ESPECTROSCOPIA

ULTRAVIOLETA VISIBLE

Mg. Neptali Ale Borja

naleb@unmsm.edu.pe
nalebunmsm@gmail.com

Setiembre 2018
 ESPECTRO ELECTROMAGNETICO

Tal y como podemos imaginar dicho efecto

dependerá de la energía de dicha radiación
ESPECTRO ELECTROMAGNETICO
COMPORTAMIENTO DE LA MATERIA AL
SOMETERSE A RADIACIÓN

RADIACION EFECTO

Rayos X y cósmicos Ionizaciones de las moléculas

UV-Visible Transiciones electrónicas entre los orbítales

atómicos y moleculares

Infrarrojo Deformación de los enlaces químicos

Microondas Rotaciones de los enlaces químicos

Radiofrecuencias Transiciones de spín electrónico o nuclear en los

átomos de la molécula.
 COMPORTAMIENTO DE LA MATERIA AL
SOMETERSE A RADIACIÓN

 Cuando la radiación incide sobre una sustancia no toda ella se ve

afectada por la misma; al átomo o conjunto de átomos que
absorben radiación se le denomina cromóforo. Cada técnica
espectroscópica será distinto dentro de una misma molécula.

 Grupos de átomos enlazados responsables de la absorción

electrónica o de la absorción en el ultravioleta o visible. Algunos
autores consideran como grupo cromóforo solamente sistemas con
enlaces insaturados por ejemplo, C=C, C=O , NO2 , anillo
bencénico
 COMPORTAMIENTO DE LA MATERIA AL
SOMETERSE A RADIACIÓN

 En las moléculas existen también átomos o grupos de átomos que

no absorben radiación, pero hacen que se modifique alguna de
las características de la absorción del cromóforo, se denominan a
tales grupos auxocromos. Ej. grupos OH, NH2 y halógenos.

 Efecto o desplazamiento batocrómico: Cuando la longitud de onda

de absorción de una sustancia se desplaza hacia longitudes de
onda más grandes o de menor energía por efecto del solvente o
por sustituyentes; también se conoce como corrimiento hacia el
rojo.
 COMPORTAMIENTO DE LA MATERIA AL
SOMETERSE A RADIACIÓN

 Efecto o desplazamiento hipsocrómico o corrimiento hacia el azul,

cuando la longitud de onda de absorción de una sustancia se
desplaza hacia longitudes de onda menores o de mayor energía por
efecto del solvente o por sustituyentes.

 Efecto hipercrómico: El incremento en la intensidad de la

absorción es decir un aumento en la magnitud del coeficiente de
absortividad molar para una longitud de onda dada, por efecto del
solvente o de sustituyentes.
 COMPORTAMIENTO DE LA MATERIA AL
SOMETERSE A RADIACIÓN

 Efecto hipocrómico: Disminución en la intensidad de la

absorción es decir disminución en la magnitud del coeficiente de
absortividad molar para una longitud de onda dada, por efecto del
solvente o de sustituyentes.
 CARACTERÍSTICAS IMPORTANTES DE
MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS
TÉCNICA
INFORMACIÓN OBTENIDA
ESPECTROSCÓPICA
Estructura total de la molécula incluida la
Rayos X estereoquímica de la misma a partir de las posiciones
relativas de los átomos.
Existencia de cromóforos y/o conjugación en la
Ultravioleta-Visible
molécula a partir de las absorciones observadas.
Grupos funcionales a partir de las absorciones
Infrarrojo
observadas.
Formula molecular y subestructuras a partir de los
Espectrometría de masas (*)
iones observados.
Grupos funcionales, subestructuras, conectividades,
Resonancia magnética estereoquímica, etc… a partir de datos de
nuclear desplazamiento químico, áreas de los picos y
constantes de acoplamiento observadas.
(*) No es una técnica espectroscópica en el sentido que estamos viendo pues no existe irradiación
electromagnética de la sustancia y no se produce absorción de dicha radiación
 ¿Que técnica utilizar ?
Dependerá en gran medida de los objetivos perseguidos. De una
manera general podemos indicar como objetivos sucesivos los
siguientes:

•Fórmula molecular.
•Identidad de los grupos funcionales.
•Conectividades de los carbonos.
•Posicionamiento de los sustituyentes y/o los grupos funcionales
sobre el esqueleto carbonado (Obtención de subestructuras).
•Propiedades estereoquímicas incluyendo tanto los aspectos estáticos
como dinámicos.
ELUCIDACIÓN DE LA ESTEREOQUÍMICA DE
LA MOLÉCULA

De acuerdo a la disposición espacial de los átomos :

• Composición: átomos presentes y su proporción en la molécula, lo

que se traduce en la obtención de una formula molecular.

