Características que debemos tomar en cuenta para purificar enzimas

Para qué queremos purificar la enzimas :

Actividad
Concentrarla
Purificarla
Propiedades de la enzimas:
Masa Molecular
Punto Isoeléctrico
Solubilidad
Estabilidad

De donde vamos a obtener la enzimas:

Localización subcelular
Tejido
Organismo

Que técnica vamos a usar para

purificar. (Dependiendo de que
queremos analizar)

Cuidados de la muestra
durante la purificación.
Las enzimas se pueden purificar para diferentes finalidades:

Investigación
• Estudiar su función biológica.
• Evaluar la estructura primaria, secundaria,
terciaria y cuaternaria de las proteínas.
• Hacer análisis filogenéticos.
• Analizar la relación estructura-función.

Biotecnología
• Aplicaciones médicas.
• Aplicaciones terapéuticas.
• Suplementos alimenticios
• Detergentes y limpiadores.
• Cosméticos
Técnicas de purificación según las propiedades de las enzimas :
• Solubilidad:
 Precipitación.

• Carga iónica:
 Cromatografía de intercambio iónico.

• Tamaño Molecular:
 Electroforesis en gel.
 Centrifugación diferencial.
 Diálisis.
 Cromatografía de filtración en gel.

• Polaridad:
 Cromatografía de interacción hidrofóbica.

• Uniones específicas:
 Cromatografía de afinidad.
Métodos generales para obtención de enzimas:

1. Ruptura del material

2. Obtención del material libre de células (extracto proteico)

3. Precipitación (sales, pH, alta temperatura, solventes orgánicos)

4. Concentración (diálisis o ultracentrifugación)

5. Fraccionamiento cromatográfico.