UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ESCUELA PROFESIONAL TOXICOLOGIA

The emerging metabolic view of Clostridium

difficile
pathogenesis

I N T E G RA N T E S :
A R Ó S T E G U I G A RC Í A , JAC K E L I N E S .
GUERRERO MEDINA, CRISTINA M.
PA L L I N Q U I S P E , E R I C K G .
GIUSEPPE A
C Á R D E N A S Z U Ñ I G A , J AV I E R
H I D A L G O F E R RA R I , M A RC A .
FRANC IA QUIS PE,
LA IMPORTANCIA DE COMPRENDER LA
ECOLOGÍA METABÓLICA DE
CLOSTRIDIUM DIFFICILE
Clostridium difficile (CDI) USO DE
ANTIBIÓTICOS

EL PRINCIPAL
FACTOR DE
RIESGO DE
"AMENAZA
INFECCIÓN
URGENTE"

IMPORTANCIA DE LA
MICROBIOTA
INTESTINAL COMO
MEDIADOR CLAVE DE
CDI
450 000 infecciones/año
 22% DE LOS CASOS DE CDI

LOS INHIBIDORES ALTERACIÓN DE

DE LA BOMBA DE LA MOTILIDAD
ANTIBIÓTICOS CDI PROTONES

LA MAYOR APRECIACIÓN POR

EL PAPEL DE LA MICROBIOTA DISBIOSIS
EN CDI HA INFORMADO EL
DESARROLLO Y EL USO
ACELERADO DE UNA SERIE DE
NUEVAS TERAPIAS.

FMT
 • La falta de conocimiento
sobre los mecanismos de
acción
• La preocupación por los
eventos adversos
• La falta de estandarización
• La aplicación engorrosa

MEJORAS EN ESTA
EFICAZ EN EL AMPLIA ESTRATEGIA TERAPÉUTICA
TRATAMIENTO COBERTURA
DEL CDI CIENTÍFICA

• ENSAYOS CLÍNICOS

• ESTUDIOS DE
SEGUIMIENTO
POSTOPERATORIO (1
AÑO)
 ES IMPORTANTE DESTACAR QUE ESTUDIOS RECIENTES HAN DEMOSTRADO
QUE LAS ESTRATEGIAS TERAPÉUTICAS REFINADAS BASADAS EN EL
CONCEPTO DE FMT ELIMINAN CON ÉXITO EL CDI PARA RESTAURAR UNA
MICROBIOTA SALUDABLE.

METABOLISMO DE C. difficile PATOGÉNESIS

CÓCTEL ESPECÍFICO DE 6 MICROBIOS TRANSPLANTE DE

FECALES MICRIOBIOTA FECAL

MODELO MURINO DE CDI

OTROS COCTELES DE SEIS ESPECIES

PUEDE MEJORAR LA CDI EN MODELOS 1 CEPA BACTERIANA
BACTERIOTERAPIA SIMPLIFICADA
MEJORA

ANIMALES Y EN HUMANOS DEPENDIENTE DEL A.

BILIAR

MODELO MURINO DE CDI

AISLADO

TRATÓ
EFICAZMENTE
LA INFECCIÓN
 ENFOQUES DE PRECISIÓN ADAPTADOS A
DIFERENTES POBLACIONES HUMANAS

ENTRE CATEGORÍAS DE DCI

INFECCIÓN AGUDA VERSUS INFECCIÓNRECURRENTE
 COMPRENSIÓN DE LOS ECOLOGÍA ASOCIADA QUE
MECANISMOS SUBYACEN A LOS ESTADOS

APOYAN INHIBEN

C. difficile

NUEVAS Y DIVERSAS VÍAS PARA VISIÓN DE ECOSISTEMAS SANOS FRENTE

TRATAR EL CDI A ENFERMOS

ENFOQUES TERAPÉUTICOS DE ALTA PRECISIÓN, COMO LOS BASADOS EN LOS

METABOLITOS U OTRAS MOLÉCULAS PEQUEÑAS, SE COMPLEMENTEN CON
ESTRATEGIAS DIETÉTICAS QUE FOMENTEN UN ECOSISTEMA INTESTINAL
SALUDABLE PARA RESOLVER O PREVENIR LA CDI.
Una visión jerárquica de la
patogénesis de C. difficile:
de la estructura comunitaria
a la producción de toxinas
 Microbiota sana en resistencia al CDI
CDI La infección por Clostridium difficile

estados permisivos

Estructuras comunitarias microbianas

subyacentes
estados no permisivos

Mecanismo de acción antibióticos microbiota intestinal

 Uso de antibióticos

Ratones tratados cada uno con

un antibiótico diferente para
Efectos diferenciales resultantes sobre la susceptibilidad al CDI
generar varias comunidades
disbióticas distintas

Identificar taxones bacterianos específicos que

hacen a los huéspedes susceptibles o resistentes
al CDI Posteriormente sometidos a
CDI experimental,

Se identificaron
patrones de cambio Posteriormente sometidos a
comunitario asociados CDI experimental
con la enfermedad
 Escherichia y Streptococcus CDI

Porphyromonadaceae, Lachnospiraceae,
Protección
Lactobacillus y Alistipes

Fuertemente anti-
correlacionado con la
susceptibilidad antibiótico-
mediada a la infección

Moduladores
importantes del
sistema inmune

Clostridium
 CDI no-CDI
Enterococcaceae, Enterobacteriaceae, relativo a controles
Erysipelotrichaceae, y Lachnospiraceae controles diarreicos
saludables

Bacteroidaceae, Lachnospiraceae, ¿Qué microbios

Grupos de control desempeñan un papel de
Porphyromonadaceae y Ruminococcaceae
apoyo en el CDI?