• Constitución: Uniones existentes entre los átomos, lo que se traduce

en la determinación de los grupos funcionales y subestructuras
presentes en la misma.

• Configuración: disposición espacial de los átomos en la molécula.

• Conformación: disposición espacial de la molécula que surge

debido a la posibilidad de rotación o giro de los enlaces simples en
la misma.
ESPECTRO ELECTROMAGNETICO
ESPECTRO ELECTROMAGNETICO
ESPECTRO ELECTROMAGNETICO

La energía asociada  radiación electromagnética

E = hv
E = energía (Joules)
H = constante de Planck (6.62 x10 34 Js)
V = Frecuencia ( seg)
 LONGITUD DE ONDA Y FRECUENCIA

Radiación Electromagnética  Combinación de campos magnéticos y

alternativamente eléctricos que viajan a traves del espacio con un
movimiento de onda

La radiación actúa también como una onda, clasificándose en términos

como otra longitud de onda o frecuencia:
v=c/λ
LONGITUD DE ONDA Y FRECUENCIA

v=c/λ

v = Frecuencia ( Seg)
C = Velocidad de la luz (3 x 10 8 ms-1)
λ = Longitud de onda ( m)
 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

• Cuando la radiación interactúa con la materia ocurren procesos

como: reflexión, disipación, absorbancia,
fluorescencia/fosforescencia (absorción y reemisión) y reacciones
fotoquímicas (absorbancia y ruptura de bandas).

• Cuando se mide un espectro UV/VIS, se quiere que ocurra una

absorbancia.
 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

• Luz  Forma de energía.

• Absorción de la luz por la materia causa el contenido de la energía
de las moléculas. (o átomos) a incrementarse.
• Total de la energía potencial de una molécula es representado por
las sumatorias :

E total : E electrónica + E vibracional + E rotacional

 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

• La cantidad de energía que posee una molécula en cada forma es

no continua para una seria de niveles o estados discretos.

E electrónica > E vibracional > E rotacional

 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

• En algunas moléculas y átomos

los fotones de la luz UV/VIS
tienen suficiente energía para
causar transiciones entre los
diferentes niveles de energía
electrónicos.

• La longitud de onda de luz

absorbida puede requerir un
movimiento de electrón de un
estado o nivel bajo a uno mayor
de energía.
 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

• La transiciones pueden
resultar en bandas de
absorbancia estrechas a
long. de onda altamente
características de las
diferencias en niveles de
energía de las especies
absorbidas.
 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

• Para moléculas, los

niveles de energía
rotacional y vibracional
son super impuestos en
los niveles de energía
electrónica.

• Muchas transiciones con

diferente energía
ocurren. Bandas se
ensanchan. ( > en
soluciones sto –ste
(Interacción)
 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

Cuando la luz pasa a

través de una muestra o
es reflejada en ella, la
cantidad de luz
absorbida es la
diferencia entre
radiación incidente Io y
la radiación
transmitida It
 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA
Estas relaciones se conocen como la ley de Bourguer-Lambert-Beer
o ley general de la espectrofotometría que permite hallar la
concentración de una especie química a partir de la medida de la
intensidad de luz absorbida por la muestra.

Esta ley se puede expresar en términos de potencia de luz o de

intensidad de luz, asumiendo luz monocromática, como:

It / I0 = 10 -e bc
 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

It / I0 = 10 -e bc

It = Intensidad de luz transmitida por la muestra.

I0 = intensidad de luz que incide sobre la muestra y que proviene
de la fuente.
e = Coeficiente de absortividad molar (M-1cm-1)
b = Longitud de la trayectoria del haz de luz a través de la
muestra o el espesor de la celda en centímetros o lo que se
conoce como paso óptico.
c = Concentración de la muestra
It / I0 = Transmitancia ( T )
 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

% T = 100.It / I0

La luz absorbida = I0 - It despues de pasar a través de la muestra.

Expresando en % en función de la transmitancia medida:

% absorción = (Tblanco - Tmuestra. ) x 100 o absorbancia.

