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Avances en el Diagnostico del VIH

Integrantes

Costa Quispe, Melissa Chacolla Huaringa, Rafael Julin Dvila Cayhualla, Elisa Palomino Poma, Edda Libertad

Estructura del VIH

VIH Genes y su Funcin Tres grupos de genes estructurales



env: Glucoprotenas de transmembrana y superficie. pol: transcriptasa reversa,integrasa y proteasa. gag: antgeno de grupo, protenas de matriz y cpside.

VIH Genes y su Funcin

VIH Genes y su Funcin Genes reguladores :


tat: rev: vif: vpr: vpu (VIH-1) : Vpx (VIH-2) : nef : regulador de expresin vira regulador expresin mRNA incrementa la infectividad viral replicacin viral liberacin viral infectividad viral regulador inmunolgico

CICLO DE VIDA DEL VIH

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Mtodos

Pruebas de tamizaje
Objetivo

Detectar la presencia de anticuerpos anti - VIH

Objetivo de la prueba Seleccin de la tcnica depende Sensibilidad y Especificidad Prevalencia de la infeccin VIH en poblacin estudiada. estudiada

Pruebas de tamizaje del VIH

ELISA Pruebas Dot-blot Pruebas de Aglutinacin

Pruebas Inmunocromatograficas

Prueba de ELISA

Prueba para la deteccin


o la cuantificacin de un anticuerpo o un antgeno mediante un ligando (por ejemplo una antiinmunoglobulina) conjugada con una enzima que cambia el color de un sustrato.

ELISA Indirecto

Solid Phase Complex

Antigen

Enzyme ConjugateSandwich

ELISA COMPETITIVO

Solid Phase Antigen Enzyme-labeled Antigen Product

Reaction

Anti-HIV 1+2 (mejorados), ademas detecta el antigeno p24

EIA/ELFA 4 generacin

Anti-HIV 1+2 (mejorados)

EIA/ELFA 3 generacin

Anti-HIV 1+2

EIA 2 generacin
Anti- HIV

EIA 1 generacin

Pruebas DOT BLOT

Prueba rpida

Prueba de aglutinacin
PRUEBA RPIDA

Principio: Formacin de complejos inmunes en la superficie de partculas (soporte slido)

Inmunocromatografa
Muestra: Suero (Anticuerpos a IgG) Conjugado: Oro Coloidal conjugado a antgeno de VIH
Control Antgeno de VIH

PRUEBA RPIDA

Flujo lateral en el dispositivo: CORE


HIV

Lnea de control: Anticuerpos Anti-IgG/Oro coloidal prueba: Antgeno de Lnea de VIH

* La muestra fluye a lo largo de la membrana y los anticuerpos anti-VIH (si estn presentes) se unen al antgeno de VIH conjugado al oro coloidal formando una banda roja visible. * Los anticuerpos anti-IgG/Oro Coloidal en la lnea control se une a cualquier partcula de Oro coloidal no unido formando una banda roja visible.

Procedimiento Core-VIH
PASOS A SEGUIR: 1. Codificacin del test 2. Aadir 2 gotas de suero, plasma o sangre total en el pocillo marcado como A 3. Aadir 5 gotas de buffer en el pocillo B Positivo 4. Lectura e interpretacin a los a VIH-1 15 minutos INTERPRETACION CORE - VIH
C T A B REACTIVO NO REACTIVO

Contro reactiv o

Pruebas confirmatorias

Western Blot

Inmunofluorescenci a Inmunoensayo en Linea

Inmunofluorescencia

LIA
Identificacin y localizacin de los antgenos y controles recubiertos en la tira.

Controles internos

CN ( estreptovidina) CP ( Lnea intensa = 3+) CP (Lnea moderada = 1+ ) CP ( Lnea dbil = +/ - )

Antgenos

sgp 120 gp 41 p31 p24 p 17 sgp 105 gp 36

CONTROL POSITIVO

WESTERN BLOT

Tcnica utilizada para la deteccin de anticuerpos

Prueba especfica y determina que protenas del patgeno son reconocida por el sistema inmune.

