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PROCESAMIENTO DE TEJIDOS

Dr. Francisco Armando LAJO SOTO. Patlogo Clnico y Anatomo Patlogo.

PROCESAMIENTO DE TEJIDOS
Piezas operatorias Autopsia. Tcnicas histolgicas (Estructura) - Ex. Inmediato: - En fresco (Invivo). :Con coloracin : Si coloracin. - Ex. Mediato (Post Morten) - Utiliza reactivos

Pasos Procesamiento de Tejidos.


1.- FIJACION.- (Fijadores). - Sustancias qumicas: cidos, metales pesados, formaldehdo, etc. - Procesamiento microscopia. Objetivos. - Detener auto lisis. - No Cambio de estructura. - Demora: Seca y aumento lisis. - Endurecen tejidos.

FIJACIN.
MECANISMO DE ACCIN. - Por coagulacin protenas (Alcohol, Ac. Pcrico, Formol etc. - Combinaciones qumicas (Ac. crmico, bicromato de K, bicromato de amonio. - Por reduccin precipitado (Ac. smico, bicloruro de mercurio). - Por oxidacin (bicromato de K)

CARACTERISTICAS: FIJADORES
Bloquear auto lisis Microbicida, distorsiones. Inducir cambios en estructura favorezca inclusin Velocidad de penetracin (Tamao pieza debe ser proporcional a la V. de penetracin). Velocidad de fijacin (tiempo para estabilizar comp. qumicos

CLASES: FIJADORES
1.- SIMPLES: . Formaldehido. - Gaseoso estado puro - Lquido a 21 - Toxico - Concentracin 35 40% - estabilizado con etanol - Formalina

VENTAJAS.
Barato. Conserva estructura. Almacenaje de biopsias ( No endurece mucho) Escasa retraccin tisular. Velocidad de penetracin intermedia. Fija grandes piezas Excelente: Tej. Nervioso, Adiposo y lpidos Compatible con tinciones. Modificado T se acelera o retarda fijacin 35 - 36h. 35 - 12 24 h. 55 - 3 h-

DESVENTAJAS
Vapores. Acc. Luz y O2 atm. - ac. formico disuelve cromatina nuclear. No Formol tamponado presin osmtica baja no saca H2O de tejidos. Relativa fijacin de protenas

FIJADORES LIQUIDOS
1.-Alcohol Absoluto. - Preserva glucgeno - Distorsin ncleo. - Comprime citoplasma. 2.- Acetona Fra. - Histoqumica. - Ez. Lipasas, fosfatasas. - Distorsin nuclear y comprime citoplasma. - No preserva glucogeno.

FIJADORES LIQUIDOS
3.- Glutaraldehido- Penetracin lenta. - Valioso M/E. (Histologa enzimtico) - No Histotecnologa, por: - Penetracin lenta. - Requiere baja temperatura. - Necesidad de medio de almacenamiento.

FIJADORES LIQUIDOS
4.- Acido Tricloroacetico. ( Ya no se usa) - Preserva aa con S.: Cistina, Cisteina, metionina. - Como agente descalcificante. 5.- Acido Acetico. - Nunca se usa solo. - Penetracin rpida. - Lisis hematies. - Contraccin tisular.

FIJADORES SLIDOS.
1.- Cloruro de mercurio( Sublimado corrosivo Cloruro de mercurio) - Penetracin rpida. - Precipita proteinas. - Desventaja: - Cristales de mercurio - Venenosa. - Zenker, Helly, Ridley y B-5

FIJADORES SLIDOS
2.- Dicloruro de K . - Fija citoplasma. - No se precipita. 3.- Acido Crmico. - No efecto para lpidos - Penetracin lenta. 4.- Tetraoxido de Osmio. - Para especimenes pequeos 2 3 mm. - Preserva estructura finas de clula. - M/E.

Fijacin
Pieza operatoria

Fijacion
Artificios perinucleres

Fijacin
Autolisis

intestino delgado normal, cerdo recin necropsiado con una fijacin inmediata de las muestras digestivas.

2.- PROCESAMIENTO DE TEJIDOS ( INCLUSION) 12 18 H.


Pasos secuenciales , remover agua y reemplazar con medio slido corte. a.- Deshidratacin. - Salida de agua. - Ingreso de parafina - Alcoholes ( solubles en agua y anhidros) - 70 - 90 (2 veces - 15 30) - 100 ( 2 veces 15)

PROCESAMIENTO DE TEJIDOS
b.- Aclaramiento. - Disolvente Xilol 30/1. - Elimina agente deshidratante. - Permite ingreso de parafina - No mas 3 h. Tejido se vuelve quebradizo. - Xilol I 15 Xilol II 30

PROCESAMIENTO DE TEJIDOS
c.- Infiltracin. (3 fcos) - Con Parafina ( Hc slido no cclico). - Licua 56 58 - Parafina I: 15 II: 15 III :15

3.- INCLUSIN
Encierra biopsia dentro bloque de parafina Barra de leucark

4.- MICROTOMIA.
Seccin de tejidos Microtomo. Cuchillas: Acero, diamante, vidrio, descartables. Grosor: 4 u ganglio 6 u - Teido normal. 10 u amiloide. 15 u - melanina 20 u - neuroglia

5.- COLORACIN: Clasificacin


1.- Naturales: a) Hematoxilina. b) Orcerina. c) Carmn d) Azafrn
2.- Sintticos. 1.- Colorantes Azoicos ( mono y trizoicos Citoplasma) 2.- Colorante de tiacina. 3.- Colorante de acina. 4.- Colornte de oxacina. 5.- Colorante de xanteno etc.

1.- Desparafinacin: - Xilol I, II 5 c/u. 2.- Hidratacin - Alcoholes 100 - 70 - Lavar 5 3.- Coloracin. - Hematoxilina 5 10 - Lavar con agua 5 - Alcohol acido 3 veces (aclaramiento) - Lavar 5 - carbonto amoniacal 1% 3 veces (azulamiento) - Lavar 5 - Eosina 5 - lavar 4.- Deshidratacin - Alcoholes 70 -100% : Corriente I y II -. Absoluto I y II 5.- Aclaramiento: Xilo I , II y III 6.- Montaje: Blsamo de Canad.

COLORACIN.

SECUENCIA DE TINCION
Comenzar: Xilol Xilol Alcohol 100% 100% - 95% - 95% - 80% - Agua bidestilada Hematoxilina Agua corriente Agua destilada Alcohol 80% - Eosina Alcohol 95% - 95% . 100% - 100% . Xilol Xilol : Montar

Ok.

GRACIAS