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REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Una molcula de enzima no acta siempre a la misma velocidad. Su actividad puede estar modulada por: cambios en pH cambios en temperatura presencia de cofactores Concentraciones del sustrato y de los productos presencia de inhibidores modulacin alostrica modificacin covalente activacin por protelisis isoenzimas

EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Vel. de reaccin enzimtica depende de [S]. Vel. de reaccin enzimtica con 6 concentraciones diferentes de sustrato.

EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Presencia de productos finales puede hacer que reaccin sea ms lenta o incluso invertir su sentido.

EFECTO DE LOS INHIBIDORES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA


Ciertas molculas (iones y pequeas molculas especficas) pueden inhibir la accin cataltica de un enzima: inhibidores. Inhibicin de actividad enzimtica: Importante mecanismo de control en sistemas biolgicos ---Enzimas alostricas. Drogas y agentes txicos. Inhibicin por qumicos: identificacin de residuos claves para catlisis.

Tipos de Inhibicin
Reversible: Reversible Disociacin rpida del complejo EI. Removiendo el inhibidor desaparece el efecto. Competitiva y No competitiva. Irreversible: Irreversible Disociacin lenta del complejo EI por unin covalente. Inactivacin TOTAL del enzima.

Complejo Enzima-Sustrato

Inhibidor competitivo se une al sitio activo evitando la union del sustrato

Inhibidor No competitivo no evita la union del sustrato

1) Inhibicin reversible competitiva: Inhibidor ocupa el sitio activo

I competitivo semejante al sustrato.

1) Inhibicin competitiva

Disminuye la tasa de catlisis al disminuir la proporcin de molculas de enzima disponibles para unir el sustrato. Reversible por aumento en la concentracin del sustrato: altera km --AUMENTO.

Cintica de un Inhibidor Competitivo. A medida que aumenta [I], se requiere mayor [S] para alcanzar la Vmx de la reaccin: aumenta Km.

Efecto de Inhibidor competitivo: se altera el Km.

Inhibicin Competitiva: Metotrexato es anlogo al cofactor tetrahidrofolato (dihidrofolato reductasa en biosntesis de purinas y pirimidinas).
100 veces mas afin por E. Tto cancer

2) Inhibicin no competitiva: El inhibidor ocupa un sitio diferente al sitio activo pero solo se une al ES.

I y S unidos en diferentes sitios de union del enzima. No se forma el producto.

3) Inhibicin no competitiva: El inhibidor ocupa un sitio diferente al sitio activo

Cintica de un Inhibidor No Competitivo: El inhibidor se une tanto a la enzima libre como al complejo ES. Vmax no se puede alcanzar aun con altas (S). Disminuye el numero de recambio al no formar el producto.

kcat disminuye cuando incrementa [I]. Vmax cambia: =kcat[E]t = kcat[E]t/(1 + [I]/KI)

3) Inhibicin mixta: El inhibidor ocupa un sitio diferente al sitio activo, pero puede unirse al E o al ES.

Evita la union del sustrato y disminuye el nmero de recambio de Enz (Kcat)

3) Inhibicin irreversible: El inhibidor modifica la enzima.


La quimiotripsina se modifica irreversiblemente por el DIFP (diisopropil flurofosfato) en ser 195 (sitio activo)

Estructura de la Penicilina: Sitio reactivo de la penicilina es el enlace peptdico del anillo Blactmico. Unin covalente modificando la enzima transpeptidasa, evitando la sntesis de pared bacteriana.

Inhibidores Irreversibles usados para identificar sitios activos


Identificacin de mecanismo qumico de enzima: identificacin de gr. Funcionales requeridos para act. Enzimtica. Cristalografa de rayos X de ES. I. irreversibles unidos covalentemente a enzimas muestran gr. Funcionales activos al modificarlos. I. Irreversibles: Reactivos especficos de Grupo, Anlogos de Sustrato e Inhibidores Suicidas.

Inhibicin enzimtica por el di-isopropilfosfofluoridato (DIPF), en un grupo-especfico. DIPF puede inhibir enzima por modificacin covalente de un residuo de serina CLAVE (acetilcolinesterase).

