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BIOREFINERÍA DE BIODIÉSEL: OPORTUNIDADES Y DESAFÍOS PARA LA PRODUCCIÓN

MICROBIANA DE COMBUSTIBLES Y PRODUCTOS QUÍMICOS A PARTIR DE RESIDUOS


DE GLICEROL
Se ha producido un exceso de glicerol crudo, su valor en el mercado se redujo y se está convirtiendo en un "flujo de
residuos" en lugar de un valioso "coproducto". El desarrollo de biorefinerías, es decirLa producción de productos
químicos y energía integrada con los procesos de conversión de biomasa en biocombustibles, se ha señalado como
una forma de lograr cadenas de producción económicamente viables, valorizar los residuos y coproductos, y reducir la
eliminación de residuos industriales.

Se han evaluado varias alternativas destinadas al uso de glicerol crudo para producir combustibles y productos
químicos por fermentación microbiana (1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, etanol, n-butanol, ácidos orgánicos, polioles
y otros)

La fermentación microbiana del glicerol representa una alternativa notable para agregar valor a la cadena de
producción de biodiesel que ayuda al desarrollo de biorefinerías, lo que permitirá que este biocombustible sea más
competitivo.
Introducción:

El biodiesel es un combustible alternativo que reduce los efectos netos de efecto invernadero y su uso se ha convertido en
obligatorio en muchos países. Se obtiene principalmente mediante la transesterificación de grasas y aceites vegetales en
presencia de un catalizador por un alcohol primario (generalmente metanol) que conduce a un éster metílico de ácido graso
(FAME), que se utiliza como biocombustible. Los aceites de girasol, colza, soja y palma son los principales sustratos para
producir biodiesel en todo el mundo, sin embargo, existen variaciones locales sobre cuál es la fuente principal. Europa sigue
siendo el mayor productor de biodiesel, mientras que Brasil tuvo el mayor aumento en la tasa de producción en los últimos
años en comparación con Estados Unidos y Europa.

La producción de biodiesel deja dos tipos principales de residuos, ¨pasteles¨ y glicerol crudo. ¨Los pasteles¨, que se
producen presionando palmas, semillas y otros para la extracción de aceite, generalmente se usan como alimento para
animales o como fertilizantes, lo que agrega valor a la cadena de producción de biodiesel. El glicerol crudo, que se deriva de
la reacción de transesterificación de grasas y aceites vegetales (triglicéridos) para producir biodiesel, contiene metanol, sales,
jabones y agua como contaminantes principales. La concentración y la presencia de cada contaminante variarán
drásticamente de una industria a otra, debido a una variedad de parámetros, que incluyen la fuente de petróleo y las
condiciones de reacción. Se espera que la presencia de estas impurezas en muestras de glicerol crudo no influya
negativamente en el proceso de bioconversión de este coproducto.

La producción de glicerol crudo sigue a la creciente producción de biodiesel, ya que la estequiometría de la reacción dicta
que por cada 10 toneladas de FAME, se forma 1 tonelada de glicerol crudo. Se espera que el desarrollo de biorefinerías
basadas en glicerol crudo favorezca la economía de la industria del biodiesel, al reducir los costos asociados con la
eliminación de residuos y aumentar la producción de productos químicos de valor agregado
Fermentación microbiana de glicerol

Debido a la naturaleza reducida de la molécula de glicerol, los microorganismos pueden convertirla en una serie de
metabolitos, con rendimientos similares a los obtenidos al usar azúcares como sustratos. Las levaduras y los hongos
filamentosos han sido probados principalmente aeróbicamente para la producción de ácidos orgánicos y polioles, bacterias
de las familias Enterobacteriaceae y Clostridiaceae, como Klebsiella Enterobacter, Clostridium , se ha probado en
condiciones anaeróbicas. Estas bacterias han sido evaluadas para la producción de diferentes productos químicos, incluidos
los alcoholes 1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, butanol y otros

Figura 2. Ejemplos de productos químicos producidos por fermentación


microbiana de glicerol crudo. Los círculos / posiciones indican las
condiciones de aerobiosis en las cuales estos químicos pueden ser
producidos por fermentación microbiana y los principales grupos
productores de microbios.
1,3-propanodiol: El 1,3-PDO se puede utilizar para la síntesis del moderno poli (tereftalato de polimetileno) (PTT) que a su
vez se puede utilizar para fabricar alfombras, fibras textiles especiales, monofilamentos, películas, y telas
no tejidas. PTT también se utiliza en el área de termoplásticos de ingeniería, polibutileno (PBT), se consume
principalmente en los sectores automotriz y electrónico

La PDO puede producirse fermentativamente con éxito a partir de glicerol por bacterias de las familias Enterobacteriaceae y
Clostridiaceae, principalmente Klebsiella spp. y Clostridium spp., respectivamente. Se necesitan dos vías para la conversión de glicerol a
1,3-PDO en condiciones anaerobias por Enterobacteriaceae.

