REACCIN DE FENTON

FORMACION DE OXIDO NITRICO (NO)

El estrs Oxidativo es la oxidacin no controlada, de origen exgeno o endgeno que se produce por desbalance de los mecanismos antioxidantes a nivel celular.

Mecanismo de accin de un antioxidante fenlico

Estructura del acido Ascorbico

OH HO HO
(AscH2)

O OH

Sinergismo entre Vitamina E y Vitamina C

vitC y vitE como Co-Antioxidantes

H2 O OO
R R O

OH
R

Lipid
X H X O2 OO

Se representa una capa lipdica de la bicapa de una membrana, Una vez que el oxgeno reacciona con la cadena lipdica, el cambio de los momentos dipolares determina que los radicales peroxilos puedan flotar hacia Vitamin E la interface c

vitC and vitE como Co-Antioxidantes

PhGPx PLA 2
OOH
R R O

O
R R R

OH
R

Lpido
La vitamina E remueve los radicales peroxilos; el ascorbato puede reciclar la vitE; luego, las enzimas remueven los cidos grasos daados y insertan uno nuevo, reparando los lpidos de la membrana.

Vitamina E

Px

H2 O

AscH

Asc

FA-CoA

vitC y vitE : Co-antioxidantes

La ordenacin termodinmica muestra que el radical tocoferol TO, es ms oxidante que AscSe cree que el ascorbato ayuda a reciclar el TO, el que vuelve a TOH

TO + AscH- TOH + Asc-

Este mecanismo protege las molculas de la oxidacin cuando no hay enzimas que puedan reciclar al TO. Est en debate si este mecanismo es importante en clulas o tejidos, aunque se piensa que protegera a las LDL de las oxidaciones.

1 Autoxidacion
Este es un proceso radicalario, en cadena que se desarrolla en tres etapas:

1.1 Iniciacin. Abstraccin de un hidrgeno desde un

grupo metileno por ataque de un ROS a un lpido. Formacin de dienos conjugados para estabilizar el radical.

1.2 Propagacin. Los radicales peroxilos pueden

abstraer hidrgenos de otras molculas.Origina perxidos lipdicos.

1.3 Terminacin. Reaccin entre radicales para

dar especies ms estables no iniciadoras y no propagadoras.Se liberan aldehdos, hidrocarburos de cadena corta, etc.

Initiation

En condiciones aerbicas, los dienos en presencia del O2 originan peroxilos (ROO)

Propagacin

Termination

Peroxidacin de lpidos
R-OO-H
Hidroperoxido Lipidico

Eventos de iniciacin

Iniciacin
Radical libre Centrado en el carbono

O2

Reaccin en cadena ROO

Radical Peroxilo

Propagacin

R-H
H H

Grasa poliinsaturada

Diagrama que representa el balance entre las caractersticas antioxidantes y pro-oxidantes de los flavonoides y otros fenlicos dietarios. Las formas reducidas de los flavonoides actan como antioxidantes, sin embargo, las Formas oxidadas (radicales fenoxilos y intermediarios quinonas) pueden tener actividades prooxidantes.

Accin antioxidante, como donadores de hidrgenos

ndices y mtodos para evaluar el estrs oxidativo

Lipoperoxidacin. Productos de las vas y Mtodos para evaluar las Concentraciones.

Ensayo de TBARS para MDA: El Ensayo ms usado para medir Peroxidacion de lpidos.
Popular - Es muy simple de ejecutar Problemas
El ensayo de los TBARS no es especfico para MDA

OXIDACION DE LDL DIENOS CONJUGADOS

Antioxidantes en Plasma y LDL

Protenas no-enzimas Protenas de unin para Cu y Fe (albmina, ceruloplasmina, transferrina)

Enzimas Superxido dismutasa extracelular, glutatin peroxidasa

Pequeas moleculas antioxidantes Solubles en agua cido rico cido Ascrbico (Vitamina C) Bilirrubina-Albmina Glutatin (GSH)

Concentraciones plasmticas tpicas

M 300 50 15 <2 mol/mol LDL 10 0.4 0.2 0.2

Lipido-solubles (asociada a lipoproteina) , -Tocoferol (Vitamina E) 25 1.0 0.5 0.5

Ubiquinol-10 (coenzima Q10)

-Caroteno (Pro-Vitamina A) Licopeno

MEDICION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE IN VITRO

FRAP Ensayo de la actividad antioxidante para reducir al Fe3

(plasma u otros) TRAP Ensayo del Potencial Total Atrapador de Radicales Peroxilos (Wilson, 2001) FOX Ensayo de Lipoperoxidacin. Medicin Hidroperxidos

ORAC Oxygen radical absorbance capacity (Ou et al, 2001)

TEAC (o TAS) Capacidad antioxidante equivalente al trolox.
Oxidacin de ABTS a ABTS+ por ferrilmioglobina.

Estos ensayos se usan para evaluar la eficacia de un antioxidante, en Soluciones.

Fig 1.

