HERRAMIENTAS DE LA BIOLOGÍA

MOLECULAR EN LA EDICIÓN
GENÉTICA

Manuel J. Carrasco Ch.

Biólogo Genetista Biotecnólogo - UNMSM, Lima, Peru
PhD. Student – GMU, VA, US
Microfluidic Single Cell Analysis Laboratory in Engineering (µ-SCALE)
Krasnow Institute for Advanced Study
manyucch@gmail.com
TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR A
ABORDAR
En general se denomina así a todas las técnicas de
laboratorio que se usan para aislar Ácidos nucleicos al
extraerlos con cierto grado de pureza, visualizarlos para ver
su integridad, cortarlo y/o pegarlo (Principios de la
Ingeniería genética), amplificar una región especifica o
inespecífica de interés (PCR) y su posterior digestión
enzimática (clonación), ligación, etc.
Se debe recalcar que existen muchas mas técnicas en este
campo y en muchos otros.
EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS
Los Ácidos Nucleicos son las biomoléculas
portadoras de la información genética. Son
biopolímeros, de elevado peso molecular,
formados por otras subunidades
estructurales o monómeros, denominados
Nucleótidos.
El aislamiento del DNA es uno de los
primeros pasos en la Ingeniería genética,
Medicina forense, Bioinformática,
Nanotecnología, Antropología, etc.
EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS
PRINCIPIOS DE LA EXTRACCION DE
ACIDOS NUCLEICOS
Homogenización

Lisis celular

Disociación

Extracción

Precipitación

Redisolución
Reacción en Cadena de la Polimerasa
(PCR)
Es la amplificación de ADN in vitro por medio de la
polimerización en cadena del ADN utilizando una maquina
llamada termociclador.
Es un método para la amplificación exponencial selectiva
de una región especifica dentro de una molécula de ADN.
Se puede realizar la amplificación de un segmento
especifico de ADN teniendo incluso poco material
disponible.
COMPONENTES
NECESARIOS
PARA UN PCR
OPTIMO
Pasos de la técnica de PCR
Las cadenas de ADN son
separadas en dos hebras
sencillas.
Los primers se unen
por complementariedad
a las cadenas molde,
de acuerdo a su Tm.

La enzima Taq polimerasa,

adiciona los nucleótidos
correspondientes en las nuevas
cadenas sintetizadas por
complementariedad de pares
de bases.
ELECTROFORESIS
La electroforesis es una técnica usada para la separación de
moléculas según la movilidad de éstas en un campo eléctrico.
​ ​La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de
un soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de
celulosa), a través de una matriz porosa (electroforesis en gel), o
bien en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la
técnica que se use, la separación obedece en distinta medida a
la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.
Los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad, eficacia,
poder de resolución y versatilidad.
 PRINCIPIOS DE LA
ELECTROFORESIS
Es una técnica de separación que consiste en el transporte de
iones a través de una disolución por acción de un campo
eléctrico.
 fuente de cable
EQUIPO
alimentación

cátodo
ELECTROFORÉTICO
ánodo
- muestra + Componentes:
electrodo
electrodo gel * Fuente de alimentación

* Dos electrodos
cubeta (E. horizontal)
tampón ánodo (+)
electrodo muestra cátodo (-)
cátodo
- * Cubeta

cubeta * Tampón de electroforesis

cable

ánodo gel * Soporte electroforético

+ (gel)
fuente de
alimentación

(E. vertical)
tampón
ELECTROFORESIS EN
BIOLOGIA MOLECULAR
El uso de geles como medio de soporte en electroforesis,
constituye una alternativa para solucionar algunos problemas
asociados con el uso de papel y de acetato de celulosa como la
adsorción, la difusión y poca resolución de los compuestos
separados.