Figura 3. Diferentes vías metabólicas para el metabolismo del glicerol. La producción


de 1,3-PDO por los miembros de la familia Enterobacteriaceae se muestra en rojo. La
producción de DHA por G. oxydans se muestra en azul. Rutas de producción de etanol
y formiato en la utilización fermentativa de glicerol por E. coli se muestran en gris. La
vía propuesta para la conversión de glicerol a ácido glicérico se muestra en verde. Las
líneas discontinuas indican múltiples pasos o enzimas desconocidas (vía GA). Los
principales productos se destacan en cuadros llenos de color. Abreviaturas: GLY,
glicerol; GLY-Dhd, GLY deshidrogenasa; DHA, dihidroxiacetona; DHA-Kin, DHA
quinasa; DHAP, fosfato de DHA; PYR, piruvato; GLY-Dht, GLY deshidratasa; 3HPA, 3-
hidroxiapropionaldehído; 1,3-PDO-Dhd, 1,3-PDO deshidrogenasa; GLY-DhdE, GLY-Dhd
unido a la membrana; GLY-Kin, GLY quinasa, G3P, glicerol 3-fosfato, G3P-Dhd, G3P
deshidrogenasa; PPP, vía pentosa fosfato; PFL, piruvato formiato-liasa; mAdh: alcohol
deshidrogenasa unida a la membrana.
El consumo de glicerol crudo y la producción de 1,3-PDO están influenciados por la pureza y la concentración del glicerol,
así como por las condiciones de fermentación  Por ejemplo, las concentraciones más altas de glicerol y las condiciones
microaerobias aumentan el consumo de sustrato y la productividad de 1,3-PDO, sin afectar el rendimiento de
fermentación. Se demostró que la adición de fumarato a bajas concentraciones ( es decir , 5 mM, equivalente a 2.9 g / L)
durante la fermentación de glicerol aumentó en un 35% el consumo de glicerol y las tasas de producción de 1,3-PDO sin
afectar el rendimiento del producto.

Productores nativos, principalmente K. pneumoniae, se ha intentado aumentar la producción de 1,3-PDO mediante la


sobreexpresión de genes directamente involucrados en la vía de biosíntesis de 1,3-PDO y la inactivación de genes
involucrados en la formación de subproductos 

Los productores no nativos, se ha construido una vía de biosíntesis de 1,3-PDO en bacterias y levaduras que no son
capaces de producir de forma natural 1,3-PDO por sobreexpresión heteróloga de genes de productores naturales. Entre
las cepas diseñadas,  K. pneumoniae y las cepas de E. coli parecen las más prometedoras.
2,3-butanodiol Se puede usar para producir plásticos, soluciones anticongelantes y preparaciones solventes. Además, se puede
(BDO): convertir en metil etil cetona (un aditivo de combustible líquido), 1,3-butadieno (utilizado para producir caucho
sintético), diacetil (un agente aromatizante) o en precursores de poliuretano (utilizado en la industria farmacéutica y
cosmética). se obtiene químicamente del petróleo; sin embargo, el desarrollo de una ruta de producción microbiana
basada en materias primas renovables es de interés. 

La fermentación de glicerol por varias cepas de Klebsiella spp. resultó en la producción de BDO. Sin embargo, el producto
principal de tales fermentaciones es 1,3-PDO, mientras que BDO es un producto menor junto con acetato, lactato, succinato
y etanol. K. pneumoniae G31 puede obtener BDO como un producto principal de la fermentación de glicerol.

Se demostró que la producción alternativa de BDO y ácido acético, el segundo metabolito más producido por K.
pneumoniae G31 estaba asociado con el autocontrol del pH; es decir, durante la fermentación, el microorganismo alterna la
producción de BDO y ácido acético para ajustar el pH de los cultivos. Además, la producción de BDO estuvo influenciada por
una composición y aireación medias. Cuando se optimizó la composición media, el régimen de aireación y el pH inicial de la
fermentación, la producción de BDO alcanzó 70 g / L, la concentración más alta obtenida de glicerol, con un rendimiento
máximo de 0,39 g / g de glicerol
Etanol:
Se usa principalmente como combustible para el transporte, pero también se puede utilizar en la industria como solvente e
intermediario químico. La producción mundial de etanol como combustible, basada principalmente en la fermentación por
levadura de la sacarosa de la caña de azúcar y el almidón de maíz. Además, el desarrollo de tecnologías para la producción de
etanol basadas en materias primas lignocelulósicas se ha evaluado intensamente.

Las bacterias de la familia Enterobacteriaceae y del género Clostridium pueden convertir el glicerol en etanol, sin embargo,
los rendimientos son relativamente bajos porque el etanol es solo un producto secundario de la fermentación, el principal
producto de la fermentación son 1,3-PDO o 2,3-butanodiol.

