Tabla 1

Sustrato: Almidón 10%

Buffer: Buffer de fosfato 1M; diferentes pH
Enzima: Amilasa (cultivos)
Tiempo de reacción: 30min
Tubo BB BS BE 1 2 3 4 5 6
Sustrato (ml) -- 0,4 -- 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4
Buffer (ml) 2 1,6 1,8 1,4 1,4 1,4 1,4 1,4 1,4
pH Buffer 5,99 5,99 5,99 4,11 5,13 5,8 5,99 6,28 7,19
*Los tubos BE, y del 1-6 se harán para cada uno de los cultivos

Se tomó los 50ml de cada uno
Se tomaron los tres cultivos de
de los caldos y se centrifugaron
la incubadora.
por 10 minutos
En la práctica 2 se empezó a
Se prepararon buffer de fosfato
realizar los experimentos de
1M a diferentes pH
actividad enzimática,
(7.19,6.28,5.99,5.8,5.13,4.11)
empezando con pH óptimo

Se mezclaron bien y
Pasados los 30min
enseguida se empezó a Se preparó en tubos de
todos los tubos se Se esperó 30min para
agregar 0.2ml del ensayo la tabla 1, tres
llevaron a un baño que reaccionara la
cultivo a intervalo de veces (una para cada
maría a 92ºC para enzima.
30s de los tubos 1 al 6 y cultivo)
detener la reacción.
al BE.
Al finalizar la sesión
Se procede a
Se dejan enfriar se procedió a
determinar la
por 5min. congelar los tres
glucosa con DNS.
cultivos.
En la tercera práctica Se sacaron los En 3 tubos se colocó
Se centrifugó
se En 3 tubos
realizó de
Biuret, En otro tubo
cultivos del se Ende
1.8ml 3 tubos se
caldo de
colocó 0,5ml de colocó 0,5ml durante 10min los
DNS y temperatura congelador y se de colocó
cultivo 1.8mldede
y 1.2ml
sobrenadante y agua y 0,5ml. de cultivos. caldo de cultivo y
òptima descongelaron Biuret.
0,5ml de DNS DNS como blanco. 1.2ml de Biuret.

Se agitaron
En otro tubo se
Se midió la suavemente y se
Se procedió a colocó 1.8ml se agua
absorbancia a esperó 15min a que
realizar DNS. y 1.2ml de Biuret
595nm se desarrolle el color
como Blanco.
en la oscuridad.