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MICROBIOLOGÍA

Definición de Microbiología

• Ciencia que estudia los microorganismos (MO), cuyo tamaño se


encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano (<
100u)
• Definición implica que su objeto de estudio está determinado
por la metodología:
• Microscopio
• Técnicas de cultivo puro en laboratorio
Descubrimiento de los microorganismos

• Antonij van Leeuwenhoek:


• Microscopio simple
• Descubrimiento de los microorganismos
(“animalículos” en agua de estanque, 1673)
• Describe bacterias
• Describe protozoos
Primeros dibujos de bacterias (Leeuwenhoek)

Microscopio compuesto de Robert Hooke


Clasificación de los microorganismos

Antes del descubrimiento de los MO se creía que los


seres vivos conocidos eran animales y plantas. Los reinos
animal y vegetal podían separarse de forma precisa;
mientras que los conocimientos sobre los MO eran
escasos.
Para evitar clasificaciones arbitrarias, Ernest
Haeckel, en 1866, propuso el reino de los PROTISTAS, que
incluía a las algas, hongos, protozoarios y bacterias.
Microbiología
Haeckel, Ernest

Protistas
Tipos de microbios

• Acelulares:
Virus, viroides, priones

De célula procariota: Archea,


bacterias, rickettsias,
micoplasmas, clamidias.

• De célula eucariota:
Protozoos, algas, hongos
Historia de la Microbiología

• Historia. Las grandes controversias del siglo


XIX y su resolución
El debate sobre la generación espontánea
• Ideas asumidas desde Aristóteles (384 a.C)
• Redi (1668): experimentos que descartan la generación espontánea de
animales
• “Omne vivum ex ovo”
• Pero aún no se acepta “Omne vivum ex vivum”
• La disputa entre Spallanzani y Needham
• Los experimentos se interpretan erróneamente (Needham) como que
al calentar los frascos el aire pierde su “fuerza vital”
Pasteur zanja la polémica sobre la generación espontánea

• Experimentos con frascos abiertos al aire dotados de


largos cuellos curvados (“cuellos de cisne”).
• Una vez llevados a ebullición, no aparecen
microorganismos si el frasco no se mueve
• Aparecen microorganismos si el líquido alcanza el
cuello curvo
• “Trampas” para capturar microorganismos
Avances técnicos: cultivo puro

• Dos teorías sobre forma de microorganismos: pleomorfismo y


monomorfismo
• Su resolución dependió de cultivos puros (laboratorio de Robert Koch)
• Medios sólidos a base de rodajas de patata
• Medios sólidos a base de gelatina
• Medios sólidos a base de agar-agar
• Petri (en el laboratorio de Koch) inventa la placa que lleva su nombre
• Medios de enriquecimiento y medios diferenciales (Beijerink,
Winogradsky)
Avances técnicos: microscopios y técnicas
de tinción

• Koch colabora con la industria alemana del vidrio (Schott) y pide ayuda a
expertos en óptica (Abbé, Zeiss)
• Lentes acromáticas mejoradas
• Iluminación inferior con condensador.
• Objetivo de inmersión (1878)
• Koch colabora con industria química BASF:
• Tinciones para observar bacterias (azul de metileno, fuchsina, violeta de genciana,
etc), 1877 y siguientes
• Ziehl y Neelsen: tinción diferencial AAR (1883)
• Hans C. Gram: tinción diferencial Gram (1884)
Papel de los microorganismos en
las enfermedades infecciosas
Periodo especulativo (Teológica)

• La humanidad conoce las actividades microbianas sin saber


nada de los microorganismos

Periodo especulativo (Miasmático)


“miasmas”
• Lucrecio (s. I aC): “semillas de enfermedad”
• Fracastorius (1545): gérmenes vivos invisibles
• Alimentos y bebidas fermentados (queso, leches fermentadas, vino,
cerveza, etc.)
Papel de los microorganismos en las
enfermedades infecciosas

Periodo microbiano

• Pasteur resuelve una enfermedad del gusano


de seda (pebrina). En 1869 identifica al
protozoo Nosema bombycis
• El cólera aviar (Pasteurella multocida)
• Trabajó en la rabia
Papel de los microorganismos en las
enfermedades infecciosas
Koch (1876): con su técnica de cultivo puro aísla y propaga
experimentalmente por primera vez una bacteria patógena
responsable del carbunco
Primeras microfotografías de Bacillus anthracis teñido con
azul de metileno
Confirma que esta bacteria presenta una fase resistente
(endosporas)
La enfermedad se puede reproducir experimentalmente al
reinocular bacilos a animales de laboratorio
Postulados de Koch (1882)

• La enfermedad es causada por un patógeno determinado


• El patógeno debe aislarse del huésped enfermo en cultivo
puro
• El patógeno crecido en cultivo puro, al inocularse en
individuos sanos, induce en ellos la enfermedad
• De estos individuos ya enfermos, se puede volver a reaislar el
mismo patógeno.
La escuela de Koch aísla numerosos agentes patógenos