Recientemente se demostró que E. coli puede convertir el glicerol en etanol anaeróbicamente, así como también
aeróbicamente (Figura 3 ). Inicialmente, se demostró que E. coli es capaz de fermentar el glicerol anaeróbicamente de
manera dependiente del pH, lo que está relacionado con la disponibilidad de CO2 . La fermentación de glicerol se realiza en
condiciones ácidas (pH 6), sin embargo, se ve afectada en condiciones alcalinas (pH 8) porque la disponibilidad de CO2 se
reduce (es decir, la mayoría del CO2 se convierte en bicarbonato). Posteriormente, se lograron varias mejoras en la
producción de etanol y también de los coproductos hidrógeno y formiato mediante ingeniería genética .
La formación de subproductos se redujo en las cepas que producen etanol-hidrógeno y formiato de etanol por mutaciones
que inactivaron la fumarato reductasa (DfrdA) y la fosfato acetiltransferasa (Dpta). Para evitar la conversión de formiato a
CO2 y H2 , la cepa productora de etanol-formiato también contenía una mutación que inactivaba formiato-hidrógeno liasa
( DfdhF ).Finalmente, se obtuvieron altas tasas de utilización de glicerol y síntesis del producto por sobreexpresión
simultánea de glicerol deshidrogenasa ( gldA) y dihidroxiacetona quinasa ( dhaKLM ).

El rendimiento de la fermentación de estas cepas mejoró aún más mediante la eliminación de la producción de lactato
mediante la eliminación de ldhA , que codifica una lactato deshidrogenasa, seguido de la fermentación en condiciones
microaerobias. Se obtuvieron tasas de conversión de glicerol a etanol de hasta el 85% del máximo teórico en medio mineral
(el rendimiento teórico máximo es de 1 mol cada uno de H 2 y etanol por mol de glicerol fermentado).Estos resultados
resaltan el potencial para usar E. coli como huésped para la producción de etanol.

Una cepa de levadura recombinante de H. polymorpha que expresa los genes pdc y adhB , que codifican, respectivamente,


piruvato descarboxilasa y aldehído deshidrogenasa II, de Zymomonas mobilis exhibió un aumento de 3.3 veces en el
rendimiento de etanol a partir de la fermentación de glicerol en condiciones microaerobias. Sin embargo, la concentración
final de etanol obtenida todavía era muy baja, es decir , 2,74 g / L .
Butanol: Ha sido identificado como un combustible alternativo y como una plataforma química clave que puede convertirse
industrialmente en acrilatos, éteres y acetato de butilo, que a su vez se utilizan en pinturas, lacas y formulaciones de
resina.

El butanol ha sido producido por Clostridium spp. mediante la fermentación de azúcar por años. Clostridium


pasteurianum puede producir 1,3-PDO y butanol a través de la fermentación anaeróbica de glicerol. C. pasteurianum se
demostró que produce butanol cuando se cultiva en glicerol crudo, aunque los rendimientos y la productividad de
butanol en este sustrato fueron considerablemente menores que en glicerol. De hecho, los rendimientos fueron
aproximadamente un 20% más altos en glicerol que en glicerol crudo (de 0.36 g / ga 0.30 g / g (g de butanol / glicerol
consumido), mientras que el tiempo de fermentación fue 2.5 veces más largo ( es decir , 25 días en lugar de 10 días)

En glicerol crudo el rendimiento y la productividad reducidos en glicerol crudo pueden ser causados ​por contaminantes
en el glicerol crudo, que contenía aproximadamente 90–95% de glicerol, 5–10% de metanol y / o agua, y 3–5% de sulfato
de sodio. Estos resultados indican que C. pasteurianum puede usarse para producir butanol a partir de glicerol crudo
derivado de biodiesel para producir butanol, pero su aplicabilidad industrial inmediata es limitada debido a su lento
crecimiento y baja productividad de butanol.
Cetonas y ácidos orgánicos

Dihidroxiacetona fosfato (DHA):

El principal ingrediente activo en todos los productos para el cuidado de la piel bronceada. DHA también sirve como un
bloque de construcción versátil para la síntesis orgánica de una variedad de productos químicos finos. Se produce a través
de la fermentación oxidativa por Gluconobacter oxydans a través de una glicerol deshidrogenasa unida a la membrana
(GLY-DhdE).Esta parece ser la única reacción responsable de la síntesis de DHA y emplea oxígeno como el aceptor final de
equivalentes reducidos, sin la participación de NADH. 

