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HISTORIA DE LA GENETICA

MOLECULAR EN EL MUNDO
Descubrimiento del DNA
siglo XIX
Johan Friedrich Miescher (Suiza, 1844-1895), biólogo y médico suizo

en plena revolución industrial

Cuando era estudiante, a partir de glóbulos blancos de


pacientes, o sus núcleos, tratados con solución salina
acidificada → precipitado gelatinoso que consistía en
sustancia rica en P y N, a la cual llamó nucleína (= el DNA
que llamamos hoy).
No se le atribuyó ninguna función biológica en esa época
A principios del siglo XX, en la Universidad de Columbia, Thomas
Morgan (1866-1945) y sus alumnos comprobaron que los “genes” son
“entes” que se encuentran alineados a lo largo de los cromosomas,
que veían al microscopio, consistentes con los resultados de Mendel, y
elaboraron mapas detallados de los cuatro cromosomas de la mosca
de la fruta.

Morgan recibió el premio Nobel en 1933.


Aportes de la Física
en el Siglo XX
Niels Bohr
físico danés (1885-1962) que realizó contribuciones fundamentales para la comprensión de la
estructura del átomo y la mecánica cuántica. Premio Nobel de Física en 1922.
Reconoció la importancia de las características atómicas, fundamentales en las funciones de los seres vivos:
certificado de defunción del vitalismo

Sin embargo, introdujo la idea de que los conceptos físicos tradicionales no son
suficientes para entender los fenómenos biológicos.
Estas ideas fueron presentadas en una conferencia titulada Light and life (Luz y vida),
en el Congreso Mundial de Luminoterapia en 1932, a la cual asiste Max Delbrück
Mientras tanto, escuelas de pensamiento más biológicas………
experimento pionero de transformación genética (1928!!)

Frederick Griffith (UK)


médico estudioso de la neumonía, atrás Hoy se interpreta así: DNA de cepa dadora (encapsulada, WT) complementó a
de una vacuna (1879-1941) cepa receptora (mutante en algún gen de síntesís de la cápsula) mediante
recombinación homóloga
Max Delbrück (Berlín, nació ya en siglo XX, 1906)

Promotor de las ideas de Bohr, creció en el mismo barrio en que vivía el también físico Max Planck.
Doctor en Física, Universidad de Gotinga, importante polo de desarrollo de la naciente mecánica cuántica. Post-doc
en Dinamarca con Niels Bohr.
Delbrück comenzó a interesarse en la biología gracias a las ideas de Bohr .
Así, un pequeño grupo de físicos y biólogos empezaron a reunirse en la casa de Delbrück desde 1934. A partir de
estas reuniones surgió su corto artículo de1935 en el que proponía una explicación a las mutaciones inducidas por
rayos X con base en la mecánica cuántica, primera teoría de conceptos genéticos en base a principios físicos,
fuente de inspiración a Schrödinger: libro What is life? en 1944.

Gracias a una beca Rockefeller, en 1937 emigró a USA para trabajar con Morgan en Caltech. Sin embargo,
encontró difícil adaptarse a la jerga de los estudiosos de la mosca de la fruta (Drosophila melanogaster), por lo que
empezó a colaborar con Emory Ellis investigando sobre fagos.

Al estallar la Segunda Guerra Mundial, en 1939, Delbrück decidió permanecer en USA, en el Departamento de
Física de la Universidad de Vanderbilt (Nashville, Tennessee) y así conoció al italiano Salvador Luria
(Bloomington, Indiana) y nació el club de los fagos de los 1940s
la idea de “gen” como entidad responsable
de los fenotipos heredables en bacterias
estaba flotando… pero no era formulada
claramente…los experimentos no incluían
estudios químicos

“MUTATIONS OF BACTERIA FROM VIRUS


SENSITIVITY TO VIRUS RESISTANCE”
Salvatore Luria S. E. LURIA and M. DELBRUCK. 1943
Médico radiólogo y no tenían idea en qué consistían las mutaciones
estudiante posgr Física en Roma
y luego en Inst. Curie, de París a
USA (1940, plena II Guerra, Mussolini) además descubrieron la “restricción” de los
interesado igual que Barbara McClintock en fagos de multiplicarse en cepas bacterianas
efectos biológicos de rayos X funda el diferentes de la original: concepto
“club de los fagos” junto a antecesor (30 años) al de los sistemas
enzimáticos de modificación/restricción
Delbrűck y Hershey : las
(= escudo/armamento).
bacterias exhiben fenotipos,
detectados por selección
artificial, resultado de cambios
(mutaciones) que ocurren
ocasionalmente (10-9)
pre-adaptativos, heredables
los tres premios Nobel 1969
la idea del gen en el DNA estaba flotando….
Oswald Avery, (1877-1955). Médico e investigador canadiense, estudió en la Columbia Univ y trabajó en el
hospital del Instituto Rockefeller, NY, USA. Uno de los primeros biólogos moleculares