Principio de Western Blot


Tiras de Nitrocelulosa con protenas virales separadas por Electroforesis Deteccin de Ac. Muy especifica, poco sensible

PRINCIPALES BANDAS DEL WESTERN BLOT Denominacin gp160 gp120 gp41 p55 p40 p24 p17 p66 p51 p31 Endonucleasa Protena principal Protena de la matriz Transcriptasa inversa pol Protena Precursora de la envoltura Glucoprotena externa Glucoprotena transmembrana Precursora del core gag Gen env

CRITERIOS MNIMOS DE POSITIVIDAD DEL WESTERN BLOT FDA Existencia por lo menos de tres bandas: p24, p31 y gp41 u otra glucoprotena Existencia de al menos 3 bandas una por cada uno de los 3 genes estructurales Al menos dos bandas: p24, gp41 y gp160/120 Al menos una banda del core (gag/pol) y otra de envoltura (env) Al menos dos bandas de envoltura

ARC

CDC CRSS

OMS

Mtodos Directos

Deteccin de Antgeno p24

La deteccin del antgeno del VIH-1, usualmente la

protena p24, es un marcador directo de la presencia del virus en el organismo. La cuantificacin del antgeno p24 en el suero es la prueba ms barata y sencilla para obtener una informacin de la cantidad de virus circulante. La antigenemia se ha utilizado para predecir la evolucin clnica de individuos asintomticos. Monitorizacin de la respuesta a antirretrovirales. Diagnstico precoz de la infeccin aguda por VIH-1. Diagnstico de la infeccin por va vertical. Reconocimiento de la replicacin viral en cultivos celulares.

Deteccin de Antgeno p24

Cultivo viral
IL-2
LT CD4

IL-2

Ag 24
Cel.Mononucleares

Cultivo Viral
Las aplicaciones en la prctica clnica del cultivo
viral, que realmente es la tcnica ms especfica de diagnstico, son: Infeccin peditrica. Infeccin silente. Estudios de variabilidad gentica y epidemiologa molecular. Sensibilidad a antirretrovirales. Adems el cultivo viral es la herramienta imprescindible para la caracterizacin biolgica de las diferentes cepas del VIH-1.

Prueba del ADN Proviral Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Provirus

Reaccin en cadena dela polimeraza (PCR)

Prueba del ADN Proviral Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

La PCR es un mtodo altamente sensible que nos permite amplificar por lo menos 1 copia de ADN proviral. El cultivo viral y la PCR son las tcnicas ms utilizadas, permitiendo detectar entre el 30-50% de los neonatos al nacer, y entre el 80-100% dentro del primer mes de vida.

Es muy utilizada para:

Diagnosticar primo infeccin por el HIV-1 (perodo ventana) Resolucin de la infeccin en casos indeterminados Vigilar terapia antiretroviral Diagnosticar infeccin por HIV en nios Diferenciar infeccin por HIV-1 y HIV-2 diferenciacin de subtipos.

La saliva como medio de Dx de VIH


La saliva es un ultrafiltrado del plasma donde se puede
encontrar IgG (llega a la cavidad bucal como transudado de suero de la mucosa bucal transudado de suero) e IgA (glndulas salivales). En la saliva se puede encontrar Ac para el VIH, es en ello que se basan las pruebas de Dx. usando saliva.

Ventajas: Es un mtodo no invasivo, no necesita refrigeracin. Ayuda geritricos y RN con exmenes Cte.. aplicados en zonas geogrficas inaccesibles (estudio).

Prueba rpida de deteccin de anticuerpos anti VIH1/2.

Prueba rpida de deteccin de anticuerpos anti VIH1/2.


No
ha sido ha sido aprobada para la deteccin en donantes de sangre u rganos. Es un inmunoensayo cualitativo para detectar anticuerpos contra el VIH-1 y VIH-2 en muestras de fluido oral, sangre por puncin en pulpejo de dedo u obtenida por venopuncin y plasma.

OraQuickAdvance HIV-1/2

No pasar por el paladar, la lengua o mejillas

La S.R. permite el flujo de la muestra al dispositivo y al tira de prueba con para rehidratar el reactivo calorimtrico Ac contra Ag inmovilizados de la membrana de nitrocelulosa lnea de color rojo-prpura (cualitativo)

15C 37C.

Resultados:

Una lnea de color rojo junto a C Una lnea de color rojo junto a T Independiente de la tonalidad de la lnea

Uni-Gold Recombigen

Para muestras de pulpejo de dedo suero o plasma. La prueba sale en 10 minutos. Para VIH-1

Se coloca una gota de la muestra y luego 4 gotas de la solucin reveladora.

