UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

OBTENCIÓN DE ENZIMAS A PARTIR DEL ASPERGILLUS NIGGER

ENCONTRADO EN EL ARROZ COCIDO

Docente: Dra. Sonia Herrera Sánchez

Expositores:

• AMAO ASENCIOS, JACKELINE

• ARCE QUISPE, ROBINSON
• LOAYZA HUARACC, JESSY
• VISITACIÓN TORRES, MIRIAM
 PRESENTACIÓN DEL PROBLEMA DE IMVESTIGACION

Actualmente se vive una problemática La falta de consciencia de lo

que significa contaminar el ambiente y la preservación del mismo,
conlleva a que nuestros agricultores y todos quienes trabajan en el
quehacer de la comercialización del arroz, presten atención
únicamente al grano en sí; ya que el arroz es uno de los mayores
cultivos en el mundo que genera grandes cantidades de residuos de
difícil manejo adecuado.

El hecho de arrojarlo sin el menor cuidado de los ríos, se ha

convertido en nuestro saber agrícola. Es tan común observar dicho
patrón que se ha transformado en una cultura aceptada.

Perdiendo toda preocupación de lo que se desecha, ignorando por

completo las enormes propiedades y el útil reaprovechamiento que
se le podría dar al mismo.
Por tal motivo se debe dar otro uso al arroz cocido que no sea solo
desecharlo o quemarlo sino procesarlo y obtener enzimas caseras
que tienen gran cantidad de nutrientes para las tierras de cultivo y
alimento.
EN EL 2008:
 EN PERÚ, 2018:

Este documento fue elaborado con información suministrada por

el Ministerio de Agricultura y Riego (Minagri), el Ministerio de
Energía y Minas (MEM), así como la Superintendencia Nacional de
Aduanas y de Administración Tributaria (Sunat), entre otros.
 ¿Cómo utilizar o que tecnologías aplicar a los desechos del
Problema General arroz para la obtención de enzimas orgánicos, estimulantes y
bioenergía para los alimentos?

1. ¿Cuáles son las características físico- químicas y biológicas

de del arroz y como identificar a las enzimas?
2. ¿Cuáles son las condiciones operacionales en cada una de Problema Específicos
las etapas de la plataforma biotecnológica del arroz?
3. ¿Cuáles son las características físico-químicas-
microbiológicas de los productos obtenido?
Implementar un sistema de comercialización mediante el
uso eficiente de los desechos del arroz orientado al Objetivo General
sector publico y privado en el País.

Demostrar las diversas maneras en que se puede

Objetivo específicos potencializar el uso de enzimas encontrados enarroz
para generar nuevas fuentes de trabajo.
 JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA DE LA INVESTIGACIÓN

El Aspergillus Níger en un hongo que excreta una gran cantidad de

enzimas, además de crecer con gran rapidez, su biomasa en forma
de micelios resulta fácil de separar del cultivo, no produce toxinas
en la producción de enzimas y es uno de los más utilizados a nivel
industrial.
El arroz es uno de los componentes esenciales de la canasta básica
familiar en el Perú, siendo el cereal que predomina en la
preferencia de consumo, con un promedio total per cápita de 47.4
kilos al año, según resultados de la Encuesta Nacional de
Presupuestos Familiares 2008 - 2009, realizada del Instituto
Nacional de Estadística e Informática. Asimismo, es el primer
producto en área sembrada y cosechada, según señala el Instituto
Nacional de Innovación Agraria; habiendo registrado en el año
2013 un total de 395,651 hectáreas de área sembrada y 3´050,934
Toneladas de producción, con un rendimiento de 7.7 toneladas
por hectárea de acuerdo al reporte de la Oficina de Estudios
Económicos y Estadísticos del Ministerio de Agricultura y Riego.
 Microbiología industrial