Repitió el experimiento de Griffith con lisados de bacterias transformantes pero previamente


digieriendo enzimáticamente azúcares, proteínas y RNA.
En 1944: el principio transformante era DNA!! (simultáneo con el libro de Erwin
Schrödinger “¿Qué es la vida?”)
entonces los “genes” reportados por el “club de los fagos” estaban hechos de DNA!
y las mutaciones entonces eran cambios en el DNA!
(aunque Delbrűck no citó a Avery luego de 1444)
Erwin Schrödinger
físico austríaco
(1887-1961)

En 1944 publicó un pequeño libro titulado ¿Qué es la vida? (What is life?). Aportó dos ideas
fundamentales:
1) la vida no es ajena a las leyes de la termodinámica.
2) la química de la herencia debe basarse en un «cristal aperiódico», compatible con una
secuencia informativa.

Esta obra menor ha tenido gran influencia en James Watson y en el desarrollo posterior de la
biología molecular.
…por lo tanto, la idea del gen en el ADN ya era
aceptada….pero cuál era su forma?

James Watson (1928-) Francis Crick


UK físico
USA zoólogo
Estructura de proteínas
tesista doctoral de
por rayos X (con
Luria, Ph. D. a los 22 años!:
“X-ray inactivated bacteriophages” Wilkins).
a UK (a aprender Química!: Se le unen Watson y
Peter Pauling en
la estructura del DNA)
Cambridge (1951)
con Max Perutz y Después también con Sidney
luego con Crick Brenner, Mathew Meselson:
concepto de mRNA (1960-1964)
por fin llegó el modelo correcto* de estructura 3-D de DNA
1953
inspirados por el libro de Schrödinger y las reglas (1950) de Erwin Chargaff (Austria, 1905-2002)
*en oposición al modelo incorrecto de Linus Pauling
(padre de Peter) de triple hélice con los fosfatos hacia adentro

regla

1) se fortalece la Biología como una ciencia en la cual “se miden” propiedades


2) el modelo era consistente con una supuesta fiel replicación del DNA
tomando como templado a sí mismo (A-T y C-G)
otros grosos en los 50s y 60s


cigarrillo!

François Jacob y Jack Monod


(con André Lwoff) introdujeron concepto de operones, operadores y
genes reguladores (1958) confirmado luego por Walter Gilbert, que
aisló la proteína represora (1966)
otros grosos en los 60s
Walter Gilbert
Boston, USA (1932- )
purificó el represor lac en 1967
Premio Nobel 1980

Severo Ochoa
España (1905-1933)
descifró el código genético, en USA
Premio Nobel 1959 (junto a su discípulo Arthur Kornberg)
Dijo: “el amor es la fundición de física y química». Joaquín Sabina
reconoce haber tomado de ahí el título para su álbum "Física y
Química".
dato no menor:

todos los brillantes científicos nombrados se


opusieron al régimen nazi imperante en
Europa (1933-1945)
→ la búsqueda de la verdad fue
acompañada de denuncias a la brutal
criminalidad y de sentimientos de
humanidad
y en las décadas siguientes….
los 70s: nacen la Biología y Genética Molecular, en Deptos de
Bioquímica, como las entendemos hoy, con la posibilidad de
manipular y analizar el DNA:
• vectores de clonado
• enzimas de restricción (Werner Arber, premio Nobel 1978)
• técnicas de secuenciación (Maxam-Gilbert; Sanger, Nobel 2 veces)

Descubrimiento de RT por David Baltimore (premio Nobel 1975)


los 80s:
ribozimas (Thomas Cech, premio Nobel 1989)

técnica PCR (Kary Mullis, premio Nobel 1993)


bioluminiscencia

1970s: Osamu Shimomura purificó a partir de la medusa Aequorea


victoria una proteína que, iluminada con luz azul, fluorescía verde :
GFP (Green Fluorescent Protein)

En los 90s, Douglas Prasher secuenció gen GFP , y al quedarse sin


financiamiento, se la envió a Martin Chalfie, quien expresó el gen en
bacterias.

Para su sorpresa, al ser iluminadas con luz azul, las bacterias se


veían verdes y dedujo que la “información” para que GFP fluorezca
estaba contenida en su propia secuencia
fragmento aislado responsable de la absorción del color azul de toda la proteína:
tripéptido Ser65 - Tyr66 - Gly67. Fluoresce sólo en entorno hidrofóbico

Gly Tyr

Ser

• Roger Tsien (1952-2016)

mutaciones al azar en gen GFP y expresar en bacterias: → azules, celestes o


amarillas: Tyr66  His66 azul
Tyr66  Trp66 celeste
Thr203  Tyr203 amarilla

GFP y sus derivadas en la “paleta de colores” extendida por Tsien revolucionaron la


investigación en biología celular y molecular.

en 2008 Shimomura, Chalfie y Tsien premios Nobel en Química.