¿Qué aspectos de la
función, la adaptación o el
contexto distinguen a los
taxones relacionados que se
comportan de manera
diversa durante el CDI?
¿Cuáles co-ocurren con C. difficile,
posiblemente ‘autostop’ en varios aspectos de
los mismos cambios ambientales que alimentan
el crecimiento C. difficile?
 dentro de los estudios, hay
lo que sugiere que están
tendencias reproducibles
en juego determinantes
en la abundancia de clases
microbianos o del huésped
de microbios que
adicionales
diferencian el CDI

Interrogación
de relaciones
funcionales Una pregunta clave es si
a pesar de la gran variabilidad
intragrupo de la composición de
con la los estados disbióticos
susceptibles a CDI se
microbiota entre pacientes
colonizados con C. difficile
metabolómica. caracterizan por cambios
convergentes en las
toxigénico o no toxigénico versus
controles diarreicos no
capacidades funcionales colonizados, cada uno de los tres
de la comunidad grupos poseía cambios distintos
pero reproducibles en el
metabolismo de la comunidad,
medidos por el perfil de
metabolitos
De los metabolitos identificables, seis productos químicos fueron diferencialmente abundantes en los
pacientes colonizados por C. difficile, independientemente de la toxigenicidad

no colonizados: leonurisida A, ácido N-pal-mitil-glutámico, florizina, dos tripéptidos y ceramida.

colonizados con C. difficile toxigénico albergaban niveles más bajos de colina y acetilputrescina,

lo que sugiere que las toxinas de C. difficile engendran un estado ecológico metabólico distinto. Se
necesitan más estudios para validar los efectos directos de C. difficile colonización y producción de
toxinas en los cambios en la abundancia de los metabolitos identificados en este estudio

así como su generalización y cómo encajan en la red metabólica microbiana durante la infección.
Perspectivas mecanicistas sobre las interacciones entre especies
en modelos de ratones gnotobióticos

Interacciones metabólicas

Apoyo o inhibición de CDI

Disponibilidad temporal de
Clostridium scindens
nutrientes Genera ácidos biliares secundarios
ácido siálico

Producto final de FMT

fermentación comensal (trasplante de microbiota fecal)
succinato
Figura 1. Un modelo centrado en el metabolismo para el rango de estilos de vida de C. difficile dentro del intestino distal.
 TOXINAS GLICOSILANTES Inactivan GTPasas (proteínas Rho)
Tcd A Tcd B

CITOTOXINAS PROCESO DISBIÓTICO INTESTINAL

CEPA EPIDEMICA RIBOTIPO 027

- Ribosilación de ADP
TOXINA BINARIA - Apoptosis de eosinófilos

AMBIENTES METABÓLICOS FAVORABLES

Expresión de toxinas
 Visión Metabólica
Emergente de la
patogénesis de C. difficile
 • La interrupción de la microbiota con
antibióticos orales a menudo precede a
la aparición de varios agentes
patógenos entéricos. Dos patógenos
Salmonella asociados con antibióticos, Salmonella
enterica serovar Typhimurium (S.
Typhimuriu typhimurium) y Clostridium difficile,
utilizan una estrategia común de
m catabolizar los carbohidratos de la
mucosa liberados por microbiota
durante su expansión dentro del
intestino.
 • S. typhimurium accede a la mucosa y al
ácido siálico dentro de la luz del
intestino de una manera dependiente
Salmonella de la microbiota, y la ablación genética
de las respectivas vías catabólicas
Typhimuriu reduce su competitividad in vivo. De
manera similar, la expansión de C.
m difficile se ve favorecida por la
elevación inducida por microbiota de
los niveles de ácido siálico in vivo.
 • La colonización de ratones
gnotobióticos con un mutante de
Bacteroides thetaiotaomicron
Salmonella deficiente en sialidasa, un simbionte
intestinal modelo, reduce los niveles de
Typhimuriu ácido siálico libre dando como
resultado que C. difficile regule a la
m baja su vía catabólica de ácido siálico y
exhiba una expansión deteriorada.
 • Estos efectos son revertidos por la administración dietética exógena de
ácido siálico libre. Además, el tratamiento con antibióticos de ratones
convencionales induce un aumento en el ácido siálico libre y los
Salmonella mutantes de Salmonella y C. difficile que no pueden catabolizar el ácido
Typhimurium siálico exhiben una expansión deteriorada.
MODULANDO EL PAISAJE METABÓLICO
DEL INTESTINO
 EC
OS A FA
IST VO
EM R D
SA
LU A IN E UN
DA TE
B L ST
E IN
DIETA A L