Medicin de F2-Isoprostanes: Como ndice de Estrs Oxidativo

Son Productos de Oxidacin del Acido Araquidnico

F2-Isoprostanos
Los PGF2 son producidos no-enzimticamente por peroxidacin del cido araquidonico (AA) inducida por radicales libres Son producidos en abundancia in vivo, en cantidades que exceden los PGs derivados de la ciclooxigenasa Son capaces de ejercer potentes acciones biolgicas

Se forman 4 ismeros (series 5-, 8-, 12-, and 15-), cada una de ellas comprende 8 diastereoismeros racmicos

Ventajas de Medir F2-IsoPs como Biomarcadores de Peroxidacin Lipdica

Son Productos Especficos de peroxidacion de lpidos. Son Estables. Son Detectables en todos los tejidos y fludos biolgicos normales. Se puede definir un rango normal

Qu es la oxidacin de una protena.

Es la modificacin covalente de una protena inducida por intermediarios reactivos del oxgeno o por productos intermediarios de estres oxidativo.

Grupos carbonilos proteicos

Los grupos carbonilos son estables (ayuda a la
deteccin y se puede guardar)

Estn presente en bajos niveles en las preparaciones preoteicas (~1 nmol/mg protein ~ 0.05 mol/mol ~ 1/3000
amino acids)

Se observan elevaciones de 2- a 8- veces los carbonilos de las protenas en condiciones de estrs oxidativo in vivo in vitro son inducibles por casi todos los tipos de oxidantes. Se dispone de ensayos sensibles ( 1 pmol)

Agentes que producen la oxidacin de una protena

Reactivos Qumicos (H2O2, Fe2+, Cu1+, glutation, HOCl, HOBr, 1O2, ONOO-) Fagocitos Activados (actividad oxidativa) -irradiacin en la presencia de O2 UV , ozono Perxidos Lipidicos (HNE, MDA, acrolein) Mitocondria (transporte electronico) Enzimas Oxidoreductasas (xantine oxidasa, mieloperoxidase, P-450 enzimas) Drugs y sus metabolitos

Amino acidos que forman carbonilos por oxidacin catalizada por metales
Proline (-glutamylsemialdehyde) Arginine (-glutamylsemialdehyde) Lysine (amino-adipicsemialdehyde) Threonine (amino-ketobutyrate)

Deteccin de carbonilos proteicos

Medicin de los niveles de carbonilos totales, por reaccin con DNPH*, seguido por espectroscopa (A370), ELISA, o immunohistoqumica
Medicin de los niveles de carbonilos en determinada protena dentro de una mezcla de protenas (muetra de tejidos, extracto de clulas) por reaccin con DNPH seguido por inmunoensayo Western blot
*DNPH, dinitrophenylhydrazine

Measurement of total carbonyls (Spectrophotometric DNPH assay)

DNP

protein

H2 O2 Fe activated neutrophil

oxidized protein

DNPH

DNPprotein

Absorbance at 370 nm

e.g. arg ---> -glutamylsemialdehyde

Dinitrophenylhydrazone-protein

Componentes de DNA y RNA

Pyr im idin es: O HN O N H t h ym in e CH 3 N O N H cyt osin e O N N H NH 2 NH 2 CH 3 O HN N H u r acil
H O CH 2 O OH

H O CH 2

OH

H OH H

-D-2-Deoxyr ibose

5-m et h ylcyt osin e Pu r in es

NH 2 N H N H aden in e N N H HN H2N

O
H H OH OH

N N H
-D-Ribose

N H gu an in e

azcares

bases

Puntos posibles para el ataque por Radicales libres

O O O P O CH 2
4'

N7
8 9

5 4

6 3

1 2

NH NH 2 O

-O
3'

N
1' 2'

HN3
2

4 1

CH 3
5 6

O O P O
4'

CH 2 O O
3'OH

1' 2'

Oxidative Damage to the Bases

Ataque de HO sobre pirimidinas
O HN 3 O
5 21 6 4

OH CH 3 reducing H

N H

O HN O N H CH 3 + H

HO

HN O N H O HN O N H

CH 3 oxidizing

H OH

Thymine

.
H

CH 2

Dao Oxidativo a las Bases

Ataque del HO sobre las purinas
O HN1 6 5
2

H 2N

N HO O

N H

7N 9 8

O HN H 2N N N H N + HO H

OH HN H 2N N

.N
H

N H

Guanine HN H 2N

.N
H

N OH H

Oxidacin del DNA puede conducir a mutaciones

8-h ydr oxygu an in e

O HN N H2N N N H N OH HN N H2N N N H O N H

Basepair s A T
O

G C 8 OHdG A

8 OH-Gu a (en ol)

8 oxo-Gu a (k et o)

H2N N

H N

H H N N H

N NH N H

La lectura del 8-OHdG puede conducir a una mutacin (GCAT)

N H

N O

Aden in e

8 OH-Gu a

A. Clculo del ensayo comet. B. Jerarquizacin de los comets, desde 1 a 5.