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GC/MS

Cómo optimizar su GC-MS:

La Columna

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GC/MS

Tres Áreas Importantes

1.Introducción de Muestra 3.Espectrómetro de Masas

2. Columna

2
GC/MS

Seleccione la Columna que:


¡Ofrezca la separación adecuada!

Y, además tenga:
• Bajo sangrado
• Temperaturas máximas
• Inercia máxima
• Resistencia a la degradación química, al
aire y al agua

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GC/MS

Selección de la Columna

• Longitud - 30m (metros)

• Diámetro Interno Columna - 0.25mm

• Espesor de Film - 0.25µm - df

• Fase Estacionaria 5% Fenil


¡Éstos son buenos puntos de partida!

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GC/MS

Efecto de la Longitud

¡Una Columna corta es mejor!


Doblar la longitud
• Mejora la eficacia un 40% pero dobla el tiempo
de análisis
• Disminuye la Sensibilidad (ensanchamiento)
• Aumenta el sangrado
• Reduce la inercia

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GC/MS

Efecto de la Longitud
R (Factor Resolución) = 2.05
3.7 min

15 metros
R = 2.91
7.5 min
+100%
30 metros
R = 4.15
15.3 min
+100%
60 metros

20 min
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GC/MS

Efecto del Diámetro de la Columna


A menor diámetro,
análisis más rápido

• El DI más usual es 0.25mm ó 0.32mm;


Un DI de 0.25mm resulta el más adecuado para la mayoría
de los GC/MS de Laboratorio

• Las columnas con DI de 0.53mm pueden tener mayores


espesores de film y, por tanto, mayor capacidad de carga

• No existe prácticamente diferencias entre columnas de DI


de 0.22mm y 0.25mm

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GC/MS

Las Columnas ‘Rápidas’

• Son columnas con DI de 0.1mm a 0.18mm


• Mejoran la velocidad del análisis
• Tienen baja capacidad de carga
• Difíciles de usar en GC/MS:
- tamaño del pico / caudal de portador

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GC/MS

Efecto del Diámetro de la Columna


R = 1.63
0.25 mm ID
DI Estándar

10 min
+25%

R = 4.00
+250%
0.1 mm ID

10 min
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GC/MS

Efecto del Diámetro de la Columna

Análisis de PAH’s

0.25mm, 25m
t=25’

0.10mm, 10m
t=12’

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GC/MS

Efecto del Espesor de Film

Aumentar el Espesor de Film aumenta la


Retención y mejora la resolución de los
Compuestos Volátiles
• Film Mayor = Mayor Retencióm
• Doblar el Espesor de Film aumenta la
Temperatura de Elución entre 15 y 20ºC en
Isoterma

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GC/MS

Efecto del Espesor de Film


R = 3.14
4.7 min

0.25 µm

R = 3.60
7.4 min

+58% 0.50 µm

R = 4.96
13.2 min
1.0 µm
+180%

20 min
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GC/MS

La Relación de Fase (Beta)


• Beta () = ID / 4 df
  < 100 Columna para Volátiles
0.32 mm ID x 1.8mm = 44
   250 Columna General
0.25 mm ID x 0.25mm = 250
  > 400 Columna para Altas Masas
0.53 mm ID x 0.1mm = 1325

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GC/MS

Efecto del Tipo de Fase


Los Solutos eluyen de Fases no-polares según el
Punto de Ebullición
Los Solutos eluyen de Fases polares según la
Polaridad
BPX624
BP624 BP21(FFAP)

BP5 HT5 Cydex B BPX35

BP225

Mayor Polaridad
HT8 BPX50
BP1
BPX70
BPX1
SolGel-1ms BPX10
BPX5 BP20
BP10 SolGel-WAX 14
GC/MS

Efecto del Tipo de Fase

• Siempre que sea posible seleccione


una fase no-polar, como SolGel-1ms
o 5% Fenil (BPX5)
• En general, a mayor polaridad del
compuesto mayor el ‘número’ de la
columna

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GC/MS

Columnas según la Aplicación

1 Uso General

2 Columnas Especiales

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GC/MS

Columnas de Uso General

A. Columnas 100% Metil

B. Columnas 5% Fenil / 95% Metil

C. Columnas Wax

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GC/MS

A. Columnas 100% Metil


• Separan hidrocarburos, aromáticos,
pesticidas, fenoles, herbicidas y aminas
• Separan básicamente según el Punto de
Ebullición

