CURSO: EQUIPOS E

INSTRUMENTOS DEL AREA DE

BIOQUIMICA

BLGA. FLOR DE MARIA RODRIGUEZ C.

 TEMA 12

ELECCIÓN Y SELECCIÓN
DE LONGITUD DE ONDA
ESPECTROFOTÓMETRO
 Spectrum = Imagen
Phos = Luz

Instrumento que utiliza las propiedades de la luz y su

interacción con otras sustancias, para determinar la
naturaleza de las mismas.
La luz de una lámpara de características especiales es
guiada a través de un dispositivo que selecciona y separa
luz de una determinada longitud de onda y la hace pasar
por una muestra.

La intensidad de luz que sale de la muestra es captada y

comparada con la intensidad de luz que incidió en la
muestra.
OBJETIVO
Principios

Consiste en ondas de
campos eléctricos y Energía
magnéticos que se
propagan a través del electromagnética
espacio, y se trasladan
a la velocidad de la luz.
Longitud de onda

Es la distancia que recorre una perturbación periódica que

se propaga por un medio en un ciclo.

Es la distancia entre dos máximos del campo eléctrico.

Es la separación entre dos crestas consecutivas.

Fenómenos de la luz cuando pasa por objetos:
Reflexión.
Refracción.
Difracción.
Absorción.
Difusión.
Polarización.
Reflexión
Refracción
Difracción
Absorción
Difusión
Polarización
Ley de Beer Lambert

Identifica la relación existente entre la concentración de la

muestra y la intensidad de la luz transmitida a través de la
misma.
Transmitancia (T)
•  
Donde:
It = Intensidad de la radiación transmitida.
Io = Intensidad de la radiación incidente.
Absorbancia (A)

•  

Donde:
: Absortividad molar (litros/moles/cm)
b : distancia de la trayectoria recorrida por la luz dentro de la muestra.
c : concentración de la muestra (moles/litro)
Componentes del espectrofotómetro
Elección y selección de
la longitud de onda
La longitud de onda de trabajo corresponde,
generalmente, a la longitud de onda en la cual la
absorbancia del analito es máxima, y recibe la
denominación de Lambda máximo (λmax).

Para seleccionar el λmax, se realiza un espectro de

absorción o curva espectral.
Si son sustancias coloreadas, las mediciones se realizan en
la zona visible del espectro electromagnético (380-
800nm).

Si son sustancias no coloreadas, las mediciones se realizan

en la zona ultravioleta del espectro electromagnético
(200-380nm).
Longitud de onda A (fenolato) A (lignina)

200 2.503 0.172

210 2.169 0.169

220 2.296 0.087

230 2.399 0.228

240 2.581 0.19

250 3 0.351

260 3 0.403

270 2.5 0.3

280 2 0.202

290 1.1 0.139

300 0.8 0.24

310 0.5 0.315

320 0.185 0.302

330 0.11 0.285

340 0.077 0.275

350 0.056 0.266

360 0.043 0.254

370 0.037 0.233

380 0.033 0.207

390 0.029 0.186

400 0.031 0.163

GRACIAS…