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Bioquimca clnica Mac.

Sanjuanita Ortiz

Polmeros complejos de aminocidos


Formadas por 20 aa Contienen CHON SP L-alfa-aminoacidos

L- alfa aminoacidos El ncleo del aa es el carbono alfa (C) El cul esta unido a un cido carboxilico (COOH) Grupo amino unido al carbono (NH2) Tienen un H+ y otro grupo unido a el

Es asimtrico y puede tener dos ismeros

Los 20 aa tienen la estructura que se indica como ismero L (forma que se encuentra en la naturaleza)

Tiene estructura anfotrica


(tiene 2 sitios de ionizables)

A pH fisiolgico 7.4 ambos sitios estn ionizados

El grupo R puede tener 2 sitios ionizables A pH 7.4 el COOH pierde un hidrogeno (H+) Se transforma en COO y el NH2 gana el H+ Para transformarse en NH3 Cuando ambos sitios estn ionizados El aa se denomina anfolito o zeitterion (ion doble)

Los aa en cidos fuertes tienen carga (+) En soluciones alcalinas carga (-) Cada aa tiene un pH en el cul no experimenta Carga neta este se denomina punto isoelctrico (pI) unidos entre si por enlaces peptdicos

Estructura Forma Solubilidad Composicin Movilidad electrofortica Funcin Tamao, densidad, masa

Estructura Primaria :
Depende de una protena y de los aa que contenga en su secuencia y el numero de aa

Secundaria: Depende de una cadena de aa que interacta con aa adyacentes mediante puentes de Hidrgeno y enlaces disulfuro

Terciaria Estructura tridimensional se forma cuando los aa reaccionan con otros miembros mas distantes de la cadena. Cuaternaria Cuando se unen 2 o ms cadenas llamadas monmeros, dmeros, o subunidades de protenas.

Forma Se mide comparando la longitud y el ancho de la protena.

Su relacin es menor de 10 Son molculas muy alargadas Desempean un papel estructural en funciones de conexin, de proteccin, o soporte Otras como las protenas ciliares y musculares presentan funciones motrices. Se encuentran: en Queratina, Pelo, Colgeno.

Fibrosas

Globulares

Relacin mayor a 10 Constituidas por cadenas polipeptdicas plegadas estrechamente de modo que adoptan formas esfricas o globulares compactas

SOLUBILIDAD Solubles: Protenas solubles globulares(albmina). Solubles en agua y soluciones salinas dbiles

Insolubles: (Globulina) Solubles en soluciones salinas fuertes y en agua

COMPOSICIN

Protenas Simples: Formadas por aminocidos Protenas Conjugadas Formadas por cadenas de aminocidos y molculas que no son aminocidos

Movilidad Electrofortica

La mayora de las cargas elctricas de los aa se debe a los grupos R ya que los extremos amino y cido carboxlico participan en enlaces peptdicos que constituyen la protena.

FUNCIN:

Catalizadores (enzimas) Protenas regulatorias (hormonas, represores Inhibidores) Protenas de transporte (hemoglobina) Protenas estructurales (contrctiles, fibrosas, gelatinosas) Protenas de proteccin (Inmunoglobulinas y complemento) Protenas oncfetales y placentarias Protenas con funciones desconocidas

Tamao densidad y masa Estas se miden por tcnicas como centrifugacin, filtracin, electroforesis.
Fraccin Albmina Alfa1 Alfa2 Porcentaje relativo 52-68 2.4-4.4 6.1-10.1 Concentracin (g/100 ml) 3.4-5.0 0.2-0.4 0.5-0.9

Beta
Gamma

8.5-14.5
10-21

0.6-1.1
0.8-1.5

Turbidimetra y Nefelometra Inmunodifusin Electroforesis Electroforesis Capilar Inmunoelectroforesis Enfoque isoelectrico Electroforesis Bidimensional Cromatografa

Turbidimetra y Nefelometra Tcnicas relacionadas En ambas se hace pasar un haza de luz a travs de una suspensin de partculas insolubles y mide la cantidad de luz que se dispersa. En nefelometra se mide directamente la luz dispersada mediante fotodetectores colocados en un ngulo de 70 a 90 grados.

Inmunodifusin Se utilizan 3 tnicas: Inmunodifusin radial Tcnica de Ouchterlony Electroinmunodifusin.

