Dernire mise jour Janvier 2012

LABORATOIRES DE BIOLOGIE ET RISQUES

PAR EMBOLO ELISEE Matre s sciences Biologie molculaire et cellulaire eliseeembolo@yahoo.fr UNIVERSITE DE DOUALA/CAMEROUN

INTRODUCTION
Cette prsentation tire ses donnes, de la troisime dition du manuel de scurit biologique en laboratoire de l OMS. Elle traite, de: - La matrise de risque biologique; - Mthode de travail en laboratoire; - Normes de travail au laboratoire; - Prvention et contrle au laboratoire. Il est ncessaire de matriser, les bonnes pratiques de laboratoire puisqu elles permettrons aux biologistes: - d laborer et d tablir, les recueils nationaux de directives pratiques. - De scuriser les ressources microbiologiques qui n entravent pas leur utilisation en clinique, dans la recherche et en pidmiologie.

CLASSIFICATION DES MICROORGANISMES PAR GROUPE DE RISQUE les microorganismes infectieux sont classs par groupe de risque (groupes de risque de l OMS 1, 2, 3 et 4). NB: Cette classi cation par groupe de risque n est applicable qu aux travaux de laboratoire.

CLASSIFICATION DES MICRO-ORGANISMES INFECTIEUX PAR GROUPE DE RISQUE Groupe de risque 1 (risque faible ou nul pour les individus ou la collectivit) Micro-organisme qui, selon toute probabilit, ne peut causer de maladie humaine ou animale.  Groupe de risque 2 (risque modr pour les individus, faible pour la collectivit) Germe pathogne capable de provoquer une maladie humaine ou animale mais qui ne prsente vraisemblablement pas un srieux danger pour le personnel de laboratoire , la collectivit, le btail ou l environnement. Une exposition en laboratoire est susceptible d entraner une infection grave, mais qui peut tre traite ou prvenue efficacement; par ailleurs le risque de propagation de l infection est limit. 
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 Groupe de risque 3 (risque important pour les individus, faible pour la collectivit) Germe pathogne qui cause habituellement une grave maladie humaine ou animale, mais qui ne se transmet gnralement pas d un individu l autre. Il existe un traitement et des mesures prventives efficaces.  Groupe de risque 4 (risque important pour les individus comme pour la collectivit) Germe pathogne qui cause habituellement une grave maladie humaine ou animale et peut se transmettre facilement d un individu l autre, soit directement, soit indirectement. Il n existe gnralement ni traitement, ni mesures prventives efficaces.

EXEMPLE DE MICROORGANISMES PAR GROUPES DE RISQUES

GROUPE DE RISQUE 1 risque faible ou nul pour les individus ou la collectivit RISQUE MICROORGANISMES Bacillus subtillis Levure de bire Sacharomyces cerevisiae Escherichia coli non toxique INDIVIDU NUL NUL NUL NUL COLLECTIVITE NUL NUL NUL NUL MALADIES POTENTIELLES R.A.S R.A.S R.A.S R.A.S

Tous les microorganismes n appartenant pas la classe 2,3,4.

GROUPE DE RISQUE 2 risque modr pour les individus, faible pour la collectivit RISQUE MICROORGANISMES Staphylococcus aureus Cytomegalovirus Aspergillus fumigatus Adenoviridae Paramyxovirus Trichophyton rubium INDIVIDU MODERE MODERE MODERE MODERE MODERE MODERE COLLECTIVITE FAIBLE FAIBLE FAIBLE FAIBLE FAIBLE FAIBLE MALADIES POTENTIELLES
TRAITEMENT ET PREVENTION TRAITEMENT ET PREVENTION TRAITEMENT ET PREVENTION TRAITEMENT ET PREVENTION TRAITEMENT ET PREVENTION TRAITEMENT ET PREVENTION

Tous les microorganismes n appartenant pas la classe 1,3,4.

