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JORNADA DE EDUCACIN CONTNUA

CARRERA DE TCNICOS EN HEMOTERAPIA EUTM

OCTUBRE 2009
Slide 002

Situacin actual de la Inmunohematologa


302 Antgenos 30 Sistemas......262 Antgenos Colecciones Series baja frecuencia 40 Antgenos Series alta frecuencia

SISTEMA DE GRUPOS SANGUNEOS


Sistema que consta de 1 o ms Antgenos, codificados por un locus gentico o por un complejo de 2 o ms genes homlogos muy estrechamente ligados con poca o ninguna recombinacin entre ellos.

001 002 003 004

ABO MNS P Rh
Lutheran

ABO MNS P RH

011 012 013 014

Yt Xg

YT XG

Scianna SC
Dombroc DO k

005
006 007 008 009 010

LU
K LE FY JK DI

015
016 017 018 019 020

Colton
LW Ch/Rg H Kx

CO
LW CH/RG H XK

Kell Lewis Duffy Kidd Diego

Gerbich GE

021 022 023 024 025 026 027 028

Cromer Knops Indian Ok Raph John Milton Hagen I Globsido

CROM KN IN OK RAPH JMH I GLOB

029 030

Gill RHAG

GIL

COLECCIONES
Antgenos que tienen relacin: Serolgica Bioqumica Gentica Pero no llenan los criterios requeridos para ser considerados sistemas.

COLECCIONES
Cost ................. I ...................... Er ..................... Globsido......... Innominada....... Vel.................... 205 207 208 209 210 211

SERIES DE ANTGENOS
Serie 700 de baja incidencia (By,Chr,Bi,Toa)

Serie 901 de alta incidencia (Lan, Ata, Jra,Sda)

ANTICUERPOS DE SISTEMAS DE GRUPO SANGUINEO


IgM IgG IgA

ANTICUERPO CLINICAMENTE SIGNIFICATIVO


ANTICUERPO QUE PROVOCA LA DESTRUCCION DE LOS ERITROCITOS QUE POSEEN EL ANTIGENO CORRESPONDIENTE EN FORMA INMEDIATA O RETARDADA

Mecanismos de dao celular mediado por anticuerpo


Activacin del sistema de complemento Captacin por receptores para el fragmento Fc por macrfagos ADCC (citotoxicidad mediada por anticuerpos) Accin de clulas NK Accin de neutrfilos

Otros mecanismos de dao celular


Macrfagos armados

Destruccin eritrocitaria por productos de oxgeno reactivo

MACRFAGOS ARMADOS
Macrfagos con FcRI con alta afinidad por IgG Los macrfagos se saturan con el anticuerpo sintetizado tempranamente No se detecta libre en plasma Sistema eficiente para destruir eritrocitos

Los Anticuerpos HLA pueden causar destruccin eritrocitaria?


Anti-Bga con capacidad ltica en situaciones de incompatibilidad HLA

FACTORES INFLUYEN EN LA ACTIVIDAD DE UN ANTICUERPO Tipo de anticuerpo Cantidad fijada Complemento Actividad del sistema macrofgico Balance de CD 47/inhibidor

CARACTERSTICAS DE ALGUNOS ALOANTICUERPOS DE SISTEMAS DE GRUPO SANGUNEO

SISTEMA ABO
Anti-A . IgM
IgG

Anti-B .

IgM

IgG

Sistema Rh
IgG en su mayora IgM EHFN

RHT

Sistema Rh
Anti-D Anti-C Anti-E Anti-c Anti-e

Sistema Kell
IgG RHT EHFN Anti-K Anti-k

Sistema Kidd
IgG IgM (pocos ejemplos) En general asociados a otros anticuerpos RHT EHFN rara y leve Anti-Jk a Anti-Jk b

Sistema Duffy
IgG IgM (raros) RHT inmediata/retardada EHFN rara y leve Anti-Fy a Anti-Fy b

Sistema MNSs
Anti-M IgM Anticuerpo natural regular... 64/22500 donantes (0.3%) Perrault 1973

RHT rara EHFN rara leve entidad

Sistema MNSs
Anti-N IgM, de menor frecuencia que anti-M No hay reportes de EHFN severa RHT retardada

Anti-S
IgG Casos descritos natural IgM RHT EHFN severa

Anti-s
Poco frecuente IgG EHFN severa RHT retardada

Sistema Lutheran
IgG RHT retardada EHFN rara Anti-Lu a Anti-Lu b

ALOANTICUERPOS MAS FRECUENTES


Anti-D Anti-K Anti-E Anti-c Anti-Fy a Anti-C Anti-Jk a

M. Reid, Immunoh. 2000

EFECTO DOSIS
Anti-c, -E Anti-K, -k Anti-M,-S,-s Anti-Fya, -Fyb Anti-Jka,-Jkb

FRECUENCIA DE ALOANTICUERPOS A NIVEL NACIONAL EMBARAZADAS Anti-D, Anti-E, Anti-C, Anti-K TRANSFUNDIDOS Anti-K, Anti-E, Anti-e
Slepak, Silva Rev.ArgTransf.2007,1;81-5