-log It / I0 = - log T o igual que log I0 /It = logI0 - logIt

La relación -log It / I0 = - log T = Absorbancia (A )

 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

La ley de Bourguer-Lambert-Beer se puede entonces escribir de las

siguientes formas:

It / I0 = 10 -e bc , - log T = e b C , -log T = A = e b C

C = Concentración del soluto en moles / litro solución

e = cte coeficiente de absortividad molar cm-1 litro /mol
(función de la longitud de onda, del índice de refracción
de la solución y es característico de cada sistema soluto-
solvente)
b = Longitud del paso de luz (cm )

“Absorbancia es adimensional ”
 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA
Desconociendo el peso molecular de la sustancia la ley de Beer se
puede expresar como

A=abC,

a = Coeficiente de absortividad g/L o g/100mL

Registro de la variación del coeficiente de absortividad molar e , o de

la absorbancia A, o de la transmitancia T,  función de la longitud de
onda " espectro " o curva espectral de una sustancia química 
indicando características de absorción con relación a la longitud de
onda.
DERIVATIZACION DE ESPECTROS

Espectro expresa A  f (λ) Orden Cero

dA
---- = f´(λ) Primer Orden
dλ

d2A
---- = f´(λ) Segundo Orden
d2λ
EFECTOS DE DERIVATIZACION
 EFECTOS DE DERIVATIZACION

 Cambio de
absorbancia.

 Comienza y termina en
cero, pasando a través
de cero a la misma λmax
de la banda.

 Banda y λmax positiva y

negativa.
 EFECTOS DE DERIVATIZACION

 Cambio de absorbancia.

 Comienza y termina en cero,

pasando a través de cero a
la misma λmax de la banda.

 Banda y λmax negativa y

positiva.
 EFECTOS DE DERIVATIZACION

 Banda Negativa.

 Dos bandas satelitales

positivas en cada lado de
la banda principal
 EFECTOS DE DERIVATIZACION

 Banda Positiva.

 Dos bandas satelitales

negativas en cada lado
de la banda principal
 APLICACIONES

 Los espectros derivados pueden ser usados para estimar

diferencias entre espectros.

 Resuelven superposiciones de bandas en análisis cualitativos

(Confirmaciones de identidad).

 Reducen efectos de interferencia, matriz u otros compuestos de

absorbancias en análisis cuantitativos
 CONFIRMACIONES DE IDENTIDAD

 Comparación de la
medida del espectro con
uno de referencia.

 Espectro es altamente
similar, se puede usar la
derivada espectral

 4ta derivada  centro

max que engloba λmax de
las bandas de los
componentes
 SEÑAL – RUIDO

 Está en función del proceso de derivatización con altos órdenes de

derivadas.

 La alta resolución de los espectros demanda una buena

reproducibilidad de long. de onda en el espectrofotómetro.

 Pequeños errores de long. de onda pueden detectarse las mayores

señales en el modo de la derivada que en el modo de la absorbancia.

 Efecto negativo de la derivatización demanda un bajo ruído en el

espectrofotómetro.

 Espectrofotómetro puede escanear y promediar espectros múltiples, la

S/R puede ser improvizada prioritariamente a derivar
SEÑAL – RUIDO
ANALISIS CUALITATIVO
 ANALISIS CUALITATIVO
 Los espectros UV/VIS muestran pocas bandas anchas de absorbancia
a comparación de la espectroscopía IR.

 La presencia de una banda de absorbancia a una λ dada es

indicadora de la presencia de un cromóforo, debido a la presencia de
enlaces  (bandas insaturadas).
ANALISIS CUALITATIVO
 ANALISIS CUALITATIVO
 La posición del máx. de abs. no es fijada, pero depende del
acercamiento molecular del el cromóforo y el solvente en el cual la
muestra puede ser disuelta.

 La ºT y el pH pueden causar cambios en el cromóforo y el solvente

variando la intensidad y la λ de la abs. máx.

 Bandas conjugadas (carotenoides, hidrocarburos).

