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Carlos Calvo, Ph.D.

Director del Laboratorio de Lipidos y Aterosclerosis


Universidad de Concepcin

Coronary mortality: alarming worldwide forecasts

Ranked risk factors for coronary heart disease


Dyslipidemia
Cigarrete smoking Hypertension Diabetes mellitus

Dislipidemias
Hipercolesterolemia
Hipertrigliceridemia Hiperlipidemia mixta Colesterol-HDL bajo

Cholesterol transport Pathway

LDL-C

Secrecin de VLDL

VLDL
IDL

Lipoprotein lipasa Sntesis apoC-III

HIPERTRIGLICERIDEMIA

Genotipo E2 Falla Polignica


HIPERLIPIDEMIA MIXTA

LDL
HDL

Receptor-LDL

HIPERCOLESTEROLEMIA

Sntesis apoA-I Expresin ABCA-1


COLESTEROL-HDL BAJO

Lipoprotein lipasa

Atherosclerosis

Activated macrophages accumulate lipids

LDL oxidation

Evidencias de la oxidacin de LDL

Anticuerpos anti LDL-ox en pacientes con aterosclerosis carotdea severa

Hallazgo de LDL-ox y lipoperxidos en reas de la placa ateromatosa

LDL oxidada
Regresin de placa con terapia antioxidante en animales

Incremento en la susceptibilidad de LDL a la oxidacin en pacientes CAD, normo y dislipidmicos

De qu depende la oxidacin de LDL ?


FACTORES QUE DEPENDEN DE LA LIPOPROTEINA

- Contenido en c. grasos poliinsat.


- Anti-ox liposolub.(Vit E, b-carot...) - Grado de glicosilacin - Modificaciones en su estructura

LDLox

FACTORES QUE DEPENDEN DEL MEDIO

- Radicales libres
- Metales: Cu2+, Fe2+, Se2+, - Anti-ox plasmt, Vit C, SOD - HCY , ac.rico - Produccin de NO - Actividad a-oxidante de HDL

Ac.grasos poliinsaturados -H
Reordenamiento molecular
-

Iniciacin

Dienos Conjugados
Propagacin
H

Especies Reactivas de Oxigeno

Lipoperxidos

Hidroperxidos
Descomposicin

Fragment. a aldehidos Productos derivatizados

Free radical oxidants


Central element
Oxigen

Radical
Superoxide Hydroperoxyl Hydroxyl Peroxyl Alcoxyl

Nitrogen

Nitric oxide

Nitrogen dioxide Carbon


Sulfur
Methyl
Thyl Perthyl

Non free radical oxidants


Peroxides Single oxygen Ozone

Hypochlorite
Peroxynitrite

Alkylperoxynitrites

Modificaciones de la LDL que la hacen susceptible a la oxidacin

LDL pequea y densa

LDL rica en Triglicridos


LDL glicada

Correlacin entre LDL pequea y densa y oxidabilidad de LDL


y = 0,6803x + 39,367 r= 0,375;p<0,01 120 100

TBARS-LDL

80 60 40 20 0 0 10 20 30 % LDL pyd 40 50

Atherogenicity of small dense LDL

LDL oxidada promueve la disfuncin endotelial


Inhibe la expresin de la NO sintasa endotelial

Disminuye la biodisponibilidad de NO

CATs

(-)

oxLDL

(-) L-arginina Oxido ntrico sintasa

NO + L-citrulina

Curva Tiempo-Dependencia de actividad de eNOS por determinacin de L-citrulina [H]3 en presencia de oxLDL

0.4

dpm (g protena)

0.3

* *

Control oxLDL

-1

0.2

0.1

0.0

12

16

24

Tiempo (Horas)

y+/CATs

oxLDL

LOX-1

L-arginina

eNOS
NO mRNA eNOS

Ncleo

Plaque disruption (plaque cracking, fissuring, rupture thrombosis start point)

Oxidized LDL and thrombogenesis

HDL, an anti-atherogenic lipoprotein


Apo A-I

HDL, apo A-I and apo A-II rich lipoprotein Apo A-I

1 mg/dl (0,026 mmol/l) HDL cholesterol

Apo A-II

Cardiovascular risk

-2%

-3%

Reverse cholesterol transport


Free cholesterol Esterified cholesterol

ABCA-1 PLTP HDL LCAT Pre b-HDL

SRB-1

Peripheral cell

LPL Chylomicron

Hepatocyte
Chinetti G, Lestavel S, Bocher V, Remaley AT, Neve B, Torra IP, Teissier E, Minnich A, Jaye M, Duverger N, Brewer HB, Fruchart JC, Clavey V, Staels B Nat Med 2001 Jan;7(1):53-8