TCNICAS DE INVESTIGACIN DE ANTICUERPOS


MACRO Lmina Tubo * Tcnica AGH standard * Potenciadores: -Macromolculas -LISS -Enzimas -PEG, Polybrene Adsorcin-elucin

OTRAS TCNICAS
Micro tcnicas Columnas de gel Microplaca Fase slida Adherencia por afinidad

EFECTO DE LAS ENZIMAS SOBRE LOS ANTGENOS


Favorecen la reaccin: Rh, Lea, Leb, Jka, Jkb, P1, I Destruyen su estructura: Fya, Fyb, M, N, S, Mg, Mia, Vw, Xga, Yta, Ge, Ch, Rg, JMH

TCNICAS DE MAYOR SENSIBILIDAD


ELISA CITOMETRA DE FLUJO TCNICAS AUTOMATIZADAS TCNICA DE MONOCAPA MONOCITOS (MMA) QUIMIOLUMINISCENCIA

ESTUDIOS COMPARATIVOS DE DIFERENTES TCNICAS DE INVESTIGACION DE ALOANTICUERPOS

Bromilow 1991 Voak 1999 Weisbach 1999 Mayor sensibilidad columna de gel/tubo

ESTUDIOS COMPARATIVOS DE DIFERENTES TCNICAS


Phillips 1992 Pinkerton 1993...mayor sensibilidad tubo/columna de gel (relacin suero/cl elevada 120:1 y lectura microscpica) Especificidad Tubo LISS-AGH 98.6% IMMUCOR-Capture 94% Gel 94%

COMPARACION DE TECNICA EN TUBO STANDARD Y LISS


STANDARD LISS LISS-PEG

SENSIBILIDAD STANDARD 73.1% LISS 84.1% LISS-PEG 96.3% (Low, Immunoh 1998)

STANDARDS DE LA BBTS 2007 BCSH


TECNICAS DE INVESTIGACION DE ANTICUERPOS TUBO LISS-AGH COLUMNAS DE GEL FASE SOLIDA

STANDARDS DE LA BBTS 2007 BCSH


PANEL DE SCREENING C,c,D,E,e,K,k,Fy a, Fyb, Jk a, Jk b, S,s, M,N, Le a Homocigotos Fy a- Fy b- Jk a- Jk b- S NO POOL DE ERITROCITOS

ANTICUERPO CLNICAMENTE SIGNIFICATIVO?


- British Committee for Standards in Haematology : Anticuerpo clnicamente significativo es aquel que es capaz de provocar morbilidad debida a la destruccin acelerada de una proporcin significativa de eritrocitos transfundidos Garratty 2008

Cmo confirmarlo?
Se debera realizar un estudio de la sobrevida con eritrocitos marcados con 51Cr, o estudios funcionales para determinar si existe una disminucin de la misma, independientemente de la especificidad.

FLUJOGRAMA PARA DIVERSAS SITUACIONES Paciente con PAGH Indirecta POSITIVA PAGH Directa NEGATIVA

Enfrentar a panel Usar eritrocitos seleccionados para confirmar el anticuerpo sospechado Fenotipar al paciente

REACTIVIDAD CON EL PANEL * Algunas o todas las clulas dan reacciones positivas Diferentes grados de reactividad Sospecha de mltiples anticuerpos Fenotipo extendido del paciente Enfrentar con muestra de panel con fenotipo similar Tcnicas con enzimas Tcnicas de adsorcin-elucin

REACTIVIDAD CON EL PANEL


Todas las clulas del panel dan reacciones POSITIVAS Patrn similar de reactividad Anticuerpo contra antgeno de alta prevalencia

Paciente con PAGH Indirecta POSITIVA + PAGH Directa POSITIVA * Fenotipo

Fue transfundido en el ltimo mes? SI RHT? PANEL ALOANTICUERPO

Elucin Eluato Reactivo Suero no reactivo.RHT etapa precoz

Fue transfundido en los ltimos 3 meses? NO AUTOANTICUERPO ELUCIN

PANEL

Eluato Reactivo.. AHAI Suero no reactivo

CONCLUSIONES
No existe una nica tcnica ideal para la deteccin de anticuerpos Observar los diferentes parmetros que intervienen en la reaccin Ag-Ac (temperatura, pH, medio, relacin suero/clulas) Otras tcnicas: elucin como fuente de anticuerpos, fijacin-elucin, tratamiento de las clulas con diferentes reactivos.