 ANALISIS CUALITATIVO

 Transiciones iones metálicos tienen niveles de energía que absorben

de 400 – 700 nm región visible. Los compuestos de coordinación
también son aductos ácido-base y frecuentemente se llaman complejos
o si están cargados iones complejos unidos a grupos ligandos. Ej :

 Esmeralda  Color Verde Cr(III) en Be3Al2Si6O18;

 Amatistas  violetas  Fe(II), Fe(III) y Ti(IV) en Al2O3

 Rubíes  rojos por las trazas de Cr(III) en Al2O3,

 Sangre es roja por la presencia del grupo rojo heme -un compuesto de
coordinación con Fe(II)- en la hemoglobina.
 ANALISIS CUALITATIVO

 El color de los complejos o iones complejos de los metales de

transición o la ausencia de color depende de la estructura
electrónica del metal, su estado de oxidación y la naturaleza del
ligando. Por ejemplo, para algunos iones complejos conocidos:
 CONFIRMACIONES DE IDENTIDAD

 Comparación de la
medida del espectro
con uno de referencia.
 Espectro es altamente
similar, se puede usar
la derivada espectral
 4ta derivada  centro
max que engloba λmax
de las bandas de los
componentes
 COLOR
 Importante propiedad de la sustancia.
 Se relaciona con la absortividad y reflectividad.
 COLOR

 El ojo humano ve el color complementario al cual es absorbido

 INFORMACIONES ADICIONALES DE
ANALISIS CUALITATIVO
• Proteínas, ácido nucléicos y temperatura de fusión : Presencia de
ácidos amino aromáticos que al producirse calentamiento varía
su estado que lo rodea y produce cambios espectrales en dicha
molécula.
• Análisis de multicomponentes determinan cuanto hay de cada
ácidos amino aromático que está presente en una proteína
intacta.

ADNA = Aadenina + Aguanina + Acytocina + Atimina

 INFORMACIONES ADICIONALES DE
ANALISIS CUALITATIVO
• Actividad Enzimática .- Es una medida de eficiencia como un
catalizador.
• La concentración de la enzima en muestras impura  unidad /
ml, actividad específica de la preparación  unidades / mg
proteína
• Cuando la enzima es purificada , la actividad específica
incrementa al límite.
• Reacción varía con factores de pH, concentración,
temperatura (recomendable fijar 25, 30 y 37ºC), ionizaciones,
etc.
MODELO DE ENERGIA CINETICA
ANALISIS CUANTITATIVO
 LEY DE BEER

Si 100 fotones de luz ingresan a una celda y sólo 50 emergen

provenientes de otro lado, la transmitancia es 0.5 ó 50% .

Si esos 50 fotones luego pasan a través de una celda idéntica, sólo

25 emergerán y así en adelante.
TRANSMITANCIA Y CONCENTRACION LEY DE
BEER
TRANSMITANCIA Y LONG. DE PASO - LEY DE
BEER
ABSORBANCIA VS CONCENTRACION – LEY DE
BEER
CUANTIFICACIONES INDIRECTAS
 CUANTIFICACIONES INDIRECTAS

• Derivatizaciones Químicas.- Ej agregado de reactivo orgánico,

formando complejos con absortividades altas.

• Titulaciones espectrofotométricas .- Evalua el momento en el que

reaccionan cantidades equivalentes de un ácido con una base
(valoraciones ácido-base), de un oxidante con un reductor
(valoraciones redox), de un ion metálico con un ligando
(valoraciones de complejos), etc. , siendo la concentración de
una de las sustancias exactamente conocida.
 TITULACIONES ESPECTROFOTOMÉTRICAS

• Pto de equivalencia  indicadores, no son ciertos en el cambio

de color, debido a soluciones turbias, indicadores que pueden ser
interferentes en la reacción, analitos muy diluidos, mezclas de
varios analitos que no permiten la observación visual del punto
final, etc
 TITULACIONES ESPECTROFOTOMÉTRICAS

• Por medidas espectrofotométricas, considerando la reacción:

• Si el soluto, el titulante o el producto absorbe radiación, las

medidas de absorbancia a una longitud de onda fija, pueden
utilizarse para localizar el punto final de la titulación
 TITULACIONES ESPECTROFOTOMÉTRICAS
• Se construyen gráficas de absorbancia corregida de la especie
absorbente, A* vs Volumen de titulante, donde:

A* = [Aexperimental o leida x ( v inicial o de alicuota + vtitulante) /

vinicial o alicuota ]

• Las gráficas obtenidas constan de dos segmentos de rectas, uno

anterior y otro posterior al punto estequiométrico, que se extrapolan
y en el punto de intersección se localiza el punto final.
 TITULACIONES ESPECTROFOTOMÉTRICAS

• Las curvas de
titulación presentan
formas diferentes
dependiendo de la
especie absorbente
que se escoja para
seguir la titulación
y de si una o varias
especies son
absorbentes a la
longitud de onda
escogida.