• Es la parte de la microbiología que se encarga de las

aplicaciones industriales que tienen los microorganismos.
Los que más se utilizan son levaduras, hongos
filamentosos y bacterias filamentosas, ya que estas son
más fáciles de separar del medio de cultivo, se
sedimentan más rápido e incluso son más fáciles de filtrar.
Esta clase de microorganismos son muy apreciados ya
que elaboran sustancias que no se producen de manera
fácil o más barata
• Son utilizados para la modificación de las propiedades de
alimentos, la producción de bebidas alcohólicas y la
participación en transformaciones químicas
  Levaduras
• Son organismos unicelulares,
generalmente ovoides, esféricos y
elipsoidales, las cuales se encuentran
ampliamente distribuidas en la
naturaleza. Se pueden reproducir de
forma asexual por gemación y
sexualmente por la formación de
ascosporas. Las levaduras pueden
crecer de forma anaerobia como
aerobia, por lo tanto son facultativas
Son los microorganismos más
importantes en la industria
Bacterias
• Son procariotas, es decir, no tienen
núcleo, ni orgánulos internos,
pueden ser esferas, alargadas o en
espiral, presentan una reproducción
asexual, normalmente por fisión
binaria o bipartición. Son muy
utilizadas en la industria, unas de las
que se tiene gran interés son las del
ácido acético, Gluconobacter y
Acetobacter, convierten el etanol en
ácido acético
Hongos filamentosos

• Los hongos filamentosos crecen con una estructura similar a hilos, llamadas
hifas, las cuales al unirse formar una masa llamada micelo. Se reproducen por
medio de esporas, pueden ser asexuales y sexuales, son aerobios y saprófilos,
es decir, se alimentan de materia orgánica en descomposición.

• En la industria son utilizados principalmente para la producción de ácidos

orgánicos (cítrico, láctico, glucónico) los hongos de las especies Aspergillus,
Rhizopus, Penicillium, enzimas comerciales (amilasas, glucoamilasas,
proteasas, pectinasas), hongos Aspergillus y Rhizopus, quesos especiales
(camembert, roquefort) los hongos Penicillium
Obtención y producción de enzimas

• Las enzimas pueden ser de origen animal, vegetal y microbiano. La

elección de la fuente será de acuerdo al tipo de enzima que se quiera
obtener, como su estabilidad, especificidad, costo y abundancia de la
misma, ya que hay una gran variedad de microorganismos con
disponibilidad continua. Las enzimas microbianas se pueden producir
a gran escala, una enzima producida por medio de microorganismos
es conocida como GRAS (Generalmente reconocido como seguro). En
la industria se utiliza solo el 8% de enzimas de origen animal y el 4%
de origen vegetal, mientras que la mayoría son de origen microbiano
(bacterias, levaduras y hongos filamentosos)
Obtención y producción de enzimas
Métodos de producción de enzimas microbianas

• La producción de enzimas se puede realizar

por medio de la fermentación, este proceso
se lleva a cabo en un recipiente, fermentador
o biorreactor, utilizando determinados
sustratos que componen un medio de
cultivo, son transformados por acción
microbiana en metabolitos y biomasa, este
tipo de fermentación puede ser en estado
sólido o sumergido, siendo la primera más
eficiente
Fermentación en estado sólido

• La fermentación en estado sólido (FES) se define como un proceso

fermentativo desarrollado para la producción de enzimas,
metabolitos y esporas. Para este proceso se utiliza un sustrato inerte
como soporte sólido (residuos agrícolas), el cual debe tener humedad
suficiente para apoyar el crecimiento y el metabolismo del
microorganismo, empleando una fuente de nitrógeno y nutrientes,
bajo control de las variables de procesamiento: pH, temperatura,
humedad y aireación
• La FES tiene ciertas ventajas, es un proceso que puede realizarse a
partir de medios de cultivo relativamente simples, ya que
generalmente un único sustrato puede proporcionar casi todos los
nutrientes necesarios
 Variables de fermentación
Microorganismos

• Hay algunos microorganismos que tienen más requerimientos

que otros, por lo que no se pueden utilizar todos, las
bacterias necesitan una elevada cantidad de agua por lo que
solo pueden crecer en medios líquidos (fermentación
sumergida), las levaduras no son tan estrictas, pero su
utilización es mínima en este tipo de fermentación, en
cambio los hongos son capaces de crecer en este medio,
tienen capacidad de adherencia, penetración en el sustrato y
facultad de utilizar mezclas de algunos polisacáridos. Además
deben de poder crecer en altas concentraciones de
nutrientes
 Sustrato Temperatura

• Los sustratos deben ser

• Los hongos crecen a
insolubles en agua, tener un
temperatura 20-45°C, a
elevado contenido de
elevadas temperaturas
carbohidratos y proteínas.
inhiben la germinación de
Además de ser fermentables por
esporas y la formación del
un solo microorganismo, su
producto, la temperatura
estructura debe facilitar la
óptima variará de acuerdo al
adhesión y penetración del
microorganismo y al tiempo
microorganismo, no tener
de fermentación
preferencia por la aglomeración
para evitar la formación de
masas. Por estas razones se
utiliza los granos de cereales
como sustratos sólidos
 Productos de arroz
PH fermentados.

