TEMAS SELECTOS DE BIOTECNOLOGIA.

ABSTRACT
Recientes investigaciones sealan que las semillas de Erythrina americana Miller tienen un alto contenido de protena y un adecuado contenido de lpidos, lo cual representa una alternativa para ser usadas como alimento humano. Las flores y semillas de E. americana conocidas como "Colorn" son altamente apreciadas por su sabor y son empleadas como complemento protenico en algunos pases. En muchas regiones de Mxico, tradicionalmente son cocinadas las flores, pero las semillas no son consumidas por su alta toxicidad debido a la cantidad de alcaloides que contienen.

OBJETIVO
Determinar el contenido y distribucin de alcaloides en las flores (cliz y corola) y localizar los alcaloides ms txicos. Mediante las tcnicas de cromatografa de lquidos y espectrometra de masas, se analiz el extracto observndose un alto contenido de alcaloides en el cliz en comparacin con el encontrado en la corola, sin embargo, los alcaloides txicos y -ritroidina fueron detectados en ambos tejidos.

INTRODUCCIN:

1976 OMS Creacin del comit de medicina tradicional.

Medicina tradicional mexicana (Erythrina).

Los estudios son escasos y aislados.

Potencial y versatilidad de usos.

Presencia de alcaloides.

Sotelo et al. sealaron que las semillas detoxificadas de E. americana presentaron un alto contenido de protenas y un adecuado contenido de grasas, lo cual representa una alternativa en su uso como forraje o alimento. Flores son utilizadas para la elaboracin de preparacin de sopas y ensaladas. Semillas molidas se utilizan para hacer tortillas.

El valor nutritivo del follaje y las semillas se afecta con: la edad, la estacin de cosecha y las especies.
Partes de la planta hojas vainas Protena % 24 21 Fibra cruda % 29 23 Carbohidratos % 21 24

Las semillas cocidas pueden sustituir hasta 60 % del alimento concentrado para pollos y peces

Debido a la concentracin de protenas y grasas, se debe estudiar mas para utilizarla confiablemente como forraje.

Las protenas encontradas presentan un buen balance de aminocidos segn lo establecido por la FAO.

Se evalo el contenido de alcaloides en el cliz y la corola de las flores de E. americana.

MATERIALES Y MTODOS.
Colecta del material vegetal Las flores para el estudio se colectaron de varios ejemplares elegidos al azar, localizados en la poblacin de Colornes, Estado de Mxico. La autenticidad del material vegetal fue realizada por el Herbario CHAPA.

Extraccin de alcaloides
Separacin del cliz (155g) y corola (189) Secado a 60 C Triturar en molino Refrigeracin en bolsas a 5C Degradacin del hexano en un soxhlet por 98h.

3 lavados con diclorometano para la separacin de grasas de los alcaloides. Fase acuosa. Ajusto de pH.

Lavado con H2SO4 2%

Extraccin de diclorometano

Secado con Na2SO4 anhidrido

Se evapor bajo presin reducida

Obtencin de alcaloides

Fase acuosa. Ajusto de pH.

Residuo vegetal Secado a temperatura ambiente

Disolvente tratado con Na2SO4 anhidrido (eliminar humedad)

Lavados con diclorometano

El extracto se disolvi en H2SO4 2%

Procesado con metano en un soxhlet

Evaporacin del NaSO4 anhidrido

Obtencin de alcaloides libres de extractos metanolicos

Fase acuosa. Ajusto de pH. Reflujo por 3 h. a temperatura entre 60 y 70C Enfriamiento y alcalinizacin con NaHCO3 para ajustar pH 8

Remanente

El disolvente se seco con Na2SO4 anhdrido

Extraccin con diclorometano

Evaporacin del NaSo4 anhdrido

Fraccin de alcaloides liberados

Purificacin de los alcaloides

Por cromatografa preparativa en columna se separaron y purificaron varios alcaloides.

Se recogieron fracciones de 5 ml y cada fraccin fue analizada por cromatografa encapa fina. Visualizndose con luz ultravioleta de onda corta y larga y con el reactivo de Dragendorff,

Identificacin de los alcaloides por cromatografa de lquidos y espectrometra de masas (CL/EM). anlisis se realizaron en un cromatografo de liquido de alta resolucin acoplado a un espectrmetro de masas. el cromatgrafo se us una columna usando como fase mvil un gradiente programado de tres disolventes: -A (0.1 % de acetato de amonio) -B(metanol) -C (acetonitrilo)
En Los

Gradiente programado para la columna:

TIEMPO 0 10 15 A% 75 50 50 B% 20 45 45 C% 0.5 5 5

Por espectrometra de masas se confirmaron e identificaron los alcaloides, lo cual se realiz comparando los espectros de los estndares.

RESULTADOS Y DISCUSIN.

cantidad de alcaloides liberados en el cliz en comparacin con la corola.

La identificacin por CL/EM permiti detectar estructuras no descritas en ambas estructuras florales de E. americana

Las estructuras moleculares identificadas :

Observaciones previas del contenido de alcaloides:

Tiempos de retencin para cada uno de los alcaloides encontrados en la CL/EM.

Cromatogramas en donde se puede observar la presencia de los alcaloides: 8-oxo--eritroidina, a-eritroidina y b-eritroidina.

CONCLUSIN
-Cliz > ptalos -Los alcaloides identificados en el cliz fueron:

Tres alcaloides del tipo lactnico, Tres del tipo dinico Uno no identificado.

En la corola se identificaron: Tres alcaloides del tipo lactnico Dos del tipo dinico.

El uso de las flores en platillos tradicionales, puede ocasionar un efecto tranquilizante y sedante en los consumidores, por la presencia de los alcaloides lactnicos - y -eritroidina identificados en el presente estudio.

La cromatografa de lquidos y espectrometra de masas permiti detectar las estructuras de alcaloides que en trabajos previos no se haban identificado en flores de esta especie.