Mientras que el DHA es producido por un GLY-DhdE, el crecimiento de G. oxydans en glicerol está garantizado por una vía
citoplasmática (Figura 3). La fermentación de G. oxydans de glicerol para la producción de dihidroxiacetona (DHA) es un
proceso utilizado en la industria, sin embargo, existen problemas relacionados con la producción microbiana de DHA
como el aumento de las concentraciones de glicerol inhibe la producción de DHA y el crecimiento bacteriano. Además, la
producción de ácido glicérico (GA) por alcohol deshidrogenasas unidas a la membrana (adhA) reduce la producción de
DHA.
Para superar estos problemas, se generó una cepa con AdhA interrumpida con capacidad mejorada para crecer en
una concentración más alta de glicerol (220 g / L) y para producir DHA en comparación con una cepa de tipo salvaje
(G. oxydans NBRC 12528). Mientras que la cepa de tipo salvaje produjo 38 g / L de DHA y 47 g / L GA cuando se
cultivó en 150 g / L de glicerol, el AdhAla cepa interrumpida produjo solo 2.2 g / L de GA y aumentó la producción
de DHA a 108 g / L. Recientemente, un estudio independiente demostró que la optimización del medio de
crecimiento y las condiciones de fermentación para aumentar la conversión de glicerol a DHA por G. oxydans
ZJB09112 conducen a la producción de 161.9 g / L de DHA a una tasa de conversión del 88.7% en un proceso de
alimentación por lotes.
El GA puede usarse en las industrias química y farmacéutica como un componente básico y para la producción de
Ácido glicérico: polímeros y tensioactivos.Sin embargo, GA no se produce a granel, probablemente porque todavía no se ha
desarrollado una cantidad considerable de aplicaciones para este producto químico. Debido a que la molécula
GA tiene tres grupos funcionales, tiene un enorme potencial como químico que agregará valor al glicerol.

El GA es producido biotecnológicamente principalmente por bacterias, más específicamente por la familia de las bacterias
del ácido acético (Acetobacteraceae), como Gluconobacter sp., Acetobacter sp. Y Gluconacetobacter sp. Se demostró que
un Adh unido a la membrana está involucrado en la producción de GA por las bacterias del ácido acético (Figura 3 )
Después de la optimización de la concentración de glicerol y la aireación, dos cepas seleccionadas, Gluconobacter
frateurii NBRC103465 y Acetobacter tropicalis NBRC16470, pudieron producir más de 100 g / L de ácido glicérico en la
fermentación de alimentación por lotes. G. frateurii NBRC103465 produjo 136.5 g / L de ácido glicérico con un exceso
enantiomérico de 72% D- GA .

Se espera que la identificación de las vías responsables de la conversión de glicerol en estos microorganismos permita el
uso de estrategias de ingeniería metabólica para reducir la formación de subproductos y conducir a una cepa productora
industrial.
Se ha utilizado en la industria alimentaria durante varios años, pero tiene muchas otras aplicaciones. El ácido
Ácido láctico: láctico puede procesarse para hacer ácido acrílico o 1,2 propanodiol usado en resinas de poliéster y poliuretano
usado como deshielo o anticongelante [ 52 ]. Los ésteres de lactato se usan como solventes para el recubrimiento
y en la industria de la limpieza, también se pueden polimerizar en el polímero de base biológica PLA (ácido
poliláctico).

Los procesos actuales para la producción de D- lactato basados ​en bacterias nativas de ácido láctico usan azúcares como
fuente de carbono y también pueden ser aplicables a las materias primas lignocelulósicas. Sin embargo, la utilización de
bacterias del ácido láctico en procesos industriales requiere nutrientes complejos para el crecimiento celular y puede no
dar como resultado una alta selectividad del producto y pureza enantiomérica.

El ácido láctico también puede ser producido a partir del glicerol por otros microorganismos productores de forma natural,
como E. coli Klebsiella Clostridia Bacillus y los hongos filamentosos Rhizopus oryzae, aunque a concentraciones y
productividad muy bajas.

Se han seleccionado nuevas cepas y los productores naturales han sido diseñados metabólicamente para aumentar el
rendimiento y la tasa de producción. La cepa E. coliEl AC-521 fue capaz de producir ácido láctico con una productividad de
0,49 g / g / h y un rendimiento de 0,9 mol / mol de glicerol.
Recientemente, E. coli ha sido diseñada para la producción homofermentativa de D- lactato a partir de glicerol.Se
sobreexpresaron varias enzimas que conducen a la producción de ácido láctico, mientras que se bloquearon las vías que
conducen a la producción de etanol, succinato y acetato. La cepa de E. coli diseñada fue capaz de producir ácido D-láctico
ópticamente puro (99,9%) a partir de glicerol en medio de sales mínimas con solo unos pocos suplementos. Además, esta
cepa produjo 32 g / L de D-lactato a partir de 40 g / L de glicerol con un rendimiento de 0.83 g / g de glicerol, y con una
productividad específica para la producción de D-lactato de 1.25 g / g de masa celular / h
Ácido succínico: Se usa principalmente para fabricar productos relacionados con la salud, incluidos productos farmacéuticos,
antibióticos, aminoácidos y vitaminas. Además, es un importante componente básico que podría usarse para
producir precursores importantes para la síntesis química, como tetrahidrofurano, g-butirolactona, 1,4-
diaminobutano, 1,4-butanodiol que se convierten en una amplia variedad de productos. , incluyendo
solventes verdes, productos farmacéuticos y plásticos biodegradables.

Bacterias del rúmen como Anaerobiospirillum succiniciproducens, pueden producir succinato a partir de glicerol, Pero
estas cepas bacterianas requieren nutrientes complejos que aumentan los costos de producción, la purificación, el
tratamiento de residuos y, en consecuencia, dificultan su utilización en un proceso industrial.