GROUPE DE RISQUE 3 risque important pour les individus, faible pour la collectivit RISQUE MICROORGANISMES
Mycobactrium turberculosis

INDIVIDU IMPORANT IMPORTANT IMPORTANT IMPORTANT IMPORTANT IMPORTANT

COLLECTIVITE FAIBLE FAIBLE FAIBLE FAIBLE FAIBLE FAIBLE

MALADIES POTENTIELLES
TRAITEMENT OU PREVENTION TRAITEMENT OU PREVENTION TRAITEMENT OU PREVENTION TRAITEMENT OU PREVENTION TRAITEMENT OU PREVENTION TRAITEMENT OU PREVENTION

HIV ATNC RICKETTSIA E.coli souche cytotoxiques Taenia soluim

Tous les microorganismes n appartenant pas la classe 1,2,4.

GROUPE DE RISQUE 4 risque important pour les individus comme pour la collectivit RISQUE MICROORGANISMES
Ebola

INDIVIDU IMPORANT IMPORTANT IMPORTANT IMPOTANT IMPORTANT

COLLECTIVITE IMPORTANT IMPORTANT IMPORTANT IMPORTANT IMPORTANT

MALADIES POTENTIELLES
PAS DE TRAITEMENT/ MORTELLE PAS DE TRAITEMENT/ MORTELLE PAS DE TRAITEMENT/ MORTELLE PAS DE TRAITEMENT/ MORTELLE PAS DE TRAITEMENT/ MORTELLE

Variole Cime-congo Marbourg Machoupo

Tous les microorganismes n appartenant pas la classe 1,2,3.

QUELS SONT LES DIFFRENTS TYPES DE LABORATOIRES

Selon le groupe de risque d appartenance des microorganismes manipuls, il existe aussi des laboratoires y affrents; on y distingue par consquent: le - LABORATOIRE DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 1, - LABORATOIRE DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 2, - LABORATOIRE DE CONFINEMENT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 3, - LABORATOIRE DE CONFINEMENT A HAUTE SCURIT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 4.

C EST QUOI LE NIVEAU DE SCURIT BIOLOGIQUE?  C est un indice composite bas sur le type d organisation, le mode de construction, les moyens de con nement et l appareillage du laboratoire ainsi que sur les pratiques et modes opratoires observer pour travailler sur des agents appartenant aux divers groupes.
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COMMENT EVALUER LE RISQUE D UN MICROORGANISMES?

 La scurit biologique repose essentiellement sur une valuation du risque ainsi le facteur le plus important pour ce fait reste le jugement professionnel.  Toutefois, il ne suffit pas de connatre le groupe de risque auquel appartient un agent pathogne donn pour valuer le risque effectif.  D autres lments d apprciation doivent galement tre pris en compte en tant que de besoin, savoir : 1. La pathognicit du germe et la dose infectieuse , 2. L issue vraisemblable d une exposition au germe , 3. Le mode de contamination naturel , 4. Les autres voies ou modes de contamination rsultant de manipulations en laboratoire (voie parentrale, particules aroportes, voie digestive) , 5. La stabilit du germe dans l environnement , 6. La concentration du germe et le volume de matriel biologique concentr Manipuler, 7. La prsence d un hte appropri (humain ou animal), 8. Les informations tires de l exprimentation animale, les rapports faisant tat d infections contractes en laboratoire ou les rapports mdicaux. 10

9. Le type doprations envisages (traitement par les ultra-sons, production darosols, centrifugation, etc.) 10. Toute manipulation gntique du micro-organisme susceptible dtendre sa gamme dhtes ou de modier sa sensibilit aux traitements reconnus comme efficaces. 11. La possibilit dintervenir localement titre prophylactique ou curatif. En sappuyant sur les informations recueillies lors de lvaluation du risque.

LABORATOIRE DE NIVEAU 1

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LABORATOIRE DE NIVEAU 2

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LABORATOIRE DE NIVEAU 3

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LABORATOIRE DE NIVEAU 4

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POURQUOI LES LABORATOIRES DE BIOLOGIE DOIVENT-ILS TRE DIFFRENTS?

Toutes ces variations dans le type de laboratoires, tiennent compte des situations connues pour engendrer des problmes, notamment : 1. La formation d arosols 2. Le travail sur des volumes importants ou des concentrations leves de micro-organismes 3. Un personnel ou des appareils trop nombreux en gard la place disponible 4. L infestation par des rongeurs ou des arthropodes 5. Entre interdite 6. Lordonnancement des tches : utilisation d chantillons et de ractifs particuliers.
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COMMENT DOIT-ETRE CONCU UN LABORATOIRE DE BIOLOGIE ?