Inmunodifusin radial

Se aade un antisuero especifico a agarosa que a su vez se vierte sobre placas. Se forman pozos en el gel y se colocan en ellos estndares, protenas y problemas (Ag) El antgeno se difunde sobre el gel varias horas (24-48 hr) Se producen anillos en los que se forman bandas de precipitado a medida que el anticuerpo y el antgeno alcanzan la equivalencia

Tcnica de Ouchterlony o inmunodifusin doble Se forman pozos en el gel agarosa generalmente en patrn de roseta Se depositan antisueros, standares y problemas en los posos circundantes Se permite que estas muestras se difundan en el gel y formen bandas de precipitado entre uno y otro pozo.

Electroinmunodifusin: Se denomina electroforesis de cohete Similar a la inmunodifusin radial Solo difiere en que la placa se expone a un campo elctrico que hace que las protenas migren en una direccin en forma de cohete

La altura de los picos en forma de cohete son proporcionales ala cantidad de protena presente.

Electroforesis Es la migracin de molculas con carga a travs de un medio de soporte poroso en respuesta a un campo elctrico.

Se lleva acabo con el fin de lograr la separacin de fracciones principales de molculas proteicas
La tasa de migracin durante la electroforesis depende de la carga neta de la molcula, del tamao y forma y de la fuerza del campo elctrico de la prosperidad, viscosidad y temperatura del medio de soporte

Tipos de electroforesis

Mtodos de electroforesis en papel En gel En almidn Acetato de celulosa * electroforesis de protenas Gel agarosa * Gel poliacrilamida *

Electroforesis capilar

Es un mtodo mas reciente de separacin que se basa en el desplazamiento de una molcula en un campo elctrico Rpida, sensible, se adapta a la automatizacin. La separacin se efecta en un capilar de silicio fundido

Inmunoelectroforesis

Esta tcnica utiliza un anticuerpo para fijar el antgeno en el gel e identificarlo Se aplica protena al gel, se efecta la electroforesis y despus se colocan capas de antisueros especficos o antisueros a travs de un canal paralelo al electroforetograma y permite que se difunda hacia el gel.

Enfoque Isoelctrico

Est tcnica se utiliza cuando se requiere alta resolucin, como para separar isoformas de isoenzimas

Electroforesis bidimensional Se utiliza con mayor frecuencia con fines de investigacin que en el medio clnico.

Para est tcnica es necesario tomar un electroforetograma en el cual se hayan separado las protenas colocarlo a lo largo a travs del rea e aplicacin de la muestra del otro gel y separar de nuevo las protenas con un medio o tcnica diferente.

Cromatografa Tambin se utiliza para la separacin de protenas. Con frecuencia se emplea para purificar protenas con fines diversos al anlisis clnico. La cromatografa por filtracin en gel se basa en el tamao de la protena

El gel se elige de acuerdo con el tamao de sus poros y al aplicar protenas a la columna Las molculas de menor tamao tienen mayor libertad para interactuar con el gel y fluyen lentamente a travs de la columna Las molculas de gran tamao no pueden penetrar alos poros y por lo tanto atraviesan la columna con rapidez

Protenas que se analizan en el laboratorio:

Plasmticas

Lquidos corporales Orina Liq. Cefalorraqudeo

Protenas Totales

Albumina Prealbumina Protena enlazante de retinol Alfa-1-Antitripsina Glucoprotena Acida alfa-1 Macroglobulina Alfa-2 Haptoglobina Hemopexina

Ceruloplasmina Transferrina Protena C reactiva Fibrinogeno Inmunoglobulinas Microglobulina Beta-2

PROTEINAS TOTALES

Se miden en suero como casi todos los anlisis de qumica sangunea

Rango de referencia: 6.4 a 8.2 g/100 ml


Funcin: mantener la presin osmtica coloidal del plasma esta presin osmtica evita las prdidas de lquidos hacia los tejidos.

El contenido de las protenas totales en suero depende del estado nutricional, del funcionamiento heptico, el funcionamiento renal, de errores metablicos y afecciones como mieloma mltiple. Aunque es fcil cuantificar las protenas totalesen suero por el mtodo de Biuret, las variaciones de fracciones especficas de protenas son mas tiles para el diagnstico de enfermedades.

Hiperproteinemia:

Cuando hay deshidratacin est hace que todas las fracciones de protenas aumenten en el mismo porcentaje. La deshidratacin puede ser resultado de reduccin del consumo o aumento de la prdida de lquidos o en enfermedades como el mal de Addison, aacidosis diabtica o diarrea grave.