En un estudio reciente, se construyó una cepa de E. coli en dos pasos y se necesitaba el uso de una enzima heteróloga .
Inicialmente, se evitó la formación de subproductos al bloquear las vías que conducen al etanol, el ácido acético y el ácido
láctico.Y se expresó  piruvato carboxilasa (pyc) de Lactococcus lactis en esta cepa para impulsar la generación de succinato
a partir del nodo piruvato. La cepa resultante fue capaz de convertir el glicerol en ácido succínico con una productividad
específica de ~ 4 g / g / hy un rendimiento de 0,69 g de succinato / g de glicerol, que es similar a los rendimientos
obtenidos con glucosa (0,78 g / g).

La fermentación en condiciones microaerobias fue necesaria para superar la necesidad de nutrientes ricos y mantener una
producción neta de ATP. Por otro lado, el uso de condiciones microaerobias puede ser un problema porque conducirá a la
pérdida de glicerol en forma de CO2.
En un estudio recurrente, E. coli fue diseñada para producir succinato a partir de glicerol utilizando solo genes nativos. La
producción de succinato se incrementó en 3 etapas: i) la generación de energía de acoplamiento, es decir , la formación
de ATP, para producir succinato al aumentar la actividad de fosfoenolpiruvato carboxiquinasa gluconeogénica para realizar
la carboxilación de fosfoenolpiruvato; ii) evitar la acumulación de formiato y etanol inactivando piruvato formiato liasa
(pflB) y; iii) eliminar ptsI(parte del sistema de fosforilación intracelular) que interrumpe la vía primaria para el
metabolismo anaeróbico de glicerol. Resultando en rendimientos tan altos como 0,8 mol / mol de glicerol. Sin embargo, la
productividad de ácido succínico en condiciones anaeróbicas fue muy baja ( es decir , se produjeron 102 mM o 40 g / L de
succinato en 6 días).

En un estudio reciente, una cepa recombinante de la levadura aeróbica, Yarrowia lipolytica, fue capaz de producir ácido
succínico cuando se cultivó en glicerol a pH bajo. La cepa se construyó mediante la eliminación de la subunidad succinato
deshidrogenasa (SDH), que induce la acumulación de ácido succínico en Y. lipolytica , y también en levaduras
fermentativas como S. cerevisiae y Kluyveromyces lactis. Fue posible el crecimiento con glucosa, el crecimiento con
glicerol y la producción de succinato. De hecho, una cepa con el gen SDH2 eliminado fue capaz de producir succinato a
partir de glicerol a un nivel de más de 45 g / L en matraces con tampón y más de 17 g / L sin tampón
Es un ácido orgánico débil que se produce comercialmente por fermentación de melaza (sacarosa y glucosa) por el
Ácido cítrico: hongo A. niger. La levadura Y. lipolytica ha ganado mucha atención en los últimos años, ya que es capaz de
metabolizar varios subproductos industriales y agroindustriales importantes ( es decir , ácidos grasos libres
saturados, glicerol crudo) para producir grandes cantidades de ácidos orgánicos y restos de carbohidratos
biosurfactantes (por ejemplo, manosa y ramnosa).

La importancia de la selección de cepas se destacó cuando 27 cepas de Y. lipolytica se compararon en función de la
capacidad de producir ácido cítrico a partir de glicerol. La producción de ácido cítrico en un medio con nitrógeno limitado
varió de 1.4 g / l hasta 21.6 g / L de acuerdo con la cepa utilizada. Por lo tanto, la identificación de cepas que producen no
solo niveles más bajos de subproductos, como ácido isocítrico y biomasa, sino que también exhiben altos rendimientos y
productividad beneficiará el proceso de producción de ácido cítrico.

Durante la fermentación discontinua de glicerol a ácido cítrico, la levadura se ve afectada principalmente por las altas
concentraciones de glicerol crudo, sus impurezas y las crecientes concentraciones de ácido cítrico presentes al final de la
fermentación. De hecho, se demostró que la productividad del ácido cítrico disminuye con el tiempo durante la
fermentación cruda de glicerol por Y. lipolytica. Para contrarestrar estos problemas se hicieron modificaciones en la
composición del cultivo, el cultivo se realizó en modo discontinuo, luego se retiró una porción del líquido de cultivo y se
añadió el mismo volumen del medio de producción. Con eso, las células pudieron mantener la producción de ácido cítrico
tan alto como 124.2 g / L con un rendimiento de 0.77 g / gy una productividad de 0.85 g / L / h durante aproximadamente
1000 h.
Ácido oxálico: Conocido por su capacidad de lixiviar óxidos de hierro. Se puede aplicar en industrias, como la
fabricación de papel y detergentes, para limpiar o blanquear complejos de hierro.

Recientemente se demostró la producción de ácido oxálico por Aspergillus niger que crece en residuos de glicerol crudo
de plantas de producción de biodiesel. La producción de ácido oxálico alcanzó aproximadamente 21 g / L con un
rendimiento de conversión de glicerol a ácido oxálico (g / g) que varió de 0,55 a 0,62. Estos resultados parecen
prometedores incluso teniendo en cuenta el largo tiempo de producción de aproximadamente 10 días.

La capacidad de la cepa de A. niger XP para producir ácido oxálico se estudió en cultivos sumergidos que contenían 50 g /
L de desechos no purificados derivados del biodiésel, que estaba compuesto de 45% (p / p) de glicerol, 49% (p / p) de
ácidos grasos libres, una cantidad baja de ésteres etílicos de ácidos grasos y jabones procedentes de la producción de
éster etílico. Después de 7 días de biosíntesis, la cantidad de ácido oxálico producido por A. niger XP alcanzó 48,9 g / L con
rendimientos de ácido oxálico de hasta 0,88 (g. G - 1 glicerol consumido).
Polioles: Los polioles (también llamados alcoholes de azúcar, alcoholes polihídricos o polialcoholes) son carbohidratos con un
grupo carbonilo (aldehído o cetona) reducido a un grupo hidroxilo correspondiente. Los ejemplos de alcoholes de
azúcar disponibles comercialmente incluyen xilitol, sorbitol, manitol, eritritol, lactitol, maltitol e hidrolizado de
almidón hidrogenado (HSH).

Los alcoholes de azúcar comparten muchos atributos con los azúcares y tienen propiedades nutricionales únicas. Se
utilizan para mejorar el perfil nutricional de los productos alimenticios debido a su bajo contenido calórico, su baja
respuesta mediada por insulina y su no cariogenicidad. Estos compuestos y sus derivados también tienen otras
aplicaciones industriales, incluida la producción de poliuretanos, agentes plastificantes, resinas, tensioactivos e
intermedios para la producción de hidrocarburos. De hecho, los alcoholes de azúcar, especialmente sorbitol, xilitol y
arabitol, han sido identificados como pertenecientes a un grupo de los 12 mejores componentes químicos derivados de la
biomasa en estudios realizados por el Departamento de Energía de los Estados Unidos

El sorbitol se puede convertir en productos químicos como propilenglicol, etilenglicol, isosorbida y azúcares anhidros,
mientras que el xilitol y el arabitol se pueden convertir en ácido xilárico / xilónico, ácido arabinoico / arabónico y glicoles.
Se han investigado algunos factores que influyen en la capacidad de dos levaduras
Polioles: Manitol: (Torulopsis mannitofaciens CBS 5981 y T. versatilis CBS 1752) para producir manitol a
partir de glicerol

T. mannitofaciens produjo manitol a partir de glicerol consumido con un rendimiento del 31% del máximo teórico. Además,
se demostró que altas concentraciones de fuentes de nitrógeno y KH2PO4 en el medio de cultivo redujeron significativamente
el rendimiento de manitol a pesar del consumo de glicerol.

Candida magnoliae fue capaz de consumir 100 g / L de glicerol en 96 h, resultando en 51 g / L de manitol, lo que


corresponde a un rendimiento de 0.51 g / g. Además, el manitol fue el único metabolito detectable por el detector UV-VIS o
RI cuando se analizaron muestras de células en reposo de C. magnolia mediante cromatografía líquida de alto rendimiento
con exclusión de iones. La ausencia de otros metabolitos en solución puede facilitar la recuperación de manitol. También
encontraron que el rendimiento de manitol se vio afectado negativamente cuando el glicerol se complementó con KH2PO4 y
extracto de levadura.

Cepas de Yarrowia lipolytica y cepas de diferentes especies de levadura y hongos filamentosos de la clase Zygomycetes
sobre su capacidad para convertir el glicerol crudo en diferentes compuestos químicos fueron comparadas en medios de
cultivo de distinta composición según requerimientos de las bacterias u hongos, de ambos grupos fueron seleccionadas las
cepas que mostraron mayor rendimiento de conversión del glicerol, asi como en ambos casos concentraciones crecientes de
glicerol crudo. En el caso de Y. lipolytica , el mejor productor de manitol bajo las condiciones analizadas, hubo una
correlación positiva entre el aumento en la concentración de glicerol crudo en el medio de cultivo inicial y la producción de
manitol, con concentración de manitol y con rendimientos que alcanzaron 19.4 g / L y 0.23 g / g, respectivamente.
La producción comercial de eritritol se produce exclusivamente a través de la fermentación en
Polioles: Eritritol: sustratos que contienen azúcares, como glucosa y fructosa, a partir de la hidrólisis de la
biomasa. Aunque la producción de eritritol fermentativo por diferentes microorganismos se ha
estudiado desde 1960, pocos estudios han investigado la producción de este poliol a partir de
diferentes fuentes de carbono

Un mutante acetato negativo de Y. lipolytica (Wratislavia K1) produce simultáneamente cantidades significativas de
eritritol y ácido cítrico . Posteriormente, se investigó el efecto del pH sobre la producción de eritritol por el mutante
Wratislavia K1 de Y. lipolytica. La concentración de eritritol alcanzó los 170 g / L (rendimiento de 0.56 g / g) después del
crecimiento alimentado por lotes con una concentración total de 300 g / L de glicerol crudo y un pH de 3.0. En estas
condiciones, no se produjo ácido cítrico, lo que demuestra que este rango de pH es óptimo para que el mutante produzca
eritritol, ya que evita la canalización del glicerol hacia la producción de ácido cítrico. Este ejemplo demostró que al usar
glicerol crudo residual como fuente de carbono, los rendimientos de eritritol sin la generación de subproductos
indeseables fueron comparables a los rendimientos reportados con microorganismos utilizados en la producción comercial
de eritritol con glucosa como sustrato.
Tiene muchos atributos de su enantiómero, el xilitol, lo que hace que su uso sea factible en muchas
Polioles: Arabitol:
aplicaciones conocidas de xilitol, como en edulcorantes naturales, reductores de caries y sustitutos
del azúcar para pacientes diabéticos. El arabitol y el xilitol pueden transformarse en ácidos
arabinoico / arabónico y xilarico / xilónico, que a su vez pueden usarse para producir poliésteres y
polímeros insaturados con nuevas aplicaciones.

El arabitol puede convertirse biológicamente en xilitol, por ejemplo, por Gluconobacter oxidans, que representa una
posible ruta eficiente para la síntesis de xilitol de mayor pureza y especificidad

La cepa Debaryomyces hansenii SBP-1 fue seleccionada por su capacidad de producir altas concentraciones de arabitol
como el único poliol, facilitando así una mayor separación del producto. Luego se investigó la producción de arabitol por D.
hansenii SBP-1 en diferentes condiciones, y se alcanzó un rendimiento de 0,5 g / g de glicerol consumido con 150 g / l de
glicerol crudo en el medio de cultivo inicial en condiciones aeróbicas a 30 ° C. Posteriormente, se optimizaron
las condiciones de cultivo para la cepa D. hansenii SBP-1, lo que condujo a un rendimiento de arabitol de 0.6 g / g y una
productividad volumétrica de 0.35 g / L / h. Se desarrolló un protocolo para separar el arabitol del medio de fermentación
que contiene 20-30 g / L de glicerol y 40-50 g / L de arabitol, lo que condujo a un rendimiento de 60% de arabitol con un
95% de pureza.
Los polihidroxialcanoatos (PHA) han recibido gran atención debido a su posible aplicación como
OTROS PHB:
termoplásticos renovables, biodegradables por microorganismos presentes en la mayoría de los ambientes,
y pueden ser producidos a partir de diferentes fuentes de carbono renovables.

El poli-3-hidroxibutirato PHB pertenece al grupo de polihidroxialcanoatos (PHA) y es el ejemplo mejor estudiado de poliésteres
biodegradables. Este polímero es sintetizado naturalmente por una amplia variedad de especies bacterianas como un compuesto
de almacenamiento de carbono y energía. Su producción es pequeña y limitada por el costo del sustrato.

La implementación del lote alimentado en condiciones de O2 bajo parecía ser una estrategia adecuada para la producción
de PHB por la cepa de E. coli Arc2 diseñada genéticamente en cultivo alimentado. De manera similar, el cultivo alimentado
por lotes mejoró la producción de PHB por la bacteria recién aislada, Zobellella denitrificans MW1 , que se caracterizó por
producir grandes cantidades de PHB a partir de glicerol en presencia de NaCl. El cultivo en el medio que contenía 20 g / L
de NaCl, con alimentación optimizada de glicerol y amoníaco, dio como resultado un contenido de PHB del 66.9% del peso
seco de la célula, y la productividad del polímero y el coeficiente de rendimiento del sustrato de 1.09 g / L / hy 0.25 g
PHB / g glicerol, respectivamente.
D-xilulosa:

La conversión de glicerol a D-xilulosa se ha logrado utilizando una fermentación microbiana de dos etapas. Inicialmente, Candida
parapsilosis convirtió el glicerol en D-arabitol , luego las células de levadura se recogieron y finalmente el D-arabitol del sobrenadante del
cultivo se convirtió en D-xilulosa por G. oxydans  Sin embargo, este proceso de conversión debe mejorarse antes de aumentar la escala de
producción ya que de 170 g / L de glicerol solo se produjeron 32,2 g / L de D-arabitol.

Ácidos grasos poliinsaturados:

Los ácidos grasos poliinsaturados, como el ácido docosahexaenoico (DHA, 22: 6), el ácido eicosapentanoico (EPA, 20: 5) y el ácido α-linoleico
(ALA, 18: 3) tienen presencia en el mercado como nutracéuticos, porque son beneficiosos para la salud humana. . Recientemente se revisó
el uso de glicerol derivado de biodiésel como fuente de carbono para producir tales ácidos grasos poliinsaturados, especialmente DHA.  Por
lo tanto, no discutimos más esta ruta para la valorización del glicerol crudo en este trabajo.