Algunas Marcas: SolGel-1ms, BPX1, BP1, DB-1, HP-1, HP-1MS,


HP-Ultra 1, Rtx-1, CP-SIL 5CB, CP-SIL 5CB-MS, SPB-1, OV-1,
PE-1, 007-1(MS), SP-2100, SE-30, ZB-1

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GC/MS

A. Columnas 100% Metil


EJEMPLO: US EPA 8270 Semi-volatiles mix
Componentes
1
1. Fenol
2. Naftaleno
3. Dibutil Ftalate

2 SolGel-1ms

4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00

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GC/MS

B. Columnas 5% Fenil / 95% Metil

• Fases 5% Fenil polisiloxano : la columna


más corriente de uso general

Algunas marcas: BPX5, BP5, DB-5MS, HP-5MS, HP-5TA, XTI-5,


CP-SIL 8CBms, MDN-5SDB-5, HP-5, HP-5MS, HP-Ultra 2, Rtx-
5, Rtx-5MS, CP-SIL 8CB, SPB-5, PTE-5, OV-5, PE-5, 007-2(MS),
ZB-5

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GC/MS

B. Columnas 5% Fenil / 95% Metil


EJEMPLOS: Columna BPX5
8 9 Componentes
6
1. Metronidazol
10
2. Amilobarbitona
7 3. Pentobarbitona
4. Cafeíne
23 5 5. Difenhidramina
4 6. Trimipramina
1 7. Fenitoina
8. Diazepam
9. Nordiazepam
10. Difenoxilato
10 17
18

15

11 21 Aceite de Lavanda
3

14 20
1 6 23
16
8 9 13 19
2 4
7 22
5 12
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GC/MS

B. Columnas Wax
• Fase Polietilén glicol
• Separa: alcoholes, ácidos libres, ésteres
metílicos de ácidos grasos, aromáticos,
solventes, aceites esenciales
• Separa básicamente según Polaridad
Algunas Marcas: SolGel-WAX™, BP20, DB-WAX, DB-WAXetr,
SUPLECOWAX 10, HP-20M, HP-Innowax, STABILWAX, 007-CW,
CP-WAX 52CB, PE-CW, Rtx-WAX, ZB-WAX

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GC/MS

B. Columnas Wax
EJEMPLO: Alcoholes 12
2

1 11
Propylene glycol
7
3 6
4 9

10
5
8

22 min
SolGel-WAX

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GC/MS

Columnas según la Aplicación

1 Uso General

2 Columnas Especiales

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GC/MS

Columnas Especiales

A. Columnas de Polaridad media


B. Columnas FFAP
C. Columnas para Volátiles
D. Columnas para FAME’s
E. Columnas de Alta Temperatura
F. Columnas Quirales

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GC/MS

A. Columnas de Polaridad media

• Columnas 14% Cianopropil: BP10, BPX10,


DB1701
• Columnas 35% Fenil: BPX35, DB35
• Columnas 50% Fenil: BPX50, DB17
• Columnas de confirmación, ambientales,
farmacéuticas
• Columnas de Alta Temperatura Máxima

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GC/MS

B. Columnas FFAP
(Free Fatty Acid Phase)

Diseñadas específicamente para:


• Análisis de ácidos libres volátiles
• Alcoholes
• Acrilatos
• Cetonas
• Aldehídos

Algunas Marcas: BP21, DB-FFAP

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GC/MS

C. Columnas para Volátiles

• Específicamente diseñadas para US EPA 624


y 502.2 “Volátiles en Agua Potable”

• Usualmente de película gruesa

• Temperatuta Máxima relativamente baja

Algunas Marcas: BP624, BPX624, DB624

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GC/MS

D. Columnas para FAME’s


(Fatty Acid Methyl Esters)

• Específicamente diseñadas para el análisis


de FAME’s

• Columnas de Alta Polaridad


O
C20:53
Me O

Algunas Marcas: BPX70, BP225, DB225, DB23

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GC/MS

E. Columnas de Alta Temperatura


• Fase única de tipo carborano diseñada
específicamente para análisis de PCB’s y
aplicaciones de Destilación Simulada

• Baja Polaridad

• Alta temperatura Máxima (480°C)

Algunas Marcas: HT5, HT8

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GC/MS

E. Columnas de Alta Temperatura

HT5 Destilación Simulada


(no-polar)
5% Fenil policarborano siloxano (equiv.)

