SECUENCIACIÓN DEL ADN POR

MÉTODO DIDEOXITERMINAL
AUTOMATIZADO

CARLOS ANDRÉS MORALES PADILLA

EDWIN JAVIER DELGADO CÁLIZ
MEDICINA III-A
HISTORIA

primer secuenciador
automático del método
Sanger, el Applied
Biosystems 370A
¿QUE SE NECESITA PARA EL MÉTODO SANGER AUTOMATIZADO?

 Cebadores para TAQ polimerasa (oligonnucleotidos)

 ADN molde
 dideoxinucleotidos (ddATP, ddGTP, ddCTP, ddTTP)
 Enzima TAQ polimerasa
 Dexosinucleotidos (dATP, dGTP, dCTP , dTTP)
METODOLOGÍA DEL PROCESO

 Se fragmenta el ADN para tener una

hebra de cadena sencilla a partir de la
cual se va a empezar el método

Hebra molde
Se añade el primer que Hibridación con la secuencia
hibride con el extremo
3 de zona a secuenciar Se separa la muestra en
diferentes tubos
Cada tubo contiene un dNTP y un ddNTP Actúa la TAQ polimerasa para
marcado con fluorescencia generar nuevas hebras

TAQ polimerasa
Se generan hebras nuevas mezcladas en Proceso de automatización en un único
dirección 5‘ a 3‘ con el ddNTP incluido carril de electroforesis
¿COMO SE INTERPRETA?
APLICACIONES :DIAGNÓSTICO PRENATAL (MEDICA)

También sabemos que el feto y la madre

comparten sangre

 Diagnóstico prenatal (medica)

APLICACIONES : SECUENCIACIÓN DEL ADN DE TUMORES EN EL TRATAMIENTO DEL CÁNCER
(BIOMÉDICA)
APLICACIONES :PROYECTO GENOMA HUMANO (BIOTECNOLÓGICA )