El mieloma mltiple es la principal enfermedad en la cul la elevacin de una fraccin de protenas provoca un aumento de las protenas sricas totales.

Hipoproteinemia: Se debe aun aumento de las prdidas proteicas o a un bajo consumo de protenas por inanicin o malabsorcin.

El aumento de la prdida es ocasinado por enfermedades como sndrome nefrtico en el cul se pierde albmina a travs de los tbulos daados, hemorragias por traumatismos o prdida en pacientes con quemaduras extensas.

Las protenas se determinan en : Suero, plasma, lquidos corporales. Mtodo de Kjeldahl. Mtodo de Biuret Mtodos colorimtricos Enlace con algn tinte Uso del refractmetro Mtodos automatizados.

Otros mtodos para orina y lquido cefalorraqudeo


Se precipitan las protenas con: Cloruro de benzetonio cido sulfosaliclico Acido tricloroactico Reaccin de Biuret modificada. Para cuantificar la precipitacin en cido se utiliza nefelometra o turbidimetra.

Albmina.

p. molecular: 66,000
Constituye ms de la mitad de todas las protenas sricas y gran parte de la presin osmtica depende de ella. Molcula de transporte para sustancias menos solubles como cidos grasos, bilirrubina, hormonas, calcio, metales, frmacos y vitaminas.

Concentracin srica es de 3.4-5.0 g/100ml Se cuantifica: Mtodos de enlace con tinte Nefelometra Turbidimetra Inmunodifusinradial Electroinmunodifusin

Niveles bajos de albmina. Afecciones hepticas Glomerulonefritis o nefrosis Afecciones gastrintestinales Inanicin Analbuminemia hereditaria Aumento de albmina Deshidratacin

Prealbmina

Prealbmina enlazante de tiroxina PM. 54,000 Funcin: transportar tiroxina y triyodotironina. Indicador sensible del estado nutricional Nieveles disminuyen en afecciones hepticas Niveles aumentan en enfermedades renales. Inmunodisusin radial, electroinmunodifusin, Nefelometra.

Protena enlazante de retinol


Protena de transporte Se combina con prealbmina para transportar vitamina A. Se cuantifica mediante nefelometra o inmunodifusin radial

Alfa-1-Antitripsina (AAT)

Funcin: inactivar proteasas como elastasa y colagenasa En forma de antielastasa evita la descomposicin de tejido conjuntivo cuando los neutrfilos liberan elastasa en una zona inflamada. Anlisis mediante electroforesis de protenas

Glucoprotena Acida alfa-1 (AAG) PM 44,000 Se produce en hgado Funcin : a) inactivar la progesterona b) Se enlaza con frmacos bsicos y afecta la farmacocintica.

Aumenta: Neoplasias malignas Despus de traumatismos Quemaduras Disminuye: Mala nutricin Daos hepticos Sndrome nefrtico Uso de anticonceptivos orales

Anlisis : Nefelometra, inmunodifusin radial

Haptoglobina

Glucoprotena

Funcin: Transportar hemoglobina plasmtica libre al sistema reticuloendotelial.


Aumenta: Infecciones, neoplasias, traumatismos, infarto al miocardio, procesos inflamatorios

Disminuye: Pacientes con anemia hemoltica, Defectos congnitos dela hemoglobina, como anemia megaloblstica, anemia de clulas falciformes deficiencia de G6PD, esferocitosis hereditaria, talasemia. Reacciones de transfusin hemoltica Lupus eritematoso sistmico Pacientes con tratamiento con metildopa

Anlisis: inmunodifusin radial, nefelometra

Hemopexina Globulina beta-1

Funcin: protena de trasnporte que enlaza heme libre despus de que la hemoglobina se ha catalizado a sus pares componentes. El complejo heme-hemopexina viaja al hgado en donde la porcin heme se transforma en bilirrubina. Anlisis: se cuantifica con poca frecuencia .

Ceruloplasmina

Globulina alfa-2

Seis molculas de cobre estn enlazadas a cada molcula de ceruloplasmina lo que produce un complejo color azul.
La ceruloplasmina se enlaza con 90% del cobre plasmtico y lo transporta.

