Imagen Molecular

La Imagen Molecular es una nueva disciplina de diagnstico por la imagen in vivos Sondas moleculares son enviadas contra dianas biolgicas especficas, con el fin de obtener una imagen que permita estudiar procesos celulares y/o moleculares. Mltiples disciplinas forman parte de Imagen Molecular: Biofsica Resonancia Magntica Ingeniera Biolgica Farmacologa, Bioqumica Biologa molecular etc. En Imagen Molecular, cientficos y mdicos trabajan conjuntamente con un inters comn: la fusin de las tcnicas moleculares y de biologa celular ms modernas con la tecnologa punta en imagen no invasiva

Para ello, expertos en Imagen Molecular tienen que aprender el lenguaje aropiado. Para facilitar este perodo de transicin han sido publicados diferentes glosarios de terminologa de Imagen Molecular. Las innovaciones en pruebas in vitro y traducirlas a in vivo
Modus operandi de la Imagen Molecular: la rpida transformacin de tcnicas de Biologa celular y molecular desde el campo in vitro al in vivo con una rpida valoracin en mamferos de pequeo tamao permitir una rpida traduccin de nuevas sondas moleculares al rea clnica para su uso en diagnstico por la imagen y tratamiento.

Wagenaar DJ, Weissleder R, Hengerer A. Glossary of molecular imaging terminology. Acad Radiol. 2001;8:409-20.

La Imagen Molecular tentativaemnte lograr importantes metas en la investigacin biomdica:

a) Monitorizacin de mltiples procesos moleculares casi simultneamente b) Desarrollo de tcnicas de imagen no invasiva in vivo que reflejen procesos celulares y moleculares claves y a la vez especficos de una enfermedad determinada (por ejemplo interacciones entre protenas c) Seguimiento in vivo de trfico celular y sondas moleculares d) Optimizacin de frmacos y terapias gnicas e) Monitorizacin de los efectos teraputicos, ambientales, experimentales y tiempo-dependientes de productos genticos en un mismo animal o paciente f) Obtencin de imgenes que permitan caracterizar/analizar los efectos teraputicos de frmacos a nivel molecular, casi inmediatamente tras el inicio teraputico g) Identificacin temprana de frmacos prometedores en la industria farmacutica, proporcionando de esta manera un importante ahorro en tiempo y dinero h) Obtencin de imgenes de pre-enfermedad, lo que acelerara el desarrollo de tratamientos ms precoces e incrementara las posibilidades de xito teraputico, e i) Logro de todas estas metas de una manera rpida, reproducible y cuantitativa.

TCNICAS DE IMAGEN MOLECULAR

Diferentes tcnicas de Imagen Molecular se unen en esta sola disciplina con un fin comn:
Tomografa por emisin de positrones (PET) Tomografa por emisin de fotn nico (SPET) Autorradiografa digital Resonancia magntica Resonancia magntica con espectroscopia Bioluminescencia ptica, fluorescencia ptica Ecografa

No obstante, todava hay retos que necesitan ser resueltos, como: el tratar de obtener una imagen de un ratn que pesa 30 g y compararla con la de un humano que pesa 70 kg, diferencias en tamao y volumen, la resolucin espacial necesaria para obtener datos anatmicos y/o funcionales de utilidad, y el tiempo necesario para la adquisicin de las imgenes
Weissleder R, Mahmood U. Molecular imaging. Radiology. 2001;219:316-33.

Las diferentes tcnicas de imagen que existen en la actualidad se diferencian entre s en 5 aspectos principales
1. Resolucin temporal y espacial 2. Profundidad de penetracin 3. Tipo de radiacin empleada en la generacin de imgenes (ionizante/no ionizante) dependiendo de la parte del espectro de radiacin electromagntica utilizada 4. Disponibilidad de sondas moleculares inyectables y/o biocompatibles 5. Lmites de deteccin.

La mayora de las tcnicas de Imagen Molecular utilizan la deteccin de radiacin electromagntica para obtener imgenes de un modo no invasivo. Cada tcnica se especializa en la deteccin de una porcin especfica del espectro de radiacin, dependiendo de la longitud de onda y de la frecuencia de las ondas

Imagen obtenida con radiotrazadores

Tomografa por emisin de positrones para animales de pequeo tamao (microPET)
Se caracteriza por detectar fotones de alta energa (511 KeV), y gran penetracin, que provienen del interior de un sujeto vivo. Esto es posible gracias a la administracin de trazadores que se caracterizan por emitir positrones debido a un exceso de protones en el ncleo, los cuales despus de un corto recorrido se aniquilan con un electrn prximo y producir dos fotones con un angulo de 180 entre ellos, la deteccin casi simultanea de ambos rayos gamma define una lnea de respuesta en el espacio (colimacin temporal) cmaras de microPET tienen una resolucin espacial de aprox. 2 mm..

