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PLANTA MADRE

• Es la planta usada
como fuente de
explantes.
• Se selecciona de
acuerdo a genotipo y
condiciones sanitarias
y fisiológicas.
• Ideal: mantener planta
madre en invernadero
con condiciones
controladas.

Prof. Pamela Ibarra Palma


EXPLANTE
• Parte o porción de
una planta aislada de
una planta madre,
para ser cultivado.
• Los explantes pueden
proceder de material
estéril o material no
estéril.
EXPLANTE/POSICIÓN EN LA
PLANTA MADRE.
• Regeneration can be
influenced by the
position of the
explant on the plant
or by different
physical exposure:
TOPÓFISIS

• Es la variación de
crecimiento del
explante (estaca)
tomadas de
diferentes lugares a lo
largo de una rama.
TOPÓFISIS
• El explante tomado de la zona juvenil
origina plantas que, transitoriamente,
presentan las características
morfológicas y fisiológicas de dicha
zona, mientras que el material tomado
de la parte del árbol ya «adulta”,
produce plantas fértiles.
CICLÓFISIS

• Corresponde al
proceso de
maduración de los
meristemas apicales,
envejecimiento
fisiológico
EXPLANTE/JUVENILIDAD
• Período prolongado que
sigue a la germinación de la
semilla durante el cual la Adulto
planta no florece y no puede
ser inducida a hacerlo
mediante métodos
convencionales.
• Los explantes deben ser
juveniles.
• El grado de juvenilidad de
un meristema apical es Juvenil
inversamente proporcional a
la distancia considerando la
raíz.
PERÍFISIS

• Está referida al
cambio de cualidades
debidas al ambiente.
ASEPSIA
• Avoiding contaminations using
sterilization procedures.
• Esterilización al material vegetal
• Esterilización al medio de cultivo
• Esterilización a los recipientes,
ambiente y al material quirúrgico.
ESTERILIZACIÓN AL MATERIAL
VEGETAL
• EJEMPLO
• Cut the plant material to an appropriate size to fit the
container which will be used during the sterilsation
procedure.
• Rinse plant material under running tap water.
• Shake for a few seconds in alcohol.
• HgCl2 (0.1 - 1%) + Quick 2 drops/100ml: 3-5 min.
• Rinse in autoclaved distilled water.
• Commercial bleach 7-15% + Quick 2 drops/100ml:
10-30 min.
• Rinse several times in autoclaved distilled water.
AGENTES DESINFECTANTES EN
EXPLANTES
Agente Concentración Tiempo (min)
Desinfectante (%)
Alcohol etílico 75 - 95 0,5 – 1

Cloruro de mercurio 0,1 – 1,0 1–5

Hipoclorito de Calcio 7 – 10 5 – 20

Hipoclorito de Sodio 2,5 – 9 5 – 20

Peróxido de 2 - 10 5 - 12
hidrógeno

Barrueto Cid, (2001)


ESTERILIZACIÓN MEDIO
CULTIVO
• Thermostabile
ingredients are
autoclaved;
thermolabile ones
are filter sterilized.
• A través de
autoclavado.
• Usando filtros de
esterilización.
ESTERILIZACIÓN DE FRASCOS
Y OTROS MATERIALES
• Vidrio:autoclavado –
Radiación
• Material desechable:
Radiación.
• Papel: calor seco (estufa
de secado)
• Herramientas de trabajo:
Flameando o por calor.
• Otros: alcohol
• Medio ambiente: usando
cabina de flujo laminar
CONTAMINACIÓN
• Síntomas:
– Virus
– Bacterias
– Hongos
– Micoplasmas
– Microartrópodos
VIRUS
• Trabajar con
material libre de
virus: meristemas.
• Testear planta para
detectar virus.
• Existen 35 familias o
grupos. Sobre 700
virus son
conocidos.
BACTERIAS
• Agrobacterium: 3%
• Bacillus: 13%
• Enterobacter:12%
• Pseudomonas: 19 %
• Lactobacillus: 11%
• Staphylococcus: 26%
• (Leifert & Waites,
1990)
HONGOS: ¿POR QUÉ
APARECEN?
• Esterilización no
adecuada.
• Contaminación
durante la
manipulación.
• Introducción de
esporas.
AMBIENTE FÍSICO DEL
CULTIVO.
• TEMPERATURA.
• LUZ.
• HUMEDAD.
• AMBIENTE
INTERNO DEL
FRASCO.
TEMPERATURA
• Practically it is impossible to optimize temperature
for each specific plant and each specific stage. For
most plants the set point for room temperature
during the day is 22 ± 2°C.

• Temperature in the culture container is higher (up to


5°C) than room temperature due to the greenhouse
effect.
• One of the major problems is to have a uniform
temperature in the culture room.
• Safety device: a maximum thermostat needs to be
installed, which switches off the lights in case of too
high temperature.
LUZ
• La luz es uno de los factores principales que
determinan el desarrollo de los organismos
autótrofos, en ello radica la importancia de
controlar el factor luz en los cultivos in vitro.
• FOTOPERIODO: 16 horas
• INTENSIDAD DE LA LUZ (Irradiación): 30
µmol m-2 s-1(PAR)
• ESPECTRO: depende del tipo de lámpara,
importante es azul/rojo; rojo/rojo lejano
HUMEDAD RELATIVA
• No es controlada en
el cuarto de cultivo.
• En un ambiente
normal dentro del
frasco 100%.
• Se puede controlar:
concentración agar,
ventilación: cierre
frasco.
COMPOSICIÓN GASEOSA
DENTRO DEL FRASCO
• La composición de los gases al interior del
frasco determinada la capacidad de crecimiento
y desarrollo del explante.
• Los factores que pueden hacer variar la
átmosfera son:
– Planta: Especie y estado del cultivo;Flujo de CO2
– Formulación del Medio: líquido o sólido; solubilidad,
fuente de C;balance hormonal.
– Tipo de Frasco: material, estructura, grosor,
permeabilidad.
– Condiciones ambientales: contaminación, Tº,
Evolución del CO2: fase
Multiplicación.
Evolución del Etileno en fase de
Enraizamiento
FLUJO DE CO2
ESTUDIO FLUJO CO2
ALBINISMO:limitado
intercambio de gases
Reducción crecimiento
TIPOS DE RECIPIENTES

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