• Los hongos se • Se preparan varios vinos de

desarrollan a un pH arroz glutinoso fermentando
de 3 - 4,5, durante la arroz elaborado cocido al
fermentación el pH vapor con hongos y una
tiende a mantenerse levadura. Se produce primero
un producto dulce, que luego
estable, por lo que se convierte en alcohol a
solo se necesita un medida que avanza la
ajuste inicial del fermentación. El líquido se
mismo elimina por decantación.
Ejemplo de estos vinos son el
lao-chao chino
 PRUEBAS EXPERIMENTALES
En esta etapa se procedió a realizar las pruebas experimentales
para obtener la enzima a partir del hongo que crece en el arroz
a) Descripción del proceso de inoculación de cocido humidificado.
X Níger)
microorganismos silvestres (Aspergillus
Extraer y humidificar con 100ml
de agua
Recepción del arroz cocido

Pesar 100 gr de Salvado de trigo

Humidificación y Sellado
Humidificar con 100 ml de agua caliente
Sembrado (5-6) días
Inoculado S
O
L
Inocular por 3 días Licuado y Centrifugado I
D
O
Refrigerado hasta 7ºC
b) Activación de la enzima originada por el hongo Aspergillus
Níger MUESTRA LÍQUIDA
Hasta saturación REFRIGERADA
Agregar (NH4)2S04
L
Í
Centrifugar Q
U
Humidificar con 300 ml de agua + I
almidón D
O

Mezclar con CH3COONa + H3PO4

MUESTRA LISTA
PARA HIDROLIZAR
b) Activación de la enzima originada por el hongo Aspergillus
Níger MUESTRA LÍQUIDA
Hasta saturación REFRIGERADA
Agregar (NH4)2S04
L
Í
Centrifugar Q
U
Humidificar con 300 ml de agua + I
almidón D
O

Mezclar con CH3COONa + H3PO4

MUESTRA LISTA
PARA HIDROLIZAR
 c) Hidrólisis de la enzima originada por el hongo Aspergillus
Níger

 Calentamos la enzima controlando que no pase los 60ºC

 Hacemos la prueba de Lugol que consiste en agregar una
gota de la muestra y mezclar con Reactivo de Lugol, si tiñe
azul debemos seguir calentando hasta que tiña de un color
marrón. Este color indica que la enzima la esta hidrolizada
 
 RESULTADOS

 Obtención de la enzima como producto final

 Pruebas para la hidrolisis del almidón
 DISCUSIÓN

 Con procedimientos logrados y resultados obtenidos se logró

investigar sobre qué tipo de enzima se pudo obtener
AMG – Amiloglucosidasa
-amilasa
 Basando en las observaciones del procedimiento y crecimiento
en los matraces, el aumento de almidón no afectara el
crecimiento de la biomasa.
 En el proceso de Fermentación el salvado de trigo es buena
fuentes de carbono y nitrógeno para la producción de Aspergillus
Níger.
 CONCLUSIONES

• Se pudo obtener el Aspergillus Níger mediante el arroz humidificado

• Se logró obtener enzimas producidas por el Aspergillus Níger
• Se logró tener medios necesarios para la producción de enzimas como el PH y
temperatura
• Se logra el proceso Salting out.
• El almidón que utilizamos en laboratorio es muy resistente a la hidrolisis
enzimática que se empleó en nuestro trabajo de investigación
CONCLUSIÓN
 RECOMENDACIONES

• Al momento de querer producir el Aspergillus Níger con nuestro Arroz

humedecido será más productivo que se coloque en arboles de pino ya que
tendrán mejor producción de este Hongo
• El reactivo Sulfato de amonio para la sobresaturación tiene que ser un reactivo
QP para su mayor efectividad y así el proceso de solvatación sea completo.
• Se debe congelar después del centrifugado y después de agregar nuestra Sal
(sulfato de Amonio)
• Usar otro tipo de almidón para que las pruebas tengan una mejor visión de la
hidrolisis del Almidón.
ANEXOS