HT8 (ligeramente polar)


Análisis de PCB’s
8% Fenil policarborano siloxano (equiv.)

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GC/MS

F. Columnas Quirales

• La -Ciclodextrina incorporada a la fase


para obtener selectividad quiral

• Temperatura Máxima Baja

Algunas Marcas: Cydex-B, Cyclodex-B

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GC/MS

Acondicionamiento y Uso
Definiciones

• Temperatura Mínima
• Temperatura Máxima
• Bajo Sangrado
• Inercia de la Columna (Baja Actividad)
• Resistencia a la degradación química, por el aire
ó el agua

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GC/MS

Temperatura Mínima

• Temperatura Mínima de funcionamiento


de la columna
• Por debajo de esta temperatura los picos
eluyen anchos y asimétricos
• Motivo - La Fase está en Fase Sólida

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GC/MS

Temperatura Máxima

Se definen dos temperaturas


• En Isoterma
La 1ra Temperatura Indicada y Menor
• En Programación de Temperatura
La Mayor Temperatura Indicada (MAOT)

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GC/MS

¿Qué es el Sangrado de la Columna?


Es la Señal de Fondo generada por la Fase
Estacionaria de la Columna

Perfil de Sangrado de columnas 100% Metilpolisiloxano

360°C Columna B 100% metil

340°C
320°C BP1
SolGel-1ms

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GC/MS

¿Qué NO es Sangrado de Columna?

• Alto Sangrado a Bajas Temperaturas

• Picos Discretos

• Oscilaciones ó deriva de la línea de base a


cualquier temperatura

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GC/MS

Bajo Sangrado...¿Para qué?

• Menor mantenimiento del detector


• Mayor duración de la columna
• Mejor sensibilidad, especialmente a altas
temperaturas
• Los picos se integran mal en la zona de
alto sangrado

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GC/MS

Efectos del Sangrado

Cuantificación
Difícil Alto
Sangrado
7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

Cuantificación Bajo
más Fácil Sangrado

6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00

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GC/MS

Baja Relación Señal/Ruido

Menor Relación Señal/Ruido

5 ppm en
columna

6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00

40
GC/MS

Alta Relación Señal/Ruido

Mayor Relación Señal/Ruido

5 ppm en
columna

4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00

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GC/MS

Las Columnas Capilares y el Aire


Según el tipo de soluto que se analice, los efectos
de la oxidación del aire en una columna se observa
generalemente como:
1. Incremento en los niveles de sangrado, ó
2. Incremento en la actividad de la columna
(adsorción, absorción), ó
3. Pérdida del soluto

El Aire es, generalemente, el enemigo


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GC/MS

Fuentes de entrada de aire en el


• Pérdida de portador
• Sistema de suministro con fugas
• Operadores inexpertos
• Cambio de Botellas
• Grandes inyecciones de aire
• Gas de baja calidad
• Pérdidas por la membrana
• Juntas que pierden

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GC/MS

Selección del Gas Portador


Hidrógeno

VENTAJAS DESVENTAJAS
• Barato • Puede crear mezclas
explosivas con el aire
• Ofrece la
separación más • Algunas industrias en
rápida algunos paises no lo
autorizan
• Buena eficacia a
altas velocidades • Es un gas reductor
como 60 cm/sec • No debería usarse con
GC/MS
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GC/MS

Selección del Gas Portador


Helio

VENTAJAS DESVENTAJAS
• Muy Inerte, no • Caro
reacciona con los
• Recurso no renovable
analitos
• Ofrece una
separación rápida
• No es inflamable

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GC/MS

Selección del Gas Portador


Nitrógeno

DESVENTAJAS
VENTAJAS
• Análisis muy lentos para
• Muy Inerte, no
obtener una buena eficacia
reacciona con los
analitos
• Barato
• No es inflamable

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GC/MS

Selección del Caudal Óptimo


Velocidades Óptimas
70
Hidrógeno 60-70 cm/sec
60
50
40
30 Helio 30 - 35 cm/sec

20
Nitrógeno 10 - 20 cm/sec
10
0
cm/sec 47
GC/MS

Selección del Caudal Óptimo


Presión Entrada Constante: 10 psig

Helio
R = 4.36

-100%

R = 4.43 Hidrógeno
20 min
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