 Le laboratoire doit tre suffisamment spacieux pour qu on puisse travailler en toute scurit et procder facilement au nettoyage et la maintenance.  Les murs, les plafonds et les sols doivent tre lisses, impermables aux liquides.  L clairage doit tre assez suffisant, viter les lumires blouissante.  La paillasse doit tre en matire anti oxydable, et impermable l eau.  viter l encombrement des paillasses et des zones de passage.  Les vestiaires pour les vtements de ville et les objets personnels doivent se trouver en dehors des zones de travail.  Les zones prvues pour se restaurer, boire ou se reposer doivent galement se trouver en dehors des zones de travail.  On installera des lavabos, si possible avec l eau courante, dans chaque salle du laboratoire, de prfrence prs de la porte.  Les portes doivent tre munies de panneaux transparents.  Au niveau de scurit biologique 2, il doit y avoir un autoclave ou autre moyen de dcontamination distance suffisamment proche du laboratoire.  Les systmes de scurit doivent couvrir les risques d incendie.
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 On prvoira des zones ou des salles de premiers soins, convenablement quipes et facilement accessibles.  Dans le plan de toute nouvelle installation, il faudra prvoir un systme de ventilation mcanique assurant un ux d air dirig vers l intrieur sans recyclage.  Il est indispensable que l alimentation en eau soit able et de bonne qualit. Il ne doit y avoir aucune interconnexion entre les branchements destins au travail du laboratoire et le rseau d eau potable. Le rseau public d adduction doit tre protg par un dispositif anti-retour.  L alimentation lectrique doit tre able et de puissance suffisante.  L alimentation en gaz de ville doit tre able et suffisante. Il est impratif d assurer le bon entretien de cette installation.  Il arrive que les laboratoires et les animaleries soient la cible de vandales. L installation de systmes de protection physique et de scurit anti-incendie doit tre envisage.
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Il incombe l employeur, par l entremise du directeur du laboratoire, de veiller ce que la sant du personnel soit surveille de faon satisfaisante. Cette surveillance a pour objectif de dpister les maladies d origine professionnelle. Pour y parvenir, il faut : 1. Assurer l immunisation active (vaccination) et passive du personnel lorsqu il y a lieu. 2. Faciliter le dpistage prcoce des infections contractes au laboratoire 3. Ne pas con er de manipulations haut risque aux personnes particulirement vulnrables (par ex. les femmes enceintes ou les sujets immunodprims) 4. Prendre des mesures de protection efficaces et veiller l ef cacit des dispositifs de protection.
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POURQUOI LA SURVEILLANCE MEDICO-SANITAIRE ESTELLE UTILE POUR LES EMPLOYS D UN LABORATOIRE DE BIOLOGIE?

QUESTION SE POSER AVANT TOUT LIMINATION DES DCHETS AU LABORATOIRE?

1. Ces objets ou ce matriel biologique ont-ils t striliss ou dsinfects efficacement par l un des procds approuvs ? 2. Dans la ngative, ont-ils t emballs selon une mthode agre en vue de leur incinration immdiate sur place ou de leur transport vers un autre tablissement capable d effectuer cette opration ? 3. Llimination des objets ou du matriel biologique striliss ou dsinfects comporte-t-elle des risques supplmentaires, biologiques ou autres, pour le personnel charg de l limination immdiate sur place ou pour les personnes susceptibles d tre en contact avec ces dchets en dehors du laboratoire ?
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COMMENT MANIPULER ET LIMINER LE MATRIEL ET LES DCHETS CONTAMINS?