PATÓGENOS ENTÉRICOS MICROBIOTA INTESTINAL

 DETERMINACIÓN DE LA
SUSCEPTIBILIDAD AL CDI

GRAVEDAD DE LA
ENFERMEDAD

PROTECCIÓN CONTRA EL
CDI EN RATONES

Efectos inhibitorios de los carbohidratos

accesibles por microbiota (MAC) en el ajuste
de C. difficile al cocultivar C. difficile con
Bifidobacterium spp. o en presencia de un
cultivo complejo de microbios fecales
 CAMBIOS SIGNIFICATIVOS EN EL
NÚMERO / FUNCIÓN DE LA MICROBIOTA
INTESTINAL

MAC CONSUMO DE
MOCO INFLAMACIÓN INTESTINAL
DEPENDIENTE DE LA MICROBIOTA

PLASTICIDAD COMPOSICIONAL Y LA FLEXIBILIDAD METABÓLICA DE ESTA DENSA

POBLACIÓN MICROBIANA MODIFICADA POR EL APORTE DIETÉTICO

LA MANIPULACIÓN DE LOS MAC PUEDE MODULAR EL ESTADO DE LOS

PATÓGENOS ENTÉRICOS, INCLUIDO C. Difficile.

SIN EMBARGO, QUEDA POR DETERMINAR EN QUÉ MEDIDA LAS

INTERACCIONES CENTRADAS EN MAC SON RELEVANTES PARA C. Difficile EN EL
CONTEXTO DE ECOSISTEMAS MICROBIANOS COMPLEJOS ASOCIADOS AL
HUÉSPED.
Síntesis y
avance
Modelo metabólico-céntrico C. difficile produce toxina para catalizar un cambio en el paisaje
para la patogénesis C. difficile nutritivo a uno que favorece su propio crecimiento

Dentro del ecosistema

intestinal depende de la
disliosis
ausencia de
inflamación
toxina-
mediada

Producción de toxinas es una

respuesta a la dinámica
dentro de un entorno
rápidamente cambiante
 Un modelo del metabolismo-céntrico para el rango de C. estilos de vida difficile dentro del intestino distal. Toxigénico C.
difficile puede persistir en una gama de ambientes en el intestino distal. El trabajo futuro para dilucidar los mecanismos
subyacentes a estos estados servirá de base para el desarrollo de nuevas intervenciones para la mitigación del CDI. (a) La
microbiota de un humano sano puede o no contener C. difficile toxigénica. En individuos colonizados asintomáticamente,
los papeles desempeñados por C. difficile en el ecosistema intestinal siguen siendo poco claros. (b) La displiosis resultante
de una perturbación exógena (p. ej. antibióticos) permite la colonización C. difficile y/o el crecimiento en el intestino distal
en ausencia de producción de toxinas. En esta etapa, el ecosistema intestinal puede volver a un estado estable sano o C.
difficile puede expresar las toxinas glicosilantes grandes TcdA y TcdB. (c) C. toxinas difíciles conducen a la inflamación en el
ambiente del intestino distal y son responsables de la enfermedad C. difficile-mediated. Los mecanismos por los cuales
esta inflamación favorece a C. difficile siguen siendo poco claros, pero pueden implicar un uso directo (p. ej. privilegiado
de fuentes de carbono oxidadas o aceptadores de electrones) o efectos indirectos (p. ej. composición alterada de la
comunidad que permite una ventaja competitiva para los nutrientes existentes). El objetivo de la intervención terapéutica
en el contexto del CDI sintomático es facilitar el paso de un estado enfermo a un estado sano. Esto puede ocurrir ya sea a
través de un estado disbiótico intermedio transitorio (p. ej. tratamiento antibiótico) o evitando la disliosis a la estabilidad
(‘smart’terapéutico dirigido patógeno o sus factores de virulencia, p. ej. el compuesto selenoorgánico Ebselen [49]). Se
pueden tomar medidas profilácticas (p. ej. consumo de MAC dietético o agentes anti-virulencia dirigidos) para favorecer el
estado microbiota saludable en todos los individuos, especialmente aquellos en riesgo de desarrollar CDI.
C. difficile se expandirá exitosamente dentro del intestino, el virulento C. difficile puede depender de la producción
de toxinas para crear inflamación que inhiba a sus competidores o genere nuevas fuentes de nutrientes.

Bebés y adultos
sanos que son
portadores
asintomáticos de
C. difficile
El esclarecimiento de los mecanismos moleculares en el contexto de la
dinámica del ecosistema y el paisaje de nutrientes ayudará a
desarrollar terapias novedosas que aprovechen los microbios y las
moléculas para mejorar la gestión de C. difficile.