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En la actualidad se ha notado una nueva tendencia un interés creciente de una nueva categoría
de sustancias para el cuidado de la salud y la industria cosmética, cuyo efecto se sustenta en
los beneficios, las investigaciones en el campo de las sustancias poliméricas a partir de
fuentes naturales. En la industria médico-farmacéutica y cosmética, muchos de estos
compuestos tienen numerosas aplicaciones tanto como sustancias auxiliares en la elaboración
de diferentes medicamentos, así como también desde el punto de vista terapéutico. Entre
estos materiales poliméricos se encuentra el ácido hialurónico (AH)
Existen dos grandes tendencias mundiales para el aislamiento de AH y otros polisacáridos
con actividad biológica que son la obtención de éste a partir de fuentes naturales como las
crestas de gallo, humor vítreo, el cordón umbilical humano, glándula submaxilar bovina, la
zona de maduración de los condrocitos y los métodos fermentativos empleando
microorganismos del género Streptococcus zooepidemicus. En el caso que se discute en esta
investigación, el problema principal radica en proponer una metodología para el
aprovechamiento de los humor vítreo del pescado en este caso de la especie Sarda
Chiliensis ,residuales, generados como subproducto de la elaboración de aceite y harina de
pescado. De esta forma, se contribuye al aprovechamiento de los residuales que constituyen
una línea importante de desarrollo, porque se hacen más eficientes los procesos y permite con
esto elaborar productos biomédicos y farmacéuticos más limpios
HIPOTESIS
• Dentro de la categoría de productos Anti-Age, aquellos que poseen Ácido hialurónico (HA) en su
formulación presentan un mercado creciente debido principalmente a las características .
• Actualmente el HA ha comenzado a utilizarse como un sustituto del bótox (toxina botulínica) debido
a que se encuentra naturalmente en la piel.
• Se busca en este proyecto realizar la extracción de ácido hialurónico (AH) a partir del
humor vitreo de los ojos de la especie Sarda Chiliensis (bonito)
MARCO TEÓRICO
• Alta higroscopicidad
• Naturaleza viscoelástica
• Alta biocompatibilidad
• no presenta inmunogenicidad
El HA es degradado in vivo, principalmente a través de la hidrólisis catalizada por las
enzimas hialuronidasas dando productos seguros. Se ha estimado que la vida media de
HA en la piel es de aproximadamente 24 horas, en el ojo 24- 36h, en el cartílago 1-3
semanas y en el humor vítreo 70 días (SCHIRALDI, et al., 2010).
Especificaciones
Las propiedades fisicoquímicas del
ácido hialurónico dependen del
tamaño de la molécula, ya que el
mismo puede ser muy variable.
METODOLOGÍA
Extracción química
Para realizar la extracción química de AH se siguió la metodología empleada por Lago (2005), para
lo que se pesaron 20 g de humor vítreo, se adicionaron 80 mL de NaCl al 0.2% y se dejó reposar
durante 15 minutos, se centrifugó (Eppendorf, modelo 5810R) a 4 000 rpm por 20 min a una
temperatura de 25 °C. El sobrenadante fue tratado con 6 mL de bromuro de hexadecil trimetil
amonio (CTAB) al 1% dejando reposar por 15 min, y se centrifugó 20 min a 4000 rpm y 25 °C. Al
precipitado se le agregaron 2.1 mL de CaCl 0.9 M y 1.23 mL de etanol acuoso, después se
centrifugó a 4000 rpm por 20 min, el sobrenadante se lavó con 0.6 mL de cloroformo durante
cuatro veces en un embudo de separación. Al volumen resultante se le agregó 5.1 mL de etanol y
5.1 mL de acetona. Se dejó reposar 12 h, después se centrifugó a 4000 rpm durante 20 min, se
recuperó el precipitado de cada tratamiento y se dejó secar en tubos Falcon de 50 mL durante una
semana en una campana de extracción a temperatura ambiente, finalmente el extracto fue
almacenado en refrigeración a 4 °C.
Extracción enzimática
Se tomaron 28 g de humor vítreo, se desengrasó con acetona 1:0.25 (g m/L -1) y se secó a 60 °C
durante 6 h, posteriormente se solubilizó (1:100, g m/L -1) en acetato de sodio 100 mM, pH 5.5,
EDTA 5 mM y cisteína 5 mM. Se añadieron 100 mg de papaína por gramo de humor vítreo seco, se
incubó 24 h a 60 °C a 100 rpm. Posteriormente se puso a ebullición durante 10 min, centrifugó a
4000 rpm durante 15 min y se añadieron tres volúmenes de etanol saturado con acetato de sodio con
respecto al sobrenadante y se almacenó a 4 °C durante 24 h. El precipitado fue recuperado por
centrifugación a 4000 rpm durante 15 min, y secado a 60 °C durante 6 h (Volpi et al., 2005), el
extracto fue mantenido en tubos Falcon y refrigerado a 4 °C
Caracterización de ácido hialurónico: Identificación del ácido
hialurónico por electroforesis en gel de agarosa
• Según investigación bibliográfica el método más comúnmente aplicado es la digestión enzimática con
papaína, que ha demostrado ser eficiente para el aislamiento de GAG. Esto conduce a un rendimiento
específico, molecular peso y patrón de sulfatación de los aislados HA. La optimización de los métodos de
extracción actuales, así como el desarrollo de técnicas novedosas, es muy esencial para garantizar el
aislamiento eficiente de los polímeros bioactivos, con el objetivo de obtener alta pureza, utilizando métodos
naturales de bajo costo y hallar una técnica que consume menos tiempo.