• Cólera (1883) Vibrio cholerae


• Difteria (1884) Corynebacterium diphtheriae
• Tétanos (1885) Clostridium tetani
• Neumonía (1886) Streptococcus pneumoniae
• Meningitis (1887) Neisseria meningitidis
• Peste (1894) Yersinia pestis
• Sífilis (1905) Treponema pallidum
Desarrollo de la asepsia

Joseph Lister, introduce el uso del fenol y de sales


de mercurio (asepsia en quirófano)
Desarrollo de la quimioterapia

Paul Ehrlich: idea de las “balas mágicas”


• Colabora con industria química y descubre el salvarsán 606,
contra la sífilis
Desarrollo de la antibioterapia

• Fleming (1929): extracto crudo de penicilina (del hongo


Penicillium notatum)
• Chain y Florey (1939): purificación penicilina. Uso en 2ª Guerra
Mundial
• Waksman (1944) Descubrimiento estreptomicina de
Streptomyces griseus
• Tras la Guerra, se descubren numerosos antibióticos, producidos
sobre todo por Actinomicetos
Desarrollo de la antibioterapia
Trabajos en microbiología
1673 - van Leeuwenhoek Descubrimiento de microorganismo
1798 - Jenner Vacunación contra la viruela
1864 - Pasteur Fin de la controversia de la generación espontánea
1881 - Koch Métodos de cultivo axénico
1884 - Koch Postulados de Koch
1884 - Gram Método de la tinción de Gram
1889 - Winogradsky Concepto de virus
1929 - Fleming Descubrimiento de la penicilina
1944 - Avery et al DNA es el material genético
1946 - Tatum & Lederberg Conjugación bacteriana
1953 - Watson, Crick & Franklin Estructura del DNA
1977 - Woose & Fox Descubrimiento de las Archaea
1981 - Prusiner Caracterización de los priones
1985 - Mullis Descubrimiento de PCR
1995 - Venter & Smith Secuencia completa de un genoma bacteriano
(Haemophilus influenzae)
2010- Venter Creación de una bacteria sintética.
BACTERIA: Tamaño y forma agrupaciones
bacterianas
Tamaño de los procariotas

• Por lo general, más pequeño que el de las células


eucarióticas
• Pero existen bacterias
• Gigantes (≥0,5 mm)
• Enanas (<0,1 micra)
• Un tamaño “típico”:
• 3 micras
TAMAÑO DE LA BACTERIA

Escherichia coli
(1,000 x 300 nm)

Célula Roja Sanguínea


(10,000 nm de diámetro)

2,500 nm
750 nm

Ribosomas
bacterianos
(25 nm)
Poxvirus
(200 x 300 nm)

Poliovirus
(30 nm)

Bacteriofago T4
(50 x 225 nm)
Bacteriofago MS2
(24 nm) Virus del Mosaico
del tabaco
300 nm
(15 x 300 nm)
Tamaño pequeño:
consecuencias metodológicas

• Hay que recurrir a microscopios y normalmente a


tinciones
• La inmensa mayoría de los estudios se realiza con
poblaciones enormes, de las que se sacan
“promedios”
• Es muy raro estudiar un individuo cada vez
Formas típicas
• Cocos
• Bacilos
• Espirilos
• Vibriones
• Otras formas:
• Filamentos
• Anillos casi cerrados
• Con prolongaciones (prostecas)
Agrupaciones bacterianas
• Un solo plano de división
• De dos células:
• Diplococos
• diplobacilos
• Cadenetas de varias células
• estreptococos,
• Estreptobacilos
• Dos o más planos de división (en cocos)
• Dos planos perpendiculares: tétradas
• Tres planos ortogonales: sarcinas (paquetes cúbicos)
• Muchos planos aleatorios: estafilococos
ESTRUCTURAS DE LA CÉLULA
PROCARIÓTICA

• Pared celular*
• Membrana citoplasmática*,
• Citoplasma, incluye: genoma (nucleoide) ,
constituido por un cromosoma*, ribosomas*
• Pueden existir, además: cápsula, plásmidos, flagelos,
fimbrias (= pelos), espora
La pared celular procariota

La pared celular está constituida por la MUREINA o


PEPTIDOGLUCANO:
En Gram positivas grueso (95%)
En Gram negativas delgado (5%)

La mureína, está representada por AMINOAZÚCARES:


N-acetil Glucosamina
N-acetil Murámico
Una cadena tetrapeptídica
L-ala  D-glu  m-DAP  D-ala
Pared
celular
Peptidoglucano: composición química
• La unidad disacarídica que se repite es:
• N-acetilglucosamina (NAG)...
• ...unida por enlace β(14) con...
• ... N-acetilmurámico (NAM)
• Las distintas unidades disacarídicas se unen entre sí mediante enlaces
β(1—4)
• Este enlace puede ser roto por la lisozima
• La cadena tetrapeptídica sale desde el grupo –COOH del lactilo de cada
NAM y suele ser:
• L-ala  D-glu  m-DAP  D-ala
El PG de bacterias Gram negativas

