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COORDINACION PRACTICA 2006-2007

Los antibiogramas o antibioticograma, son mtodos de laboratorio que estudian la sensibilidad de un microorganismo a la accin de los ANTIBIOTICOS. El trmino sensible es muy usado como sinnimo de susceptible. Susceptible significa que un microorganismo es inhibido o muerto en las pruebas in vitro por una concentracin del antibitico accesible en la sangre, cuando ese mismo antibitico se utiliza in vivo.
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Un "ANTIBIOGRAMA" consiste en poner en contacto al germen que hemos cultivado con distintos antibiticos para ver cual de ellos es el que mejor va como tratamiento.

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OBJETIVOS:

-Medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha que es la responsable de una infeccin.

-Seguir la evolucin de las resistencias bacterianas.

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CUANDO DEBEMOS SOLICITAR UN ANTIBIOGRAMA?


A) El microorganismo aislado, causante de la patologa, no es uniforme en su comportamiento frente a los antibiticos usuales; es decir, cuando la bacteria es de un tipo frecuentemente resistente a los antimicrobianos. Ejemplo: bacilos Gram (-), Mycobacterium tuberculosis. B) En infecciones microbianas graves que comprometen seriamente la salud del paciente; es decir, cuando es probable que el proceso infeccioso sea mortal, a menos que sea tratado en forma especfica, por ejemplo: endocarditis, absceso cerebral, septicemias, osteomielitis. C) Si se desconoce la susceptibilidad del microorganismo aislado a los antibiticos de uso frecuente.

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TIPOS DE ANTIBIOGRAMA?

Segn las necesidades respiratorias de los microorganismos se pueden realizar dos tipos de estudios, como son: el antibiograma para grmenes aerbicos y el antibiograma para grmenes anaerobios. El antibiograma para grmenes aerbicos son los nicos que se realizan en forma sistemtica en muchos laboratorios. El antibiograma es una prueba que se utiliza para medir la susceptibilidad de los microorganismos en presencia de sustancias antibiticas. Esta capacidad puede ser estimada ya sea, por el mtodo de dilucin o de difusin.

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REQUISITOS QUE DEBE REUNIR UN ANTIBIOGRAMA:

Debe ser de amplio espectro nutritivo, para que permita el crecimiento de la mayora de microorganismos. Debe tener un pH estable (7,2 - 7,4) y no sufrir oscilaciones por accin de los microorganismos sobre los componentes del medio; la acidez favorece la actividad de betalactmicos, tetraciclina, y novobiocina; y la alcalinidad la de los aminoglucsidos y macrlidos.

-No debe contener inhibidores de antimicrobianos como


son peptonas, sales de Ca++ y Mg++, o cualquier otro antagonista por competencia.

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Las pruebas de susceptibilidad pueden clasificarse en:

PRUEBAS CUANTITATIVAS (DILUCION)

PRUEBAS CUALITATIVAS (DIFUSION)

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La Dilucin en agar es considerado el mtodo de referencia. en este mtodo, las placas contienen, una determinada concentracin de un antibitico y son inoculadas con el microorganismo en estudio y luego incubadas por 16 a 18 horas. Despus de la incubacin, se examina si el organismo crece o no en cada una de las placas, con lo cual se determina la concentracin inhibitoria mnima (CIM) para el antibitico. MIC (Concentracin Mnima Inhibitoria).- Es la concentracin ms baja que inhibe el desarrollo de las bacterias despus de la incubacin nocturna. El valor MIC es entonces comparado con las concentraciones conocidas de la droga obtenidas del suero del paciente o de los fluidos orgnicos del mismo, para en esta forma sentar la respuesta clnica probable.
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En los mtodos de dilucin en caldo, base de casi todos los mtodos utilizados en la actualidad, se colocan concentraciones decrecientes del agente antimicrobiano, generalmente diluciones 1:2, en tubos con un caldo de cultivo que sostendr el desarrollo del microorganismo. El caldo ms comnmente usado para estas pruebas es el de Mueller-Hinton suplementado con los cationes magnesio y calcio.
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Sobre el agar uniformemente sembrado con el organismo de ensayo, se colocan discos de papel filtro impregnado de antibitico.
Por difusin se forma un gradiente de concentracin del antibitico desde el disco hacia la periferia y el desarrollo de microorganismos es inhibido a cierta distancia del disco cuyo dimetro est relacionado, entre otros factores, a la mayor susceptibilidad del microorganismo

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Es el mtodo de difusin en discos, y se lo ha catalogado como un mtodo de referencia en la susceptibilidad antimicrobiana y podr ser utilizado como una tcnica rutinaria en el laboratorio. Este mtodo es apropiado particularmente en pruebas con bacterias de la familia Enterobacteriaceae, pero puede ser tambin recomendado como un mtodo general para todos los patgenos de crecimiento fcil y rpido, exceptuando los anaerobios estrictos.

