INTRODUCCIÓN A LAS

SEPARACIONES
CROMATOGRÁFICAS
Equipo C
• Arantxa Hernández Eraña
• Alonso López Iracheta
Mejoramiento del rendimiento de la
columna
Una separación cromatográfica se mejora al variar las condiciones experimentales
hasta que los componentes de una mezcla se separan con claridad en el menor tiempo
posible.
Los experimentos de mejoramiento tienen como objetivo:
– Reducir el ensanchamiento de banda
– Modificar las velocidades relativas de migración de los componentes
El ensanchamiento de la zona se incrementa a causa de aquellas variables cinéticas que
aumentan la altura de plato de una columna.
Por otra parte las velocidades de migración se modifican al cambiar aquellas variables
que afectan los factores de retención y selectividad.
Resolución de una columna

La resolución (Rs) de una columna señala que

tan separadas están dos bandas en relación con
sus anchos. La resolución proporciona una
medida cuantitativa de la capacidad de la
columna para separar 2 analitos. La
importancia de este término se ilustra en la
figura 26.12, que está formada por
cromatogramas de las especies A y B en tres
columnas con diferentes poderes de resolución.
Resulta evidente a partir de la figura
26.12 que una resolución de 1.5
permite una separación
esencialmente completa de A y B, y
que no es así con una resolución de
0.75. Con una resolución de 1.0, la
zona de A contiene alrededor de 4%
de B, y la zona de B contiene una
cantidad similar de A. Con una
resolución de 1,5 el traslape es del
orden de 0.3%
Variables que afectan el rendimiento de la
columna
Variación de N
Una forma obvia de mejorar la resolución es aumentar el número de platos teóricos de la
columna. Este recurso suele requerir más tiempo para completar la separación, a no ser que
el aumento de N, se lleve a cabo mediante una reducción de H en vez de alargar la columna.
Variación de H
Se demostró que se puede lograr una importante mejora de la resolución sin que repercuta
en el tiempo si se puede reducir la altura del plato.
Variación del factor de retención
Muchas veces una separación puede mejorar de manera importante al manipular el factor de
retención (Kb). Por lo general los incrementos (Kb) aumentan la resolución, pero a
expensas del tiempo de elución.
Variables que afectan el rendimiento de la
columna
Variación del factor de selectividad
Cuando k se aproxima a la unidad, mejorar K y aumentar N no suele ser suficiente para
conseguir una separación satisfactoria de 2 solutos en un tiempo razonable. En estas
circunstancias se ha de buscar un procedimiento para aumentar α mientras K, se conserva
en el intervalo óptimo de 1 a 10. Se dispone de varias opciones; en orden decreciente de
conveniencia, determinada esta por sus expectativas y comodidad, las opciones son:
1. Cambiar la composición de la fase móvil
2. Cambiar la temperatura de la columna
3. Cambiar la composición de la fase estacionaria
4. Utilizar efectos químicos especiales
El problema general de la elución
La figura nos muestra unos cromatogramas
hipotéticos para una mezcla de 6 componentes
formada por 3 pares de sustancias que difieren
ampliamente en sus constantes de distribución y,
por tanto, en sus factores de retención.
En el cromatograma a), las condiciones se han
ajustado de tal forma que los factores de retención
de los componentes 1 y 2 están en el intervalo
óptimo de 1 a 5 sin embargo, los factores de los
otros componentes están muy alejados del
intervalo óptimo. Por consiguiente las bandas que
corresponen a los componentes 5 y 6 aparecen
tras un tiempo desmesurado; además están tan
ensanchadas que puede ser difícil identificarlas
sin equivocarse.
El problema general de la elución
Como se muestra en el cromatograma b), al
cambiar las condiciones para mejorar la
separación de los componentes 5 y 6, los picos
de los 4 primeros componentes se agrupan de
tal modo que su distinción es insatisfactoria.
Sin embargo, el tiempo de elución resulta ideal.
En un tercer conjunto de condiciones, en el
cual los valores de K son óptimos para los
componentes 3 y 4, se obtiene el cromatograma
c). Una vez más, la separación de los otros 2
pares de componentes no es enteramente
satisfactoria.
El problema general de la elución

■ El fenómeno que se ilustra en la figura se da con la suficiente frecuencia como para

darle un nombre: el problema general de la elución.
■ Una solución usual para este problema es cambiar las condiciones que determinan los
valores de K mientras tiene lugar la separación, estos cambio se pueden realizar por
etapas o de forma continua entonces, para la mezcla que se muestra, las condiciones al
principio podrían ser las que corresponden al cromatograma a). Inmediatamente después
de la elución de los componentes 1 y 2, las condiciones se podrían cambiar a las que
resultaban óptimas para la separación de los componentes 3 y 4, como en el
cromatograma c). Tras la aparición de los picos de estos componentes, la elución se
podría completar en las condiciones que permiten obtener el cromatograma b). A
menudo este procedimiento conduce a separaciones satisfactorias para todos los
componentes de una mezcla en un tiempo mínimo.
El problema general de la elución
■ En cromatografía de líquidos las variaciones de K se obtienen al cambiar por
variaciones en la composición de la fase móvil durante la elución. Dicho procedimiento
se denomina elución con gradiente o programación del solvente.
■ La elución con una composición constante de la fase móvil se llama elución isocrática.
■ En el caso de la cromatografía de gases, se puede modificar la temperatura en la manera
conocida para originar cambios en K
Aplicaciones de la cromatografía
La cromatografía ha llegado a ser el principal método para al separación de especies
químicas estrechamente relacionadas entre sí. Además, se puede emplear para la
identificación cualitativa y para la determinación cuantitativa de las especies separadas.

Análisis Cualitativo
Un cromatograma proporciona solo un elemento de información cualitativa acerca de cada
una de las especies de la muestra, a saber, su tiempo de retención o su posición en la fase
estacionaria después de cierto periodo de elución. Por su puesto que a partir de
cromatogramas obtenidos con diferentes fases móviles y estacionarias y a diversas
temperaturas de elución se puede obtener más información. Es importante considerar que,
aunque los cromatogramas no ayudan en la identificación positiva de las especies presentes
en una muestra, proporcionan a menudo la evidencia segura de la usencia de ciertos
compuestos. Entonces si la muestra no origina un pico con el mismo tiempo de retención
que un patrón en condiciones idénticas, se puede suponer que el compuesto en cuestión no
esta presente, o bien que lo está con una concentración por debajo del límite de detección.
Análisis Cuantitativo
Es importante tratar algunos de los aspectos cuantitativos aplicables a todos los tipos de
cromatografía. Las características cromatográficas cuantitativas de la columna se basan en la
comparación de la altura o el área del pico el analito con la de uno o más patrones.
Análisis basados en la altura del pico
La altura de un pico cromatográfico se obtiene al unir las líneas base a cada lado del pico con una
línea recta y midiendo la distancia vertical desde esta línea hasta el pico.
Análisis basados en las áreas de los picos
Las áreas de los picos son independientes de los efectos de ensanchamiento debido a las variables
que se mencionaron en el párrafo anterior. Desde este punto de vista, por tanto, las áreas son un
parámetro analítico más adecuado que la altura del pico. Por otra parte, las alturas de los picos se
miden con más facilidad y en el caso de los picos estrechos, se determinan con mayor exactitud. No
obstante, las alturas de los picos se ven afectadas por los cambios en el tiempo de retención o la
eficiencia de la columna en tanto que las áreas de los picos no. Por tanto, las áreas de los picos son el
método de cuantificación preferido.