Prasher, que se vio forzado a dejar la ciencia, trabajaba de chofer de colectivos y se
enteró por la radio
los descubrimientos y avances en las
décadas siguientes (1990s-2010s) los
veremos a lo largo de la
cursada……..
Genética Molecular
¿Qué onda esta materia?
historia de la materia

• 1998 (en su actual formato)

• # aprox alumnos: 1000 alumnos en total


han pasado
objetivos de la materia
• brindar al alumno herramientas conceptuales
• ejercitar el razonamiento en una amplia gama de aspectos de
la Biología Molecular moderna, con énfasis en aspectos
genéticos
p. ej. hablamos de:
• alelos
• recombinación genética
• mutaciones (dominantes vs. recesivas)
• modos de herencia

Priorizamos lograr:
• visión de cómo funcionan las células
• racionalidad en la elección de estrategias y organismos modelo
por sobre variantes de técnicas
• Enfrentar al alumnos con situaciones variadas

¿superposición con la materia Biología Molecular? No


asignaturas cuyos conocimienos
son necesarios

• IBMC
• Genética I
bibliografía

trabajos científicos originales y reviews


recomedados en
página web de la materia (www.fbmc.fcen.uba.ar
link materias, link Genética Molecular)

• cómo se construye el conocimiento de primera mano


• “verdades” no inmutables
organización general
actividades:

1) teóricas
2) seminarios (papers) y problemas de
ejercitación

3) TPs:
Efecto de mutaciones en fenotipo de locomoción
Modelo Drosophila
material didáctico

• Guía de Problemas de ejercitación basados en


papers científicos recientes

• Guía de Seminarios que incluye papers,


recientes (o no tanto, a propósito)

Ambas Guías son actualizadas todos los años.


Para figuras en color, visualizarlas en los archivos subidos al sitio web

Las clases teóricas correspondientes siempre son dictadas con


antelación.
tipos de evaluaciones

• Escritas (2), a libro abierto (60% de la nota


final)

• orales, en grupo (de a 3), exponiendo un


trabajo elegido por los alumnos de cada
grupo (25% de la nota final)

• oral de T.P. : (15% de la nota final)


• contenidos y conceptos más
importantes transmitidos
Origen de la vida
• Oparin, Darwin, Miller… ¿Meteoritos?
• CURIOSIDADES DEL MUNDO BIOLOGICO
PRIMITIVO:
• RNA como primera macromolécula. Ribo-
organismos, modelos de replicación de RNA sin
proteínas, con proto-ribosoma
• Genes con intrones en procariotas y por lo tanto
primitivos, intrones codificantes (RT como proteína
muy ancestral)
• Woese, celulas primitivas, Archeones extremófilos
• Teorías primeros eukas y organelas (hipótesis del
H2)
bloque 1:

Organizacion y evolucion de los


genomas
• Familias génicas, reloj molecular
• elementos repetitivos, junk DNA? desmitificar la
creencia de que no son codificantes p. ej:
• retrotranspones LINES llevan genes codif.
- posibles causas de su relativa inactividad
- ejemplos de enfermedades causadas por ellos
- estrategias para medir retroposición in vivo

• secuencias Alu (origen en primates) se transcriben


Abundancia relativa de elementos de ADN en
Genoma Humano.

Tipo de elemento de ADN %


Genes para proteínas (incl. intrones) 33
Transposones (cientos de miles) 45
Genes de ncARN 1.3
Centrómeros 0.75
Telómeros 0.01
Repeticiones no transcriptas 3
el resto
(se supone regiones intergénicas) 17
retrotransposones: modelos de integración
simultánea a su síntesis por RT: targeted primed reversed
transcription
• Proyectos Genoma en general (mayor énfasis en Humano: Renato
Dulbecco [1914-2012])

• metodología general (virtudes de vectores BACs) y conclusiones


bioinformáticas.
• Técnicas modernas y rápidas: Deep (o highthroughput) sequencing

• Arrays: CGH y para genómica funcional (ej. primates, aportes de


Svante Paabo: Antropología Evolutiva)
Dinamismo del genoma
• Recombinación homóloga e ilegítima. Enfatizar
la usual baja frecuencia de la homóloga
• Reparación de DSBs
• Transposición:
• DNA transposones (Tn, P1 de Drosophila)
• RNA transposones (LINES, retro-like con LTR,
SINES no-autonómos, ej. Alu)

• Similitud de estos tres procesos a nivel bioq.:


corte, ligación, replicación (interfase genética-
bioquímica)
Clonado e identificación de genes
por función o fenotipo

