Detección de Salmonella

en alimentos
Aguirre Coria Claudia
Corona Leo Lizbeth Sandra
Olvera Rodríguez Carlos
Flores Juárez Geovani
Espinosa Monsalvo Maribel
Objetivo:

Conocer las técnicas más comunes para la

detección de estos microorganismos patógenos.

Medios que se utilizaran:

• Agua peptonada.
• Caldo lisina desoxicolato XLD.
• Agar verde Rapapport Vassiliadis.
• Agar xilosa brillante.
 Medios para la identificación
bioquímica.

• Agar triple azúcar hierro TSI.

• Agar lisina descarboxilasada LIA.
• Agar citrato de Simmons.
• Caldo urea.
Procedimiento
1.-Preenriquecimiento:

Transferir 25g o 25ml del matraz con 225ml de agua

peptonada, incubar a 35º C durante 24 h.

Agua peptonada

•Asegura a mantener el pH durante 24horas, lo que

sumado al período de incubación permite el incremento de
células que son sensibles a la disminución del pH.
•A éstos medios se les puede adicionar sustancias que
contrarresten las sustancias inhibidoras que están
presentes en algunos alimentos; asimismo se debe
asegurar el pH que es un factor muy importante para el
crecimiento de Salmonella.
2.-Enriquecimiento:

Transferir 0.1ml del cultivo anterior a un tubo con 9.9ml

de caldo Rapapport Vassiliadis.
Incubar 24 h a 42 º C.

Caldo Rapapport Vassiliadis

• Las peptonas proporcionan los nutrientes necesarios

para el desarrollo del microorganismo.
• El cloruro de sodio ayuda a mantener el equilibrio
osmótico.
• El verde de malaquita y el cloruro de magnesio,
favorecen el crecimiento de Samonella.
• El fosfato de potasio controla el pH del medio.
3.- Aislamiento:

Sembrar por estría simple dos placas de agar XLD Y

BGA. Incubar 24 h a 37 º C.

Precipitado negro en el Las colonias típicas de

centro de las colonias Salmonella son
agar XLD traslúcidas, ligeramente
rojas a rosa con halo rojo
brillante.
 Agar xilosa lisina desoxicolato XLD
• La presencia del desoxicolato de sodio es el agente que
inhibe a los microorganismos Gram positivos.
• La xilosa es fermentada por casi todos los microorganismos
entéricos a excepción de Shigella.
• La lactosa y la sacarosa inducen la producción de ácido por
los coliformes.
• El tiosulfato de sodio y el citrato férrico de amonio constituyen
el sistema indicador de la formación de ácido sulfhídrico
produciendo un precipitado negro en el centro de las
colonias.
• Escherichia coli, Klebsiella, Enterobacter y algunas especies
Proteus pueden utilizar mas de un carbohidrato y producen
colonias amarillo brillante.
• El género Salmonella desarrolla colonias rojas con centro
negro por la producción de ácido sulfhídrico.
• Shigella, Providencia, y algunas especies Proteus no utilizan
ningún carbohidrato y desarrollan colonias traslucidas.
Citrobacter desarrollas colonias amarillas con centro negro.
 Agar verde brillante BGA

• Medio selectivo para el aislamiento de Salmonella

(excepto S. Tyfhi y Shigella)
• La selectividad de este medio, se basa en la concentración
del verde brillante, que inhibe las bacterias Gram positivas y
la gran mayoría de los Gram negativos.
• La lactosa y la sacarosa permiten diferencia la flora
acompañante lactosa positiva y lactosa negativa-sacarosa
positiva, basándose en características de Salmonella de no
degradar dichos carbohidratos.
• Las colonias típicas de Salmonella son traslúcidas,
ligeramente rojas a rosa con halo rojo brillante.
• Los organismos fermentadores de lactosa y sacarosa que
desarrollan en el medio se diferencian fácilmente por la
formación de colonias amarillo verdosas rodeadas de una
zona amarillo verdosa intensa.
4.- Identificación bioquímica:

Seleccionar al menos 2 colonias típicas sospechosas que se

encuentren bien aisladas de cada placa. Transferir con un asa
cada colonia seleccionada a la siguiente serie de tubos.

• Agar TSI: Sembrar por picadura en el fondo y por estría en la

superficie.
• Agar LIA: Sembrar por picadura en el fondo y por estría en la
superficie.
• Agar Citrato de Simmons: Sembrar por picadura el fondo y
por estría el la superficie.
• Caldo urea: Inocular el caldo.

