INTRODUCCION

 Esta técnica se utiliza para

detectar y cuantificar sustancias
en cantidades muy pequeñas.
 Ha permitido obtener avances
significativos acerca de la
naturaleza química y los
mecanismos fisiológicos de
substancias contenidas en
fluidos biológicos
 Desarrollada por solomon berson y
rosalyn yalow (1960)
 • Es una técnica competitiva en la que la molécula antigénica que se quiere
determinar compite por unirse a un anticuerpo específico con un trazador
radioactivo
• Es una técnica de análisis en el que una pequeña cantidad de sustancia
marcada radioactivamente, es desplazada de su unión específica por otra
similar no marcada que va a competir con la sustancia marcada
radioactivamente.
• Es un tipo de inmunoensayo o método radioinmunométrico que se basa en
DEFINICION :
la formación específica de los complejos antígeno-anticuerpo, lo que lo
dota de una gran especificidad, unida a la gran sensibilidad de los
métodos radiológicos. Este método se basa en la competencia existente
entre el anticuerpo no marcado y una cantidad conocida del antígeno
marcado para formar los complejos AgAc o Ag*Ac. Con estos tres
componentes (Ag, Ag* y Ac) puede realizarse el ensayo en el que,
manteniendo constante la cantidad de Ag* y Ac, se observará que a mayor
cantidad de Ag menos Ag* queda unido a la cantidad fija de Ac (y, por lo
tanto, se medirá menos radiactividad), lo que permitirá relacionar la
radioactividad con la concentración de Ag.
 FUNDAMENTACIÓN DE LA TÉCNICA
 Se mezcla una cantidad constante de antígeno Y una
cantidad constante de un anticuerpo para ese antígeno,
Se produce la reacción entre antígeno (Ag) y anticuerpo
(Ac)
 Se separa la fracción de antígeno que se ha unido de la
que permanece libre, se determina la radioactividad.
 En presencia de antígeno frío (no radioactivo), éste
compite con el antígeno radioactivo para unirse al
anticuerpo. Por tanto la radioactividad medida es menor.
 Si se realiza el ensayo con una muestra que contiene una
cantidad desconocida del antígeno no marcado y se mide
la radioactividad asociada a los anticuerpos, por
interpolación sobre la curva de calibrado se puede
estimar la concentración del antígeno frío en la muestra
 Se mide la
radioactividad en
el precipitado

Cantidad conocida de Se agrega una La suma de anticuerpos anti-

antígeno marcado cantidad fija de inmunoglobulina precipitados
radioactivamente anticuerpos específicos al complejo de antígeno
marcado con anticuerpos

La diferencia entre la
radioactividad en el
control y la muestra
desconocida es
proporcional a la
cantidad de antígeno no
marcado en la muestra
desconocida
Cantidad conocida de El antígeno no marcado Es la suma de anti-
antígeno marcado compite con el antígeno inmunoglobulina precipita al
mezclado con una marcado por el anticuerpo complejo anticuerpo-antígeno
cantidad desconocida de que contiene el antígeno
antígenos. marcado y no marcado
 RIA COMPETITIVO O DIRECTO
FINALIDAD: detectar Ag en
la muestra empleando
isótopos radiactivos.
FUNDAMENTO: Uso de Ag*
que competirá con Ag por
unirse a Ab Tanto el reactivo
del antígeno marcado (Ag*)
como la muestra sin marcar
compiten por una cantidad
limitada de anticuerpo. Si la
muestra contiene más
antígeno frío (no marcado),
éste competirá con el
marcado para unirse al
anticuerpo, y se observará un
descenso en la medida de la
radioactividad
RIA EN FASE LÍQUIDA.
Ensayos fundamentales:
Titulación del antisuero: incubar diferentes
concentraciones de Ac con el Ag* marcado y valorado
para seleccionar la concentración de Ac óptima (para el
desarrollo posterior de la prueba.
Ensayo de desplazamiento: incubación conjunta del Ag*
marcado y valorado, el antisuero previamente titulado (Ac
valorado) y la muestra problema que contiene el Ag a
determinar.
A mayor concentración de Ag en el suero problema,
mayor concentración de Ag* libre. Para medir el Ag* libre,
se elimina el Ag* unido mediante precipitación de los IC.
 RIA NO COMPETITIVO O INDIRECTO
FINALIDAD: Se utiliza para
determinar la presencia de un
determinado anticuerpo
antimicrobiano
FUNDAMENTO: El Ac objeto
de estudio se coloca entre su
Ag complementario y un Anti-
Ab* denominada “técnica de
Sandwich”
RIA EN FASE SÓLIDA.
Se han desarrollado para facilitar la separación entre los Ag*
libres y los Ag* unidos a los IC. Los pasos son los siguientes:
 Fijación del Ag sobre un soporte (tubo o placa de plástico).
Lavar para eliminar el exceso de Ag.
 Bloqueo o postapizado de la placa con ovoalbúmina, que
tapa las zonas libres de la placa para que no fijen Ac o Ag
• Adición de la muestra problema donde se quieren
determinar los Ac. Lavar para eliminar los Ac no unidos.
• Adición de anti-Ac radiomarcados (conjugado) y lavar para
eliminar el exceso.
• Medir la radiactividad de la placa en un contador.
 Resultado positivo Resultado negativo

Etapa1:Fijar el
antígeno (reactivo) a
la superficie

Etapa2: lavar

Etapa3: Añadir el
suero sospechoso
que contenga el
anticuerpo
Etapa4: Lavar para eliminar el exceso de suero

Etapa5: Añadir el
anti- anticuerpo
(reactivo2) marcado
radiactivamente

Etapa6:Eliminar por lavado el exceso de anticuerpos radioactivos

Etapa 7: recuento,
detección de
radioactividad
electroforesis en el
papel o acetato de cromatografía,
celulosa, difusión en gel

Estos medios separan de

la hormona libre y del
complejo, eliminando la
presencia de sustancias
no específicas y no
alterando el equilibrio Ag
Ac
separación cromo absorción, proteína
electroforética A-estafilocócica.
 Técnica de las más utilizadas por cuantificar gran variedad de moléculas
• Inmunoglobulinas: IgE determina alergias
• Hormonas peptídicas
PROTEINAS • Neuropeptidos
• Transferrinas

ANTIGENOS  Vírus de la hepatitis B

VIRICOS  VIH

 Insulina
HORMONAS  Secretina
 Cortisol (hormona esteroidea)
 Testosterona (hormona esteroidea)
• Antisépticos
MEDICAMENTOS • Antibióticos
• Antidepresivos
• Tranquilizantes
• Esteroides anabólicos