MicroPET

Imagen obtenida con radiotrazadores

Autorradiografa
Los istopos emisor beta (por ejem. 3-H y 14-C) no pueden ser utilizados en imagen no invasiva ya que las partculas beta (electrones) tienen un recorrido corto y no atraviesasn el cuerpo.y no pueden ser detectadas desde el exterior. Sin embargo, estos istopos son esenciales para la obtencin de imgenes autorradiogrficas. La imagen autorradiogrfica es la imagen metablica a nivel microscpico y proporciona imgenes sin igual de pequeos focos de actividad metablica a nivel tisular e incluso celular (autorradiografa digital). Aunque no es una tcnica utilizada en sujetos vivos, es de gran importancia como complemento y confirmacin de las imgenes no invasivas obtenidas mediante el uso de radiotrazadores.

Autorradiografa de un corte de mdula espinal y sus cubiertas. La radiactividad se encuentra en la aracnoides y en la piamadre medular (x 3)

Autorradiografa de la 2 generacin de Replicacin con TH3

Imagen obtenida con radiotrazadores

Los emisores gamma
99m-Tc, 111-In, 123-I, 131-I. Son utilizados rutinariamente para la obtencin de imgenes funcionales de sujetos vivos, la gammacmara. Es el detector. Imgenes tomogrficas se pueden obtener mediante tcnicas de microSPECT (tomografa computarizada por emisin de fotn nico) en animales de pequeo tamao, en la cual, uno o varios detectores giran 360 alrededor del sujeto vivo. La colimacin espacial es necesaria en microSPECT ya que al pequeo tamao de los sujetos, son recuentemente utilizados colimadores con pin-hole, lo que permite obtener imgenes tomogrficas de SPECT con una resolucin espacial < 1mm.

Espetro normal del cerebro Felix Bloch y Edward Porcell, recibieron el Premio Nbel de Fsica en 1952 por descubrir la resonancia magntica nuclear.

Imagen por resonancia magntica

La resonancia magntica (RMN) es un fenmeno fsico por el cual ciertas partculas como los electrones y los ncleos atmicos con un nmero impar de protones (Z) y/o de neutrones (N) pueden absorber selectivamente energa electromagntica de radiofrecuencia. Cuando los ncleos bajo un campo magntico entran en RESONANCIA, absorben energa de radiofrecuencia en un proceso llamado de RELAJACIN. Durante este proceso de relajacin se induce una seal elctrica a una antena receptora que tratada convenientemente servir para obtener la imagen tomogrfica en IRM (tcnicas de imagen) o para realzar el anlisis espectromtrico en SRM.

Se diferencian dos vertientes de aplicacin a la RM: - Tcnicas de imagen (IRM) - Tcnicas de anlisis espectromtrico (SRM)

Los ncleos, como los electrones o los protones, tambin tienen espn. El espn es una propiedad mecanocuntica que a veces se asocia al supuesto giro de las partculas. En este sentido una partcula de espn tendra limitadas sus posibles orientaciones para el giro a dos. Cada estado de espn est representado por un vector (amarillo). En ausencia de campo magntico externo, los espines de una muestra de ncleos estn desordenados, no existe, por tanto diferencia energtica entre ellos por la orientacin que tomen en el espacio.

En presencia de un campo magntico externo Ho la situacin cambia. Los espines se orientan en relacin a ese campo dando lugar a dos estados diferenciados energticamente. El menos energtico y, por tanto, ms favorable es aqul en el que el espn tiene el mismo sentido que Ho (vector verde). Realmente la situacin no es esttica, sino que el vector espn (amarillo) gira en torno a la direccin que marca Ho con una frecuencia caracterstica denominada frecuencia de Larmor ( o) que depende de la intensidad del campo magntico aplicado:
o= Ho

Si en la situacin anterior los ncleos son irradiados con la energa adecuada E = h fo = h o /2 (ntese que la frecuencia de la radiacin que aporta esa energa ha de coincidir con la frecuencia de Larmor) se produce el fenmeno de resonancia magntica nuclear. Los espines cambian de una orientacin a otra. La frecuencia de excitacin requerida cae en la zona de ondas de radio, por ello en la animacin se observa un pequeo vector verde perpendicular al campo Ho que representa el campo magntico de la onda electromgntica de excitacin empleada. Cuando la frecuencia de las ondas de radio no coincide con la frecuencia de Larmor, los espines no entran en resonancia y no cambian de sentido. Cuanto ms intenso es el campo externo Ho, ms diferencia de energa existe entre los dos estados de espn y, en consecuencia, ms frecuencia ha de tener la radiofrecuencia para que se produzca la resonancia.

