc.