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Aplicaciones

clínicas de la
Espectroscopía
Raman.
Jesús Andrés Ruano.
Mario Alejandro Narváez.
Resumen.
 Como lo describió el Dr. C. V. Raman en 1928, la señal de Raman suele ser
débil (uno en cien millones de fotones incidentes) y requiere una iluminación
muy potente para su observación.
 Por lo tanto, la espectroscopia Raman es una técnica
molecular específica que puede utilizarse para
desarrollar una comprensión bioquímica fundamental
de la fisiología y la patología de los tejidos y ampliar
estos conocimientos para el diagnóstico y la
monitorización de los tejidos.
 Debido a que la dispersión Raman es un fenómeno
sensible y débil, las consideraciones sobre los
instrumentos para adaptar esta técnica a las
aplicaciones clínicas pueden ser un desafío.
 El desarrollo tecnológico y el refinamiento de las técnicas han permitido
realizar mediciones Raman en humanos con tiempos de integración de 0,5-5
segundos, lo que permite una evaluación en tiempo real del estado de los
tejidos.
Instrumentación
Clínica.
 Un sistema Raman dispersivo es similar a la mayoría
de los sistemas espectroscópicos ópticos y consta de
tres componentes primarios: fuente de luz, entrega y
recolección de luz de muestra y elemento dispersivo
con detector.
 Los componentes que conforman un sistema
clínico Raman pueden ser clasificados
ampliamente en ramas de:
 Excitación
 Detección.
Láseres.
 Debido a la débil naturaleza de la dispersión Raman, es importante
suministrar suficiente potencia a la muestra para generar fotones dispersos
Raman para su detección en un tiempo razonable de integración relevante
para el entorno clínico en cuestión.
 los tejidos como el del seno (A) que no tienen señales de auto fluorescencia
fuertes relativas a las características de Raman pueden ser recolectados con
varias longitudes de onda diferentes; sin embargo, los tejidos altamente auto
fluorescentes como el riñón (B) requieren el uso de longitudes de onda de
excitación más largas para obtener espectros Raman útiles.
Espectrógrafos y
detectores.
 Un sistema típico de detección dispersiva Raman usado para aplicaciones
clínicas potenciales consiste en un espectrógrafo de imagenología de corta
longitud focal conectado a una cámara de dispositivo de acoplamiento de
carga enfriada (CCD).
 La mayoría de los CCDs de Raman utilizan un sistema Peltier multietapa
termoeléctrico (TE) para enfriar activamente la cámara a al menos -70 °C con
el fin de obtener un excelente rendimiento de ruido oscuro.
 Otra técnica disponible para su uso en el entorno de sobremesa es la imagen
hiperespectral Raman, que recoge la cartografía global de alta resolución a
través de imágenes monocromáticas.
Calibración de
instrumentos.
Calibración Espectral.
 La calibración espectral se utiliza para convertir el eje horizontal del número
de píxeles CCD al número de onda relativo. El espectro de emisión de una
fuente de luz calibrada conocida, como una lámpara de neón con numerosas
y estrechas bandas en el NIR, se utiliza normalmente para calibrar el eje
horizontal en números de onda absolutos (cm-1).
Calibración de intensidad.
 Los estándares espectrales como el fluoróforo rodamina 6G y un dispersor
Raman débil como el azul de metileno o la vitamina E pueden utilizarse como
estándares de intensidad adicionales para tener en cuenta las variaciones
diarias en la intensidad espectral.
 Este proceso de calibración es esencial para la comparación de espectros
medidos a través de diferentes instrumentos Raman para la misma o similar
muestra.
 Diferencias espectrales Raman representativas que
pueden obtenerse de una sola muestra adquirida
utilizando dos sondas diferentes. (A) Una sonda Raman
convencional filtrada (verde) y una sonda Raman
dirigida por haz azul sobre la piel in vivo demuestran
formas de línea únicas. (B)

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