Cuando se aplican adecuadamente dos pulsos como los descritos anteriormente a una muestra de ncleos no homognea, durante el proceso de decaimiento magntico se produce la emisin de radiofrecuencias por parte de la muestra (eco). Esta seal puede ser captada por el equipo apropiado.

Microtomografa computarizada

Imagen ptica
Bioluminiscencia

Imagen ptica mediante bioluminescencia de un ratn (en color) sobreimpuesta a una fotografa del mismo en escala de grises. Clulas tumorales linfomatosas con la capacidad de expresar el gen de la luciferasa gracias a las tcnicas de ingeniera gentica fueron inyectadas de forma intravenosa una semana antes de la obtencin de la imagen mostrada. La imagen fue obtenida con una CCD cmara refrigerada tras la administracin intravenosa del sustrato coelenterazina.La fotografa muestra infiltracin linfomatosa del timo. Imgenes de bioluminiscencia (izquierda) y gammagrafa (derecha) obtenidas del mismo animal de experimentacin (Balb/c ratn) 10 das despus de la implantacin subcutnea en el hombro derecho de clulas de cncer de mama (1 x 104 4T1luc/gfp cls) transducidas con un retrovirus (pMSCV/L2G) que presentaba el gen de la luciferasa. La imagen gammagrfica fue obtenida tras la administracin intravenosa de antiVEGF (antifactor de crecimiento vascular endotelial),mostrando la existencia de angiognesis aberrante en el mismo tumor. Este ejemplo claramente enfatiza la diferencia en actividad de fondo de las dos tcnicas de imagen

Imagen ptica
Flourescencia

Microultrasonidos
Tcnica ms usada Bajo costo Fcil acceso Seguridad Emiten sondas de sonido de alta frecuencia (>20KHz)

 Imgenes en tiempo real, facilita uso de inyecciones guiadas Manipulacin intratero embriones de ratn Observacin de pequeas estructuras es posible por el uso de ultrasonografa biomicroscpica Utilizan fc entre 20 a 100 MHz Obtiene visin casi microscpica

Multimodalidad
Rene en una sola imagen informacin de las diferentes tcnicas de imagen antes descritas Diferentes tcnicas de imagen estn disponibles en la misma cmara Detectadas por 2 diferentes tcnicas a la vez: SPECT y tomografa computarizada PET e imagen ptica PET y resonancia magntica

 Permite la validacin de sondas moleculares mediante diferentes tcnicas de imagen molecular casi simultneamente Este concepto permite amalgamar la informacin obtenida casi simultneamente en un mismo animal de experimentacin

Dianas biolgicas y Sondas moleculares

Dianas biolgicas: es aquello que se utiliza endogenamente para investigar tejidos a nivel celular/molecular (receptores, enzimas) Sonda Molecular: localiza dianas biolgicas especficas y detecta una seal que nos permite obtener una imagen (trazadores, partculas superferromagnticas)

Imagen del Gen Informador

Es la expresin de Dianas Biolgicas especficas, que normalmente no existiran en aquellas clulas que son de inters (clulas tumorales) Que permite detectarlas mediante sondas moleculares que favorecen su visualizacin

 Las tcnicas de imagen molecular ofrecen la posibilidad de monitorizar de forma no invasiva la localizacin, magnitud y persistencia del gen informador De esta manera se pueden crear clulas con sondas moleculares que actuaran como marcadores de expresin gnica para la localizacin y seguimiento de las clulas de inters.

 La imagen de expresin gnica puede ser conseguida de 2 maneras: Mediante la transferencia de genes en clulas especficas (transgenes) Mediante la expresin de genes endgenos n especficos. El gen informador debe ser introducido a la clula normalmente mediante vectores

Gen informador
Debe ser estable, desaparecer rpidamente de la circulacin No debe ser citotxico El tamao del gen deben ser suficientemente pequeo para caber en un vector No deben de impedir su paso las barreras biolgicas naturales para alcanzar su destino

Annexina V
Sonda molecular prometedora Protena 20 tipos, V PM 36 mil y 319aa que se une a la fosfatidil serina (fosfolpido componente de la membrana celular) Se expresa como resultado de la activacin y desactivacin de procesos enzimticos especficos La expresin de fosfatidil serina es la seal que indica que la clula es apopttica. Marcador de procesos apoptticos Annexina V 3es marcador de procesos apoptticos.

Factor de crecimiento vascular endotelial

Sonda molecular VEGF se une al receptor VEGF tipo 2. Este receptor se caracteriza por expresarse en clulas endoteliales localizadas en reas de formacin vascular (angiognesis) aberrante La visualizacin in vivo es considerada importante en la caracterizacin tumoral Y para evaluar tx oncolgicos

 La imagen molecular es una nueva disciplina No invasiva de diagnstico por imagen que promete cambiar el modo en que se esta llevando a cabo la medicina actual