Inactivacin enzimtica por Iodoacetamida, agente inhibidor especifco de grupo. Iodoacetamida puede inactivar al enzima reaccionando con un residuo clave de cistena.

Affinity Labeling. (A) Tosyl-l-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK) is a reactive analog of the normal substrate for the enzyme chymotrypsin. (B) TPCK binds at the active site of chymotrypsin and modifies an essential histidine residue.

Inhibicin Suicida
Inhibidores: sustratos modificados. Ei se procesa como mec. cataltico normal. El mecanismo de catlisis genera un reactivo qumico intermediario que inactiva el enzima por modificacin covalente. Enzima participa en su propia inhibicin irreversible: gr modificados covalentemente en enzima son vitales catalticamente.

MODULACIN ALOSTRICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA


Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa). R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms afinidad. Las formas R y T se encuentran en equilibrio R <==> T :

Si los moduladores enzimticos actan en lugares distintos del centro activo del enzima se llaman moduladores alostricos.

Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R: moduladores positivos. Sustrato es a menudo un modulador positivo. Las molculas que favorecen la forma R pero actan sobre una regin del enzima distinta del centro activo son los activadores alostricos.

Activador alostrico: favorece la unin del sustrato

Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimtica son los moduladores negativos. Si estos moduladores actan en lugares distintos del centro activo del enzima se llaman inhibidores alostricos. Inhibidor alostrico: impide la unin del sustrato

La trasformacin de treonina a Isolecucina requiere la accin de 5 enzimas diferentes

Algunas enzimas pasan de una forma menos activa a otra ms activa unindose covalentemente a un grupo qumico de pequeo tamao como el Pi o el AMP. Tambin se da el caso inverso, en el que un enzima muy activo se desactiva al liberar algn grupo qumico.

En las enzimas de las vas degradativas del metabolismo, la forma fosforilada es ms activa que la no fosforilada, mientras que en las vas biosintticas ocurre lo contrario. Activacin de una protena por fosforilacin.
Elementos de la reaccin

El enzima fosforilado es activo

El enzima no fosforilado es inactivo

La glicgeno sintasa es una enzima tetramrica que consiste de cuatro subunidades idnticas. Su actividad es regulada por fosforilacin de los residuos de serinas en las subunidades proteicas.

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA POR MEDIO DE ISOENZIMAS


Algunos enzimas tienen distinta estructura molecular aunque su funcin biolgica es similar: isozimas o isoenzimas. Estas diferencias de estructura se traducen en ligeros cambios en sus propiedades, de forma que cada isozima se adapta perfectamente a la funcin que debe realizar. As, podemos observar la existencia de isoenzimas en funcin de: el tipo de tejido: Lactato deshidrogenasa presenta isozimas distintos en msculo y corazn. el compartimento celular donde acta: Malato deshidrogenasa del citoplasma es distinta de la de la mitocondria. el momento concreto del desarrollo del individuo: Por ejemplo, algunos enzimas de la gluclisis del feto son diferentes de los mismos enzimas en el adulto.

Activacin proteoltica de la actividad enzimtica


Proenzimas o zimgenos: Protenas precursoras sin actividad enzimtica. Activacion: zimgenos sufren un ataque hidroltico que origina la liberacin de uno o varios pptidos. El resto de la molcula proteica adopta la conformacin y las propiedades del enzima activo.

ACTIVACIN PROTEOLTICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA


Enzimas digestivas se secretan en forma de zimgenos y en el tubo digestivo se convierten en la forma activa. a-quimotripsina, se sintetiza en forma de quimotripsingeno. Si estos enzimas se sintetizaran directamente en forma activa destruiran la propia clula que las produce. As, la tripsina pancretica (una proteasa) se sintetiza como tripsingeno (inactivo). Si por alguna razn se activa en el propio pncreas, la glndula sufre un proceso de autodestruccin (pancreatitis aguda), a menudo mortal.

Activacin proteoltica de la actividad enzimtica