HDL biosynthesis

Secretion, lipid acquisition and maturation of HDL particles

Cholesterol efflux from macrophages

HDL cholesterol uptake by the liver

HDL metabolism and macrophage reverse cholesterol transport

Control del proceso de oxidacin de LDL


Presencia de antioxidantes en la LDL Rol antiaterognico de la HDL: PON Lp-PLA2

Antioxidant and antiinflamatory properties of HDL


Apo A-I

LCAT

Apo A-II

PLTP

HDL
SAA

CETP

PON 1

Lp-PLA2

PARAOXONASA
Evidencias

Estudios in vitro: de la oxidacin

PON protege a HDL y LDL

Ensayos con animales transgnicos knockout para PON: Incremento de placas ateromatosas Estudios clnicos: Actividad disminuida en pacientes con enfermedad coronaria

HDL inhibe la oxidacin de LDL


(nmol MDA/mg protena)
150

LDL LDL + HDL

TBARS

100

*
50

% de inhibicin

A medida que aumenta la oxidacin de HDL, se reduce su efecto protector sobre LDL
inhibicin %% Inhibicin oxLDL

50 40 30 20 10 0 0 0,05 0,1 0,15


R=0,49 p=0,043

tpo lag HDL (min) HDL oxidada

1/t-lag

Oxidacin de HDL en pacientes diabticos y controles


TBARS
nmol MDA/mg prot
10

Tiempo lag

Diabticos Controles

80 60

*
min
5

40 20 0

*
0

Mx prod DC

Velocidad

nmol/mg prot

300

nmol DC/min.mg

200

4 2

100

* vs HDL de sujetos controles, p<0.05;

Correlacin entre la actividad enzimtica de Paraoxonasa y la accin antioxidante de HDL

y = 3E-09x + 3E-07 R=0.898 p<0.01

0.8 0.7

mol/ml.min) PON 1M (

0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 50 100

INHIB TBARS LDL (%)

Rol de la Lp-PLA2 en la formacin de la placa

Monocitos Cytoquinas Molculas de Adhesion LDL oxidada


Lp-PLA2

Formacin de placa

Clula espumosa Macrfago

Liso-PC AG Ox

HDL promotes NO production

Randomized Vitamin E Trials


Study Number Population Follow up (years) Vitamin E (daily) Outcome Effect

Primary Prevention studies ATBS PPP ASAP VEAP 27271 4495 260 353 Smoking, make High risk CVD TC>200 mg LDL>130 mg 6.1 3.6 2.0 3.0 50 mg 300 mg 91 mg 268 mg MI/death CVD CVD death IMT progression IMT progession No effect No effect No effect Worse

Secondary Prevention studies

HPS CHAOS

20536 2002

CAD CAD

5.0 1.4

600 mg 800/400 mg

Coronary events CVD death

No effect No effect

ATBC GISSI
HOPE SPACE

1862 11324
9541 196

Smokers, male Recent MI


CVD
CVD+hemodialysis

5.3 3.5
4.5 1.4

50 mg 300 mg
400 IU 800 IU

Coronary events MI/CAD death


CVD death CVD, IM

No effect No effect
No effect Better

SECURE

732

CVD

4.5

400 IU

IMT progression

No effect

Por qu los grandes estudios randomizados con antioxidantes no se han traducido en resultados clnicos positivos

Los antioxidantes probados son ms efectivos sobre los oxidantes radicales libres que sobre los oxidantes no-radicales libres y el rol jugado por estos ltimos es an pobremente conocido como por ejemplo la lipoperoxidacin lipdica debido a peroxinitrito, tioles nitroso y cido hipocloroso

Los estudios experimentales evaluaron sus efectos en las etapas tempranas de la aterosclerosis. El metabolismo en animales puede ser distinto al del hombre. Los animales pequeos tienen un metabolismo ms acelerado, as la velocidad de progresin de aterosclerosis, como la susceptibilidad al estrs oxidativo es mayor en estos animales. La patognesis de la enfermedad puede diferir entre el modelo experimental y la enfermedad natural desarrollada en el hombre. En los estudios experimentales los niveles de colesterol son mucho mayores que en humanos: sobre 600 mg/dl en estudios animales versus bajo 300 mg/del en estudios clnicos

Los estudios randomizados reclutaron sujetos con alto riesgo de eventos cardiovasculares. En cambio, los estudios con estatinas en poblaciones con riesgo similar demostraron reduccin de los eventos.

Los eventos oxidativos a nivel celular son mucho ms complejos que los considerados previamente ya que los oxidantes son producidos de muchas maneras y en diferentes sitios en la celula: membrana, citosol, mitocondria y retculo endoplasmtico. Por lo tanto existe una compartimentalizacin del estrs oxidativo. As un antioxidante dado, para ser efectivo, debera penetrar al sitio particular donde ocurre el estrs oxidativo.