Incubar todos los tubos de pruebas bioquímicas a 35o C por 24 h.

comprobar los resultados de las pruebas con la tabla de
resultados de los microorganismos enteropatógenos.
 Agar triple azúcar de hierro TSI

• Para diferenciación de Enterobacterias basándose en

las capacidad para utilizar la glucosa, lactosa y sacarosa
los cual permite el reconocimiento y exclusión del
genero Proteus. Se puede observar formación de
sulfuros.
• La fermentación de la lactosa y sacarosa se observa en
la superficie y de la glucosa en el fondo, con formación
de ácido que se manifiesta por cambio de color del
indicador Rojo de fenol que vira de anaranjado rojizo a
amarillo.
• La combinación del citrato férrico de amonio y tiosulfato
de amonio permite la detección de sulfuro de hidrogeno
por la formación de un precipitado negro.
 Agar lisina descarboxilasa LIA
• La peptona de gelatina funciona como soporte de crecimiento,
el extracto de levadura proporciona la fuente de vitaminas
necesarias y la dextrosa el carbohidrato fermentable.
• En este medio se observa la fermentación de glucosa,
producción de ácido sulfhídrico, la descarboxilación u
desaminación de la lisina.
• Los microorganismos tienen enzima descarboxilasa,
descarboxilan el aminoácido lisina a cadaverina (amina
primaria, liberando CO2) , debido a la alcalinidad, el pH se
modifica con los siguientes resultados: La prueba se
considera POSITIVA si la coloración en el fondo se observa
morada o violeta-púrpura.
• NEGATIVA si la coloración en el fondo es amarilla y la
superficie permanece del color del medio, ya que solo hay
fermentación de glucosa.
• La desaminación de la lisina a ácido cetocarbónico, este forma
compuestos pardo-rojizos en el pico de flauta del medio con la
sal de hierro y por la acción del oxigeno.
• La formación del ácido sulfhídrico da una coloración negra
debida al sulfuro de hierro producido.
 Agar Citrato de Simmons

• Para la identificación de
Enterobacterias, basándose en el
citrato como única fuente de
carbono.
• El cloruro de sodio mantiene el
equilibrio osmótico del medio.
• Cuando las bacterias utilizan el
citrato, el medio se alcaliniza y
cambia de color inicial verde
(neutro), que esta dado por la
presencia de azul de bromotimol
a color azul (alcalino, prueba
positiva)
• La reacción negativa se
manifiesta por la ausencia de
crecimiento y no hay cambio de
color.
 Caldo urea
• Utilización de urea como fuente de
carbono.
• La enzima ureasa hidroliza la urea en
amoniaco y anhídrido carbónico, ante la
variación del pH por la alcalinización el
indicador Rojo Fenol, vira de amarillo
claro a ligeramente rosado o rosa
mexicano.
• Se utiliza solamente para la detección de
la ureasa en especies del género
Proteus.
• Si los nutrientes suministrados por el
extracto de levadura se consumen antes
que la bacteria muestre crecimiento no
podrá determinarse con exactitud su
capacidad de hidrolizar urea.
• Pero si es capaz de hidrolizar la urea,
pero no utilizar el amoniaco como fuente
de nitrógeno, no se produce crecimiento
y puede dar un falso negativo.
 Caldo Rapapport Vassiliadis

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA

• Cloruro de magnesio hexahidratado. 29.0

• Peptona de caseína. 4.0
• Cloruro de sodio. 8.0
• Peptona de soya. 1.0
• Fosfato monobásico. 0.4
• Verde de malaquita. 0.036
 Agar xilosa lisina desoxicolato XLD

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA

• Agar. 13.5 • L-Lisina. 5.0

• Citrato férrico. 0.8 • Rojo fenol. 0.085
• Cloruro de sodio. 5.0 • Sacarosa. 7.5
• Desoxicolato de Na. 2.5 • Tiosulfato de Na. 6.8
• Extracto de levadura 3.0 • Xilosa. 3.5
• Lactosa. 7.5
 Agar verde brillante BGA
FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA

• Agar. 20.0 • Peptona especial. 10.0

• Cloruro de Na. 5.0 • Rojo de fenol. 0.08
• Extracto de carne.3.0 • Sacarosa. 10.0
• Lactosa. 10.0 • Verde brillante. 0.0125
 Agar triple azúcar de hierro TSI

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA

• Agar. 13.0 • Rojo de fenol. 0.025

• Cloruro de Na. 5.0 • Sacarosa. 10.0
• Dextrosa. 1.0 • Sulfato de hierro y
• Lactosa. 10.0 amonio. 0.2
• Peptona especial. 20.0 • Tiosulfato de Na. 0.2
 Agar lisina descarboxilasa LIA
FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA

• Agar. 13.5
• Citrato férrico de amonio. 0.5
• Dextrosa. 1.0
• Extracto de levadura. 3.0
• L-Lisina. 10.0
• Peptona de gelatina. 5.0
• Púrpura de bromocresol. 0.02
• Tiosulfato de Na. 0.04
 Agar Citrato de Simmons
FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA

• Agar. 15.0
• Azul de bromotimol. 0.08
• Citrato de Na. 2.0
• Cloruro de Na. 5.0
• Fosfato dihidrogenado de amonio. 1.0
• Fosfato dipotásico. 1.0
• Sulfato de magnesio. 0.2
 Caldo urea

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA

• Extracto de levadura. 0.10

• Fosfato monopotásico. 9.10
• Fosfato disódico. 9.50
• Rojo de fenol. 0.01
• Urea. 20.0