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POTENCIADORES DE LA REACCIÓN

ANTÍGENO - ANTICUERPO
POTENCIADORES DE LA REACCIÓN ANTÍGENO - ANTICUERPO

Varios reactivos potenciadores pueden ser


agregados a la mezcla de suero y glóbulos rojos
antes de la fase de incubación a 37 °C para
aumentar la sensibilidad de la prueba y permitir
a su vez acortar el tiempo de incubación.
REACCIÓN ANTÍGENO - ANTICUERPO

PBS
LISS
LISS

Otros…
ALBÚMINA

En una solución electrolítica. La albúmina dispersa


las cargas al reducir dicho potencial, permitiendo así
que los glóbulos rojos se acerquen entre sí, lo cual
aumenta la posibilidad de aglutinación.
ALBÚMINA

– En concentraciones de ≥ 30% favorecen a la


aparición de rouleaux.

– En la prueba de coombs indirecta no aumenta la


sensibilidad de la prueba.
SOLUCIÓN DE BAJA FUERZA IÓNICA

• LISS es una solución tamponada que


contiene glicina, albúmina y una mínima
cantidad de sales.

• Además de reducir el potencial zeta, aumenta la


tasa de captación de anticuerpos durante la fase
de sensibilización; esto incrementa la posibilidad
de aglutinación y reduce el tiempo de incubación
necesario para la detección de anticuerpos.
SOLUCIÓN DE BAJA FUERZA IÓNICA

• Para eliminar falsos positivos que fue problema


en el pasado se requiere de una solución LISS
0,03 M.

• La solución de LISS puede ser utilizada de dos


maneras:
 Como medio para realizar la suspensión
globular.
 Como aditivo.
SOLUCIÓN DE BAJA FUERZA IÓNICA

• El mecanismo de acción del LISS se basa en la


capacidad de disminuir la fuerza iónica del
medio.

• Si las moléculas orgánicas tienen cargas


opuestas, entonces la atracción será rápida;
en cambio si tienen igual carga se repelen
y disminuye la velocidad de reacción.
SOLUCIÓN DE BAJA FUERZA IÓNICA

La reducción de la fuerza iónica produce no solo un


aumento de la tasa de asociación de los anticuerpos
sino también una disminución de la tasa de disociación,
y también favorece la absorción cuantitativa de
anticuerpos de baja afinidad
SOLUCIÓN DE BAJA FUERZA IÓNICA

• Si los GR se encuentran suspendidos en medio salino, los iones


sodio se acumulan alrededor de la carga negativa del antígeno
y los iones cloruro formarán una nube alrededor de la carga
positiva del anticuerpo, neutralizándolos parcialmente.

• Si los iones son removidos, las cargas positivas y negativas


quedan expuestas, lo cual acelera la tasa de asociación entre
los anticuerpos y el antígeno y aumenta el valor de la
constante de equilibrio.
SOLUCIÓN DE BAJA FUERZA IÓNICA
• Si el anticuerpo en cuestión tiene una constante de equilibrio baja, el
aumento del 5% al 90% causará un incremento considerable de la fuerza
de aglutinación en la fase antiglobulínica.
SOLUCIÓN DE BAJA FUERZA IÓNICA

VENTAJAS:

- Detecta anticuerpos en baja concentración y los de baja afinidad que pueden


perderse con los lavados.

- Reduce los tiempo de incubación.

DESVENTAJAS:

- Debe ser sometido a estricto control de osmolaridad para evitar la fijación


inespecífica del complemento.
- Los glóbulos rojos suspendidos en LISS deben ser procesados dentro de las
24 hr.
- Menor sensibilidad para anti – K. (en la primera fase de aglutinación).
POLIETILENGLICOL (PEG)

El PEG en una solución LISS elimina el agua


del sistema de prueba, lo cual concentra los
anticuerpos presentes y aumenta de esta
manera el grado de sensibilización de los GR.
POLIETILENGLICOL (PEG)

• En pacientes con niveles elevados de proteínas


plasmáticas, como en el mieloma múltiple, no se
aconseja su uso debido a que el PEG tiende a
incrementar la precipitación
de proteínas.

• Cuando se utiliza PEG el suero antiglobulina


humano utilizado debe ser monoespecífico anti-
IgG.
POLIETILENGLICOL (PEG)

- No debe centrifugarse el PEG con el suero y GR Se


lavan las células con solución salina y luego se
efectúa la prueba antiglobulínica.

- Evita las reacciones falsas positivas con algunos


agentes poliespecíficos.
POLIETILENGLICOL (PEG)

- Precipitados podrían interpretarse como


reacciones positivas

- Potenciador de elección para la absorción de


Ac calientes
ENZIMAS PROTEOLÍTICAS

• Bromelina, ficina, papaína y tripsina(Las más usadas)


• Desnaturalizan ciertos antígenos eritrocitarios, en
especial M, N, S, Fya , Fyb , XG
• Disminuyen la carga superficial de los GR por clivaje
de las moléculas de ácido siálico de las cadenas
polisacáridas
• El tratamiento enzimático lleva a la formación de
espículas en los GR y aumenta así el número
potencial de puntos de contacto
GRACIAS

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