• Complementacion, Tn-tagging, Clonado


posicional (genética reversa) en plantas y
animales
Investigando función fisiológica de
genes clonados
• KO
• En unicelulares: bacterias y levaduras
• En mamíferos: antecedentes de Evans y Kaufman:
• ES cells en cultivo para garantizar recombinación
homóloga targeted de baja frecuencia → necesidad de
selección de ES - KO → quimeras.
Increíble historia de Mario Capecci

• Nuevas tecnologías: Zn finger-nucleasas y CRISPR


Gene editing
Sistema CRISPR – Cas9
bloque 2

Cromatina y epigenética

• Metilasas en citosinas, de novo y mantenimiento


• HATs/HDACs, metilacion en histonas,
metodologia ChIP
• Posicionamiento de nucleosomas y nuevos
conceptos de relación con transcripción y
splicing
• ¿Hay herencia transgeneracional de marcas
epigenéticas adquiridas debidas al
ambiente? (Lamarck?)
seguimos con la epigenética:

• stem cells
• iPSCs logradas por Shinya Yamanaka
seguimos con la epigenética:
Imprinting

Ejemplos de algunos genes sujetos al


fenómeno y de enfermedades
relacionadas.

DMRs, su metilación (o no) en gametas


como marca de futura expresión o no-
expresión en células somáticas.
Modelos de exclusión alélica en cis
modelos
moleculares de
IMPRINTING

for “resetting”: se borra el viejo imprinting


y se establece nuevo imprinting

marcas epigenéticas de marcas epigenéticas


futura no-expresión de
futura expresión
un ejemplo de imprinting:
Inactivacion del cromosoma
X
• trabajos de Jeannie Lee

ratones, placenta, canguros……...


Comprobación experimental del “modelo del
beso” (Jeannie Lee, Science 2006)
• Silenciamiento
TGS relación con epigenética
“paradox of the need for transcription in order to
transcriptionally silence the same region”

PTGS via RNAi maquinarias enzimáticas. Modelos


invertebrados, y plantas (evidencias de que la
señal atraviesa células). El mundo de los RNAs
pequeños
Valoración de científicos pioneros:
Macino, Baulcombe, Hannon
bloque 3

Ciclo celular
• los dos “bandos” de proteínas reguladoras
del ciclo: positivas y negativas
• Telómeros y telomerasas
de insectos: retrotransposones!!
aportes de Elizabeth Blackburn (Nobel 2009) y Tomas Cech
(Nobel 1989)

• Cáncer. Ejercicios de cómo interpretar pathways


bioquímicos para predecir efecto de drogas
terapéuticas
• Virus (DNA y RNA) oncogénicos
Terapia génica,
ejemplo de enfermedades (genes)
target, sobre todo usando vectores
basados en retrovirus
Ciclo de vida
de lentivrus

Ej.: HIV

para entender
retrovirus
defectivos
usados en
terapia génica
producción de partículas infectivas
deficientes en replicación
basadas en retrovirus
diseño con 3
construcciones:
Ψ transgen
LTR gag neo LTR

transfección
transducción

3) transcripción reversa
1) gag pol integración
RNA mRNA
2) env
encapsidación
proteínas RNA de 3 mRNA
virales
VIRION proteína
recombinante

Célula empaquetadora Célula destino


Genética Humana
• Tipos de enfermedades genéticas; causas
monogénicas y multifactoriales
• modos de herencia según la naturaleza de la
mutación: dominantes negativas y por haplo-
insuficiencia; recesivas
• Análisis de pedigrees

• Ejemplos:
• gen FOXP2 (lenguaje), síndromes neurológicos de
Angelman y Prader-Willi
• enfermedades causadas por mutaciones en genes
sujetos a imprinting
Ejemplo:
Beckwith–Wiedemann
syndrome (BWS): ● - se transmite por vía materna

- macroglosia
- hepatomegalia
- tumor de Wilms

CTCF es un aislante transcripcional:


impide la acción a distancia del enhancer
sobre IGF2 (no tiene efecto sobre H19)

Normalmente el alelo paterno


está metilado → CTCF no se pega
→ IGF2 se expresa
región en cromosoma enhancer
11p15 CTC Normalmente el alelo materno
F no está metilado → CTCF se pega →
IGF2 no se expresa

En BWS, el alelo materno tiene una deleción


en DMR → CTCF no se pega →
IGF2 se expresa,
lo cual explica el tumor de Wilms (sobre-
expresión de IGF2 a partir de ambos alelos)
Docentes GM 2018
en teóricas y coordinación general:
Norberto Iusem

en seminarios/problemas:
Liliana Dain
Ezequiel Surace
Micaela Godoy Herz
Matías Blaustein

en laboratorio:
Lucía Chemes
Cecilia Martínez
Marcos Francia
M. Alejandra Petino Zappala

en presentaciones orales:
Natalia Rubinstein

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