Aminocidos

Propriedades fsico-qumicas

Prof. Rodrigo Volcan Almeida DBq IQ UFRJ

O que so aminocidos?

Aminocidos
grupo amino grupo carboxil

no ionizada

forma ionizada

Nomenclatura

Smbolo
A (Ala) R (Arg) N (Asn) D (Asp) C (Cys) Alanina Arginina

Resduo

Asparagina cido Asprtico Cistena

E (Glu)
Q (Gln) G (Gly) H (His) L (Ile) L (Leu) K (Lys) M (Met) F (Phe) P (Pro) S (Ser) T (Thr) W (Trp) Y (Tyr) V (Val)

cido Glutmico
Glutamina Glicina Histidina Isoleucina Leucina Lisina Metionina Fenilalanina Prolina Serina Threonine Tryptophan Tyrosine Valine

Nomenclatura

Isomeria

Isomeria

Propriedades fsico-qumicas

Absoro de luz

Fluorescncia
O que fluorescncia?

Fluorescncia vs Fosforescncia

Fluormetro

Fluorescncia de aminocidos

fenilalanina

tirosina

triptofano

Espectro de fluorescncia de aminocidos aromticos em tampo fosfato de potssio 0,01M pH 7,0. 100mM Phe, 6mM Tyr e 1mM Trp

Fluorescncia de aminocidos
282nm 257nm 304nm 355nm

274nm

278nm

Que comprimento de onda de excitao foi utilizado?

Fluorescncia em Protenas
Dependncia do Ambiente
278nm nativa 295nm

desnaturada Diminuio da intensidade de fluorescncia Deslocamento do pico de emisso deslocamento para o azul

9 Tyr e 1 Trp

Espectro de emisso de fluorescncia da RNAse T1 (1mM) em tampo acetato (0,1M, pH 5,0). A enzima foi desnaturada com 6M GCl. (a) 278nm (b)295 nm

Quantos
aminocidos existem?

Aminocidos no-comuns

Colgeno

Protenas envolvidas na coagulao sangnea

hormnio

Alguns derivados de aminocidos com atividade biolgica

neurotransmissor

Alguns derivados de aminocidos com atividade biolgica

neurotransmissor

Outras funes de aminocidos

Glu glutamato monossdico Asn e Gln Detoxicao da amnia (nos animais) His histamina

Outras funes de aminocidos

Arg ciclo da uria

Propriedades qumicas
Reaes dos seus grupos funcionais:
Grupo carboxila Grupo amino Cadeia lateral

Aplicaes:
Identificao e anlise dos aminocidos em peptdeos e protenas Seqenciamento de protenas Modificaes qumicas dos resduos de aminocidos nas protenas, capazes de produzir modificaes em sua atividade biolgica Sntese qumica de peptdeos

Ionizao de aminocidos

Como se distribuem ionicamente os aminocidos?

Ionizao dos Aminocidos

Um aminocido em soluo aquosa

pH~1
H+
COOH H- C NH3+ R

H+

H+
H+

H+

Ionizao dos Aminocidos

Um aminocido em soluo aquosa

pH~2
OH-

pH~9

COO H gua H OHH- C - NH3 2 R H OHOH-

Ionizao dos Aminocidos

De forma geral, ao fazer a titulao de um a.a. com uma base, iniciando-se em pH=1 observa-se que o pH da soluo aumenta at aproximadamente pH=2 quando o grupamento COOH comea a liberar ons H+ para o meio, formando gua.

COOH H- C - NH3+ + OHpK1 R

H2O

COOH- C - NH3+ R
on dipolar

Ionizao dos Aminocidos

Continuando a adio de base o pH ir progressivamente se elevando at que o grupo NH3+ tenha condies de liberar seu on H+, o que ocorre prximo ao pH 9 .

H 2O COOCOOH-C-NH3+ + OHH-C-NH2 R R pK2

on dipolar

Ionizao dos Aminocidos

cido -doa prtons para o meio

COOH COOH- C - NH3+ H-C-NH3+ pK1 CH3 CH3

Base- capta prtons do meio

COOH-C-NH2 pK2 CH 3

Regio de tamponamento devida ao grupo -COOH

Regio de tamponamento devida ao grupo -NH2

Ionizao dos Aminocidos

COOH COOCOO+H N- C -H +H N- C- H H2N- C- H 3 3 pK1 pK2 R R R A+ Forma AIsoeltrica

Curva de titulao da Glicina

Ionizao dos Aminocidos

E quando o aminocido apresenta mais de um grupo ionizvel no radical? Este aminocido possui mais um pK, o pKR.

Aminocidos cidos
Grupamentos presentes na cadeia lateral que se encontram ionizados no pH fisiolgico

COOH H- C - (CH2)2 - COOH

NH2 COOH H - C - CH2 - COOH

Glutamato -carboxila

Aspartato -carboxila

NH2

Aminocidos Bsicos Grupamentos presentes na cadeias laterais que se encontram ionizados no pH fisiolgico COOH H - C - (CH2)4 - NH2 NH2 COOH H - C-CH2 NH2 N

Lisina -amino

Histidina imidazol
NH

COOH H - C - (CH2)3 - NH - C - NH2 Arginina guanidnio

NH2

NH

Ionizao de aminocidos

Ionizao de aminocidos

Anftero
1. Gramtica: Que rene em si duas qualidades opostas. 2. Qumica: Que ora reage como cido, ora como base.

TAMPES
Tampo uma soluo que resiste a mudanas de pH quando se adicionam pequenas quantidades de cido ou base. Pode ser produzido pela mistura de um cido fraco (HA) e de sua base conjugada (A-).

Ponto Isoeltrico
o pH no qual a molcula aminocido apresenta igual no cargas positivas e negativas Encontra-se eletricamente neutro: on dipolar ou zwitterion do de

Clculo do ponto isoeltrico (pI)

O clculo do pI baseia-se nas formas de dissociao do aminocido utilizando os pKs anterior e posterior forma isoeltrica do aminocido.

Clculo do pI

COOH COOCOO+H N- C -H +H N- C- H H2N- C- H 3 3 pK1 pK2 R R R

A+ Forma Isoeltrica A-

pI = pKa1 + pKa2 2

pI = pKa1 + pKa2 2

Glicina

pK1=2,3
pK2=9,8

pI = 2,3 + 9,8 2

pI=6,05

Aminocidos com cadeia lateral ionizvel? pI = pKa1 + pKa2 2

Histidina

pK1=1,82
pK2=9,17 pKR=6,00

Aminocidos com cadeia lateral ionizvel?

Carga lquida = ZERO

Histidina

pK1=1,82
pK2=9,17 pKR=6,00

Aminocidos com cadeia lateral ionizvel? pI = pKa1 + pKa2 2 pI = 6,00 + 9,17 2

Histidina

pK1=1,82
pK2=9,17 pKR=6,00