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Interpretacin: En ste mtodo la interpretacin de los resultados est basado sobre la relacin entre la concentracin inhibitoria mnima (MCI) y el dimetro de la zona de inhibicin

El sistema ms simple comprende solamente dos categoras susceptibles y resistentes, sta clasificacin aunque ofrece muchas ventajas para los propsitos estadsticos epidemiolgicos es demasiado inflexible para la utilizacin del clnico. En el mtodo de Kirby Bauer modificado se reconocen tres categoras de susceptibilidad que son sensible, resistente e intermedio

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Cuando se prepara l inoculo a partir de un cultivo primario, se tocan con el asa de inoculacin 4 o 5 colonias bien aisladas y de apariencia morfolgica idntica. Este crecimiento se transfiere a un tubo con caldo nutritivo o caldo de Muller Hinton. Se incuba de 2 a 5 horas en general a una temperatura de 35C, luego se hace una comparacin del caldo cultivado con el nefelmetro, se ajusta la turbidez del caldo diluyndolo con caldo estril o solucin salina estril, este ajuste es necesario para asegurar el desarrollo resultante sea confluente.

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-Las

cajas son inoculadas mojando la torunda estril en l inoculo (sta torunda debe ser de madera), desechar el exceso de caldo por presin y rotacin de la torunda contra las paredes del tubo. - Extender entonces l inoculo sobre el agar, debe pasar la torunda 2 a 3 veces sobre la superficie del medio, girando cada vez la caja 60 grados, para asegurar una siembra uniforme.
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-Dejar secar la caja sin sobrepasar los 15 minutos antes de aplicar los discos. -La caja debe ser colocada en el incubador a 35C, dentro de los 30 minutos posteriores a su preparacin.
-Despus de la incubacin se mide el dimetro de cada zona de inhibicin, anotndolo en mm.

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Existen diversos factores tcnicos que influirn en el tamao de la zona de inhibicin, entre los cuales tenemos: Densidad del inculo. Potencia de los discos de antibiticos Temperatura de incubacin
Tamao de las cajas, fondo del agar y espacio entre discos

Tiempo de espera para la aplicacin de disco

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Zona De Inhibicin.- Se considera as al crculo alrededor del disco en el que hay ausencia total de crecimiento bacteriano. Lectura.- Hay algunas formas de interpretar las zonas de inhibicin, las ms comunes son: Usando una regla; en ste caso la zona de inhibicin son medidas en mm, y los dimetros son interpretados de acuerdo al antibitico y su concentracin en mg. La tendencia actual; es la de que los tcnicos hagan interpretaciones binarias es decir, sensible o resistente, quedando incluida la respuesta intermedia en la resistente.
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Sensible.- Un microorganismo es llamado sensible a un antimicrobiano cuando la infeccin causada por l es probable que responda favorablemente al tratamiento con ste agente a las dosis usuales recomendadas. Intermedia.- Cuando la infeccin es probable que responda favorablemente el tratamiento a dosis inusualmente altas del antimicrobiano. Resistente.- Es trmino que implica la expectativa de que el microorganismo no responda a una droga dada, independientemente de la dosis y localizacin de la infeccin. La ltima decisin para usar un antibitico en particular y la dosis a ser administrada dependern no solamente del resultado de la prueba de susceptibilidad, sino tambin de su interpretacin.

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Intermedia:

Intermedia:

RESISTENTE

Resistente:

Sensible:

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MTODO DE E-TEST

Es uno de los mtodos ms recientes que se han presentado en el mercado y resulta de una curiosa combinacin de caractersticas de los mtodos anteriores.
Se trata de una tcnica cuantitativa en placa que permite obtener una lectura directa de CMI en g/ml, ya que se emplean tiras plsticas impregnadas en concentraciones crecientes de antibitico indicadas en una escala graduada sobre la propia tira.

El microorganismo a investigar se inocula en una placa y sobre ella se deposita la tira del antibitico (o antibiticos) a ensayar

Tras la incubacin de 16-24 horas a 35C se observan las placas y se valora la zona de inhibicin, de forma elptica, alrededor de cada tira.

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MTODOS AUTOMATIZADOS

Estos novedosos mtodos utilizan sistemas de micro dilucin en medio lquido sobre microplacas con pocillos en "U. Interpretan el crecimiento bacteriano en los diferentes pocillos por medio de un autoanalizador.

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