Reveal G2
Prueba de moderada
complejidad con suero y plasma, requiere refrigeracin para DX de HIV-1; T 5

Obtener suero o plasma mediante centrifugacin.

MultispotHIV-1/HIV2

Algoritmo - VIH
Muestra: Suero / Plasma

ELISA
Reactivo Indeterminado No reactivo

2 ELISA
Reactivo Indeterminado No reactivo

Pbas. Confirmatorias
Positivo Negativo

IFI / WB

Indeterminado Control en 3 meses / PCR

Actualidad del VIH

Cul es el problema?

En un sujeto infectado se producen en promedio aproximadamente diez billones de viriones por da y, en promedio, aparece una mutacin por cada 9200 bases copiadas del ADN viral.

Diversida d gentica

Cules son las consecuencias?

Comportamiento viral

Virulencia

Respuesta a la terapia antirretrovira l Citotoxicidad

Las mutacione s

Capacidad de replicacin

Competencia

Lo peor es?

Diversidad Gentica

Resistencia a la terapia empleada para su tratamient o

La ineficaci a de las vacunas

El Problema

La consecuencia ms importante de la variacin


gentica que acompaa a la dinmica de la replicacin del VIH es la adquisicin de resistencia a la terapia empleada para su tratamiento, pues esto hace posible que surja una mutante resistente a un medicamento diariamente.

Desde el punto de vista gentico los virus estn


provistos de una gran capacidad de adaptacin a los cambios introducidos en su medio natural. El VIH fundamenta esta cualidad en diversos mecanismos, entre los que cabe destacar tres: 1
La retrotranscriptas a que transcribe el ARN a ADN, no cuenta con un sistema para reparar los errores

2
Tanto las protenas estructurales como aquellas con actividad funcional poseen una notable plasticidad funcional

3
El virus presenta una alta tasa de replicacin, que permite generar del orden de 1010 nuevos viriones cada da

Otro problema es?

El

desarrollo de una vacuna se ha visto enormemente dificultado. Si estudiamos la historia natural de la infeccin por el VIH comprobamos que tras su penetracin en el individuo, el sistema inmune responde de forma aparentemente adecuada, elaborando una respuesta inmune humoral y celular, que no es capaz sin embargo de parar la evolucin de la infeccin.

1. 2. 3. 4. 5. 6.

La siguiente lista resume los principales enfoques de la vacuna: Vacunas Vacunas Vacunas Vacunas Vacunas Vacunas recombinantes de subunidades recombinantes de vectores de ADN de combinacin vivas atenuadas enteras inactivas

Consideraciones finales

La pandemia del SIDA/VIH se perfila como


uno de los problemas ms agudos de la salud pblica mundial de este milenio. La dinmica mutacional del VIH-1 asociada con factores ambientales naturales o impuestos, hace casi imposible en las condiciones actuales, la cura de esta enfermedad.

Encontrada mutacin del VIH en Nueva York


17 de febrero de 2005 Nueva York, Estados Unidos Una mutacin resistente y de accin rpida del VIH, virus causante del sida, se detect en Nueva York. Esta cepa, llamada 3-DCR HIV, progresa ms rpido que otras formas del virus. En el caso del hombre infectado, cuya identidad se mantiene en reserva, el virus fue diagnosticado a mediados de octubre y se haba desarrollado completamente a mediados de enero, tres meses despus, cuando normalmente la infeccin con VIH puede tardar hasta 10 aos para convertirse en sida. El enfermo habra confesado haber tenido relaciones sexuales sin proteccin con varios compaeros.

Encontrada mutacin del VIH en Nueva York

El Dr. Ronald O. Valdiserri, director del programa

de prevencin del sida en el Centro para Control y Prevencin de Enfermedades (CDC), dijo al New York Times que esta nueva forma del virus es nica por el rpido avance de la enfermedad y su resistencia a los tratamientos farmacuticos actuales. A pesar de ser un caso aislado, el CDC ya envi una alerta nacional a los departamentos de salud de todos los estados de la Unin Americana.

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Lo que puedes hacer, o has soado que podras hacer, debes comenzarlo. La osada lleva en s, Thanks genio, poder y magia.