• Normalmente:
• 1 capa de PG.
• Malla floja con grandes “poros”: 50% NAM carece
de tetrapéptidos
• En espiroquetas, el aminoácido en posición Nº 3 es la
L-ornitina (en lugar de m-DAP)
Estructura global del PG de bacterias Gram-positivas

• Múltiples capas de PG (distintos niveles, hasta 50 en especies


de Bacillus)
• Entrecruzamientos entre cadenas del mismo nivel y entre un
nivel y el inmediato superior o inferior
• La mayoría de NAM tienen tetrapéptidos
• La mayoría de tetrapéptidos participan en enlaces
• Consecuencia: red tridimensional gruesa, con poros pequeños,
más compacta que Gram-
Funciones del peptidoglucano
• Condiciona la forma celular
• Gran rigidez  aguanta las fuerzas osmóticas del protoplasto (5-15
atm). Rigidez viene de:
• El grado de entrecruzamiento
• El enlace β(14) es muy compacto. La alternancia de NAM y NAG
 uno de los polisacáridos más estables que existen
• La alternancia de aa en L y en D  estabilidad adicional (cadenas
laterales al mismo lado, puentes H)
• Es muy permeable
• Como endotoxina, antígeno somático “O” en G(-)
Pared de las bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR)

• Pared especial de ciertas Gram-positivas: Nocardia,


Mycobacterium
• Resisten la decoloración con clorhídrico-etanol ( ácido-
alcohol resistentes)
• Esta propiedad deriva de:
• Ácidos micólicos (ceras)
• Glucolípidos
Ácidos micólicos

• Son ß-hidroxiácidos grasos ramificados en α, de cadena


muy larga

• Forman parte de un esqueleto muy peculiar de la pared


celular:
• PGarabinogalactanoácidos micólicos
Papeles conferidos por la pared BAAR
• Aspecto y consistencia cérea de las colonias en placas de Petri
• En líquidos crecen formando grumos
• Gran impermeabilidad
• Resistencia a desecación
• Resistencia a agentes antibacterianos
• Detergentes
• Oxidantes
• Ácidos y bases
Membrana citoplasmática
Nucleoide

Representado por el
cromosoma de la
bacteria (ADN), de
tira única y circular
Ribosomas

Son complejos macromoleculares


de proteínas y ARN presentes en
todas las células (excepto en los
espermatozoides). Son los centros
celulares de traducción que hacen
posible la expresión de los genes.
Es decir, se encargan de sintetizar
proteínas a partir de la
información.
Polirribosomas

Los polirribosomas o polisomas, permiten que un mismo


ARNm sea traducido por varios ribosomas en forma
simultánea, obteniéndose varias “copias” de una misma
proteína al mismo tiempo.
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Plásmido

Elementos genéticos (ADN)


extracromosómicos con
capacidad de replicación
autónoma
Espora

Cuerpos esféricos, ovoides refringentes incluidos en la


célula vegetativa (célula madre).
Constituidos por iones Ca++ y ácido dipicolínico, que le
confieren elevado poder de resistencia a las condiciones
hostiles
Pueden ser deformantes o no deformantes
ESPORULACIÓN
Bacteria Septación ENDOCITOSIS
vegetativa asimétrica

FORMACIÓN DE
LA ENDOSPORA

Lisis célular. Síntesis de Formación del


Liberación de la cubierta cortex
la espora
Flagelos Lofotricas

Son largos filamentos extracelulares,


helicoidales, compuestos por flagelina.
Es antigénico (antígeno flagelar o “H”)

Monotricas Peritricas
Fimbrias

Son apéndices filamentosos rectos y rígidos, más cortos y


más finos que los flagelos, compuestos por la pilina
Existen dos tipos principales de pili: adhesivas y sexuales
Cápsula
• Composición química
• cápsulas polisacarídicas
• heteropolisacáridos neutros (levanos,
dextranos, pentanos, celulosa)
• alginatos
• cápsulas polipeptídicas (en Bacillus)
• Constituyen el antígeno capsular K
Cápsula

• Las capas mucilaginosas son flexibles y


periféricas
• Glucocálix: capas superficiales
compuestas de polisacárido
• Cápsulas en sentido estricto son rígidas e
integrales
Papeles y propiedades generales
conferidos por la cápsula

• Mejora difusión de nutrientes


• Protección contra la desecación
• Evita la fagocitosis
• Protección contra agentes antibacterianos
• Adhesión a sustratos
Reproducción

Se reproducen por
bipartición o fisión binaria, en
la que a partir de una célula
madre se originan dos
células hijas idénticas a la
primera. El tiempo requerido
para formar 2 células a
partir de una se denomina
tiempo de generación, que
puede ser de minutos, horas
o días.