Le passage dans un autoclave vapeur est la mthode de choix chaque fois que l on doit procder une dcontamination. Le matriel destin tre dcontamin et limin sera plac dans des rcipients par exemple des sacs en plastique autoclavables comportant le code couleur qui indique si leur contenu doit tre autoclav ou incinr. Les diffrentes catgories sont les suivantes : 1. Dchets non contamins (non infectieux) pouvant tre rutiliss, recycls ou jets avec les dchets mnagers ordinaires, 2. Objets piquants ou tranchants contamins (infectieux) aiguilles hypodermiques, scalpels, couteaux, verre bris; ces objets doivent toujours tre rassembls dans des collecteurs imperforables (botes anti-piques) munis de couvercles et traits comme du matriel infectieux, 3. Matriel contamin destin tre dcontamin par passage l autoclave, puis lav et rutilis ou recycl, 4. Matriel contamin destin tre autoclave puis limin, 5. Matriel contamin destin tre directement incinr.
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QUELS SONT LES MOYENS DE DECONTAMINATION?

 Dsinfection et strilisation Un nettoyage pralable est ncessaire pour assurer une bonne dsinfection ou une bonne strilisation. PRODUITS UTILISES A CET EFFET. (5 % de chlore actif) Hypochlorite de calcium. (70 % de chlore actif) Dichloroisocyanurate de sodium, poudre. (60 % de chlore actif) Dichloroisocyanurate de sodium, comprims. (25 % de chlore actif) Chloramine. Dioxyde de chlore (ClO2). Formaldhyde (HCHO). Formaldhyde (OHC(CH2)3CHO). Drivs phnoliques. Composs d ammonium quaternaire Alcools. Iode et iodophores Peroxyde d hydrogne et peracides 21

ESB OU PSM
Enceinte de scurit biologique: ESB Poste de scurit microbiologique: PSM Ils servent viter que l oprateur, le local du laboratoire et le matriel de travail ne soient exposs aux arosols ou claboussures infectieux qui pourraient se produire lors de la manipulation de matriels biologiques contenant des agents pathognes, comme les cultures primaires, les souches pour les cultures et les chantillons destins au diagnostic.

Remarque. Les hottes ux laminaire horizontal ou vertical ne sont pas des

enceintes de scurit biologiques et ne doivent pas tre utilises comme telles. Au cours des annes, la conception de base des ESB a subi un certain nombre de modi cations. L une des plus importantes a t le montage d un ltre particules de haute ef cacit ( ltre HEPA) sur le systme d vacuation. Ce ltre est capable d arrter 99,97 % des particules de 0,3m de diamtre et 99,99 % de celles dont le diamtre se situe de part et d autre de cette valeur. Un ltre HEPA peut donc arrter ef cacement tous les agents infectieux connus et l on peut donc tre certain que l air qui sort de l enceinte est exempt de germes pathognes.
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PLANS D URGENCE TENIR EN CAS D URGENCE.

Tous les laboratoires qui travaillent sur des micro-organismes infectieux doivent instituer les mesures de scurit qu exigent les risques prsents par les germes et les animaux manipuls. Plan d urgence Le plan doit prvoir la conduite tenir dans diffrentes situations : 1. Mesures de scurit en cas de catastrophe, naturelle ou autre : incendie, inondation, sisme ou explosion par exemple. 2. Evaluation du risque biologique. 3. Mesures prendre d exposition accidentelle et dcontamination. 4. Evacuation d urgence du personnel et des animaux. 5. Traitement mdical d urgence des personnes exposes et des blesss. 6. Surveillance mdicale des personnes exposes. 7. Prise en charge clinique des personnes exposes. 8. Enqute pidmiologique. 9. Suivi de la situation aprs l accident.
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EQUIPEMENT ET MATRIEL DE SECOURS

Les quipements de secours suivants doivent tre disponibles : 1. Trousse de premiers secours, comportant des antidotes universels et spci ques. 2. Extincteurs appropris et couvertures anti-feu. La liste complmentaire ci-aprs, donne titre indicatif, pourra tre adapte la situation locale :  Vtements de protection totale (combinaisons, gants et cagoules pour les accidents impliquant des micro-organismes appartenant aux groupes 3 et 4).  Masques respiratoires complets avec cartouche ltrante contre les produits chimiques et les particules.  Matriel pour la dsinfection des salles, pulvrisateurs et vaporisateurs de formaldhyde, par exemple.  Civire.  Outils, marteaux, haches, cls, tournevis, chelles, cordages par exemple.  Matriel de signalisation et de balisage.

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