Biohidrógeno y biometano:

La utilización de glicerol crudo para producir combustibles gaseosos, biohidrógeno y biometano (biogás), ha ganado más atención
últimamente. De hecho, varios estudios han reportado la producción de biohidrógeno y biometano mediante procesos de conversión
microbiana a partir de glicerol crudo usando un solo cepas microbianas o comunidades bacterianas. También se ha investigado la
utilización de glicerol crudo como única fuente de carbono o como un sustrato adecuado para mejorar la eficiencia de los biodigestores.
Biorefinería basada en biodiesel: oportunidades y desafíos

Se puede producir una amplia gama de combustibles y productos químicos mediante la fermentación microbiana de glicerol. Sin
embargo, la expectativa es que los productos primarios obtenidos por fermentación en biorefinerías son productos químicos con
demandas establecidas y mercados internacionales. De hecho, de los catorce compuestos producidos a escala de laboratorio por
fermentación microbiana de glicerol, diez de ellos se producen actualmente por conversión química o microbiana de azúcares o
procesos petroquímicos.

Es importante que los costos de producción de productos químicos a partir de glicerol sigan siendo competitivos con los obtenidos
del petróleo. Cabe señalar que las demandas de desarrollo sostenible y los precios volátiles del petróleo deberían favorecer el uso
de productos químicos "más ecológicos" a largo plazo, incluso si su precio de mercado no es considerablemente más barato. Los
productos químicos sin o con un mercado limitado, como el DHA y el ácido glicérico, pueden representar una oportunidad para el
desarrollo de nuevos productos, ya que no hay un precio de producción de referencia directo contra el que tendrán que competir.

Dos ejemplos de éxito están dados por la producción de 1,3-PDO y ácido succínico. El producto químico 1,3-PDO está hecho
tradicionalmente de óxido de etileno o propileno derivado de fósiles, sin embargo, DuPont y Tate & Lyle han desarrollado e
implementado un proceso de base biológica. Su proceso para la producción de 1,3-PDO se basa en un microbio que expresa genes
de varios microorganismos diferentes para proporcionar la productividad requerida. El proceso basado en el uso de un microbio
diseñador para producir 1,3-PDO a partir de maíz se ha estado ejecutando en una planta Bio-PDO ™ en Tennessee (EE. UU.) Con
una capacidad de 45 mil toneladas al año desde 2007.
La producción de ácido succínico de base biológica mediante una tecnología fermentativa es el foco de una empresa conjunta
entre DSM y Roquette. De hecho, los primeros volúmenes de prueba de este producto químico renovable y versátil producido
a partir de maíz ya se han producido en una planta de demostración en Lestrem (Francia) que se construyó en 2009. Se espera
que estos desarrollos faciliten el establecimiento de procesos de fermentación basados ​en glicerol, ya que se pueden usar
microorganismos y vías similares

Desde el punto de vista económico, es importante para la industria que las materias primas para la producción de biodiesel y,
en consecuencia, el glicerol para la producción de combustibles y productos químicos, sean abundantes durante todo el
año. En este sentido, algunos países pueden no tener suficiente biomasa y, en consecuencia, glicerol, para mantener una
producción a escala industrial de biodiesel, combustibles y productos químicos durante las cuatro estaciones, especialmente
debido a la competencia de la biomasa para otros usos. Una forma de resolver este problema, especialmente en países con
gran territorio y clima templado durante todo el año, es la diversificación de las materias primas de biomasa en la industria y la
regionalización de las plantas de producción. En este sentido, la principal materia prima para la industria debería estar
creciendo en la región de la planta de producción, que solo puede complementarse con biomasa alternativa de otras regiones. 

En países como Brasil, por ejemplo, donde el 80% del biodiésel se produce a partir del aceite de soja, podría ser ventajoso
comenzar a usar aceite de fuentes de biomasa alternativas, como el aceite de palma, la nuez física, el ricino y otros. Esto
garantizaría el suministro de biomasa para la industria y al mismo tiempo evitaría el transporte de soja a las plantas de
producción en todo el país. que solo puede complementarse con biomasa alternativa de otras regiones. 
Conclusiones:

Cuando se emplean cepas de tipo salvaje para producir el producto químico deseado, los esfuerzos para mejorar la producción
generalmente se concentran en la optimización de las condiciones de fermentación, como aireación, pH, concentración de
sustrato y alimentación. Sin embargo, el uso de estas cepas (especies) en aplicaciones industriales puede verse afectado por la
patogenicidad, la necesidad de condiciones anaeróbicas estrictas o la falta de herramientas genéticas.  Una vez que las enzimas
y las rutas metabólicas en dichos microorganismos se identifican y aíslan, pueden usarse para el desarrollo de cepas
recombinantes.

Antes de la implementación de una planta piloto o industrial para producir cualquier combustible o químico, se deben
considerar dos aspectos importantes: i) el costo de producir combustibles y químicos por fermentación microbiana debe ser
comparable con los productos derivados de fósiles y ii) la cadena de suministro de materias primas para la industria.

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