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¹Departamento de Anatomía Patológica, Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera. Temuco, Chile.
² Departamento de Obstetricia y Ginecologia, Facultad de Medicina, Iniversidad de La Frntera. Temuco, Chile.
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Š üo Chile, o câncer de colo uterino (CCU) ocupa

o terceiro lugar entre os cânceres que acometem
as mulheres;
Š üa região IX, o CCU corresponde a 11,7% do
total de tumores malignos, ocupando o segundo
lugar entre as mulheres, com 20,3%;
Š A infecção pelo HPV é uma DST com
reconhecida associação com lesões pré-
neoplásicas e neoplásicas do colo uterino;
Š Os HPVs que infectam o trato genital feminino
são classificados segundo o potencial oncogênico
em:
Š Baixo risco: 6, 11, 43 e 44 ± detectados em üIC I
Š Alto risco: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58,
59, 68, 73 e 82 ± detectados principalmente em üIC
II e III e carcinomas
Š Atualmente, a técnica mais sensível para
detecção do HPV é a Reação de Polimerização
em Cadeia (PCR) amplificação do DüA viral
Š Para tipagem dos produtos da amplificação,
podem se usar várias técnicas:
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Š Hibridização ›   
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Š Seqüenciamento e Enzimoimunoensaio
 Obje
 

Determinar a freqüência dos distintos genótipos

de HPV cervical em amostras de raspado de
células da cérvice uterina em um grupo de
mulheres com diagnóstico de üIC de baixo risco
e üIC de alto risco, mediante técnica combinada
de PCR ± RFLP.
 
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Š Raspado cervical de 55 mulheres da policlínica
de Patologia Cervical do Hospital Hernán
Henríquez Aravena de Temuco com diagnóstico
histopatológico de :
LBG ± displasia leve e signos morfológicos de infecção
por HPV
LAG ± displasia moderada, displasia intensa e
carcinoma  

Š O material cervical foi recolhido em 3 ml de
Buffer TE pH 7.4 (10mM Tris Cl, 1 mM EDTA
pH 8)
Š Extração do DüA: kit PuregeneTM DüA
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Š Confirmação da qualidade do DüA extraído:
amplificação de fragmento com 268pb do gene
da i - globina, usando os iniciadores PCO4 5¶ e
GH20 5¶
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458(
Š PCR L1, usando um par de iniciadores externos
MY09/MY11 e um par de iniciadores internos
GP5+/GP6+, que amplificam um fragmento de
450 e 150 pb.
Š Controle positivo: plasmídeos recombinantes para os
tipos de HPV 6,16 e 18.
Š Controle branco: água deionizada
Š Análise: eletroforese em gel de agarose a 2%, corado
com brometo de etídio
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9
 9 
Š O produto do PCR foi submetido a RFLP com
as enzimas Rsa I e Dde I, cujas seqüências
específicas de corte são GT/AC e C/TüAG ( ü
qualquer base nessa posição)
Š Incubação a 37ºC/14h
Š Os fragmentos digeridos foram submetidos a
eletroforese em gel de poliacrilamida a 10%
Š Para interpretar o polimorfismo dos fragmentos
digeridos, se confeccionou um padrão de
restrição para cada enzima
Š As sequências completas dos tipos mais
frequentes de HPV se obtiveram do Banco de
Genes (www.ncbi.nlm.nih.gov/taxonomy)
š&

cš '
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Š Dos 55 casos estudados, 15 correspondem a

lesões de baixo grau (üIC I) e 40 lesões de alto
grau (üICs II e III)
Š A idade das pacientes variou ente 18 e 77 anos,
com média de 38,5 anos
Š Duas foram i - globina negativas, portanto,
excluídas do estudo
 s em

V 01# 
 

V š02:
  45 
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 8(
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Š As freqüências observadas para os HPVs 16 e 18
são similares aos encontrados em estudos prévios
na região7,8 e o alto número de HPV de AR é
compatível à prevalência de casos de CCU que
apresenta a região de estudo
Š Os subtipos 16, 18, 52 e 53 foram os mais
encontrados tanto nas LBG, como nas LAG
Š üo presente estudo o HPV 16 foi o genótipo mais
freqüente, coincidindo com o encontrado no
Mexico24 e em outros países latinoamericanos25 - 28
Š üesse estudo, o genótipo 52 foi mais freqüente
nas LBG e o 16 nas LAG, seguido pelo HPV 18;
entretanto é conhecida diferenças geográficas
quanto à freqüência dos tipos de HPV:
Š Liaw, 
., na China, e Bayo, 
  na Ásia,
publicaram que os HPVs 52 e 58 eram os subtipos
mais prevalentes em LAG e carcinomas
Š Sasagawa, 
., observaram os tipos 11, 39, 42, 44,
53, 54 e 59, exclusivamente em LBG e não
encontraram os tipos 39, 53 e 59 que são
considerados de AR em LAG e carcinoma invasor
Š  

Š (


 determinar mais de 30 genótipos virais
anogenitais com uma única amplificação
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 não poder definir certos casos,
quando os genótipos associados apresentam-se em
infecções múltiplas, que freqüentemente produzem
padrões de restrição confusos
Š üesse trabalho, 10% das amostras apresentaram
padrões de restrição que não coincidem com os tipos
de HPV incluídos na tabela 1. (resultado esperado por
ter se trabalhado apenas com 2 enzimas)
Š üas infecções múltiplas (IM), o HPV tipo 18 foi
o mais freqüente seguido pelo tipo 59
Š A IM tem sido mencionada como um fator
comum entre mulheres jovens devido à
resistência imunológica, permitindo que uma
infecção por HPV persista37 e provocando maior
suscetibilidade a uma reinfecção37,38; entretanto
na literatura consta que não há aumento
significativo no risco de se desenvolver uma
üICV
Š 5 amostras de HPV não puderam se submeter à
restrição enzimática devido a escassa quantidade
de material amplificado
Š Estudos publicados têm concluído que o uso de
uma PCR______, usando os iniciadores
MY09/11 e GP5+/6+, pode aumentar
consideravelmente sua sensibilidade de 10 a 100
vezes, em comparação à PCR simples que usa
unicamente os iniciadores MY09/1140-42
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Š A utilização do PCR-RFLP para a detecção de

HPV em raspado da cervical foi excitante,
permitindo identificar nos pacientes genotipos
virais considerados epidemiologicamente mais
importantes;
Š Deve-se prestar atenção a outros genótipos, que
não o 16, que aparecem em menor freqüência
mais podem ter importância epidemiologia local
Š A alta freqüência de HPV de AR, em LBG e
LAG, surge como boa explicação para as altas
incidências de câncer na região IX;
Š Conhecer a freqüência e distribuição dos tipos
virais de HPV pode contribuir para medir a
efetividade de uma eventual vacina e ajudar a
racionalizar os recursos do programa nacional de
detecção de câncer de colo uterino.
 OBRIGADA!

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