Parece funcionar como enzima oxidativa Aumenta: Enf. Hodking, procesos inflamatorios, cirrosis, leucemias agudas, artritis reumatoide, embarazo, uso de anticonceptivos. Disminuye: Enf. Wilson ( cuerpo es incapaz de excreta cobre en la bilis y se acumula en hgado, riones, cerebro, eritrocitos). Desnutricin y hepatitis crnica. Anlisis: Inmunodifusin radial o nefelometra.

Transferrina

Beta-glucoprotena

Funcin: Protena de transporte de hierro.


Disminuye: quemaduras, infecciones, neoplasias, afecciones hepticas afecciones renales, transferrinemia hereditaria.

Aumenta:

En el embarazo debido a la mayor demanda de las reservas de hierro. Uso de estrgenos.

Protena C reactiva Reacciona con el polisacrido C de la pared celular de los neumococos (por eso se denomina PCR Se sintetiza en hgado Funcin: participa en el sistema inmunitario participa en la activacin del complemento

Aumenta: Se eleva durante la respuesta inmune a las infecciones, daos a tejidos, necrosis celular asociada con infartos, enfermedades malignas. Anlisis: Aglutinacin con latex Ensayo inmuoenzimatico Nefelometra.

Fibringeno Glucoprotena soluble

Se sintetiza en hgado Funcin: sirve como sustrato para la trombina que es una enzima para la coagulacin.

Disminuye: En Coagulacin intravascular diseminada.

Anlisis: Se mide con mayor frecuencia por anlisis de coagulacin empleando un fibrinmetro.

Inmunoglobulinas Son el principal grupo de protenas sricas que el hgado no produce.

Las producen las clulas plasmticas derivadas de los linfocitos B.

Anlisis: nefelometra, inmunodifusin radial.

IgG Mayor concentracin en adultos

Se difunde al espacio extravascular porque es de tamao pequeo. Capaz de atravesar la placenta.

Funcin: neutralizar las toxinas, enlazarse con antgenos, activar complementos

PM: 15,000
Concentracin mg/100 ml 800-1,800 mg/100 ml

Edad: Adultos

Nios (3 meses)

350-400 mg/100 ml

Nios (1 ao)

700-800 mg/100ml

Aumenta: Afecciones hepticas Afecciones autoinmunitarias de la colgena (lupus eritematoso sistmico, artritis reumatoide). Tuberculosis Endocarditis Lepra Mononucleosis Inf. Bacterianas Leucemias y linfomas.

IgA PM: 160,000

Ac. Secretorio presente en saliva, lagrimas, sudor, calostro, secreciones nasales.

Funcin: Proteccin superficial contra moo.

Concentraciones Adultos: 90-450 mg/100ml Lactantes: 25 % del nivel de los adultos Nios : 50 % Jvenes (16 aos): 100% Aumenta: Cirrosis, hepatitis crnica, artritis reumatoide, fibrosis qustica, actinomicosis, leucemia monoctica, TB.

IgM Pntamero con PM. 900,000 Se produce primero ante la respuesta inmunitaria. Primera que elabora el feto durante el desarrollo.

Aumenta: Cirrosis, escleroderma, endocarditis bacteriana, lepra, malaria, mononucleosis, bartonelosis, actinomicosis, leucemia monoctica.

Edad Varones adultos

Concentraciones mg/100ml 60-250 mg/100ml

Mujeres adultas Nios ( 4 aos) Nios (8 aos)

70-280 mg/100 ml Alcanzan el 50 % de concentracin del adulto Alcanzan concentracin del 100% De los adultos

IgD e IGE Constituyen menos del 1 % de las inmunogobulinas sricas.

IgD, estructura similar ala IgD no tiene funcin definida. IgE, se enlaza firmemente a los mastocitos y aumenta en reacciones alrgicas.

Protenas en lquidos corporales Normalmente no se observan protenas en orina. Cuando se detectan son albminas Su presencia indica afeccin renal Se cuantifica generalmente con el uso de cidos (tricloroacetico y sulfosalisilico), mediante espectrofotometra.

Lquido cefalorraqudeo

Niveles de 15 45 mg/100ml Aumenta: Daos en la barrera entre sangre y cerebro Traumatismo Aumento en la produccin de protenas por el SNC Infecciones, esclerosis mltiple.

Otras protenas: Miosina y Mioglobina

Sel iberan a la sangre poco despus de haber ocurrido un infarto y sirven como marcadores Para infarto al miocardio en etapas ms tempranas que la enzima creatincinasa.